本发明专利技术提供了一种全面评价婴儿配方奶粉中蛋白质生物质量的体外方法。首先将婴儿奶粉复溶，检测总蛋白和酸水解氨基酸总量，然后经过人工模拟的胃液和肠液消化后，经１０％三氯醋酸沉淀，检测上清液可溶性氮和氨基酸。通过上述检测结果计算蛋白质消化率、必需氨基酸消化率，将上清液中的必需氨基酸总量与ＷＨＯ推荐的模式对比值乘以必需氨基酸的消化率获得修正氨基酸分，然后将蛋白质消化率乘以修正氨基酸分获得的数值确定为蛋白质生物质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种蛋白质生物质量的评价方法，具体地说是一种可以全面评价婴儿配 方奶粉中蛋白质生物质量的体外方法。
技术介绍
婴儿配方粉一般含有酪蛋白和乳清蛋白以确保喂养该配方奶粉的婴儿吸收足够量的氨基 酸，尤其是必需氨基酸。现有的婴儿奶粉能够在营养成分和微量成分上较全面的在量的方面 与母乳达到相同，甚至超过母乳，但在质的方面却有很大差别，主要是蛋白质不易消化，效 价低，易引起婴儿过敏如腹泻、呕吐等。 一些不法厂家为了追求利润，将一些非乳蛋白甚至 淀粉添加到婴儿配方奶粉中，这些蛋白质不易被婴儿消化吸收，严重降低婴儿配方粉的营养 价值。同时，各种加工处理例如，加热处理，蛋白变性或凝聚等都降低了配方粉的消化率。 乳的热处理还增加了氨基酸和糖的美拉德反应，这些反应由于限制了蛋白酶的活性而降低了 氨基酸的可利用率。那么对那些蛋白质量达标而效价低的婴儿奶粉营养价值如何简单而快速 体外评定就显得尤为迫切而必要了。目前，国内外学者对蛋白质价值的评价采取了许多措施。主要的方法包括化学法、微生 物法、动物实验法和体外测定法。其中化学法无法计算不能被人体利用的部分氨基酸，从而 使不同食物的消化率和利用率关系造成了差异。微生物方法繁琐、重现性差目前几乎不被采 用。动物实验法是应用最广泛的方法，但是其较高的成本、复杂的实验过程以及由动物外推 到人体的所带来的局限性限制了其在食品工业中的应用。体外测定法具有具有简便、快速、 经济等优点，几年来被逐步发展起来，国内外对蛋白质的体外评价多集中于动物，如猪、牛、 鸡、鱼等。如张铁鹰利用体外消化技术评定了植酸酶在鸡体内的消化情况，唐茂妍对酶饲料 中的蛋白质的体外消化进行了研究。国内也有少部分人对乳蛋白的体外消化进行了一定的研 究，如陈静利用酶-膜反应器对乳中的蛋白质进行了体外的水解，美国的PW Jones对婴儿食 品中乳蛋白质的质量进行了体外模拟的评价但仅是添加了不同的动物蛋白酶和植物蛋白酶， 没有反映出胃内酸度的变化和胃肠蠕动的速度，而且仅计算出总氨基酸的消化率，无法计算 各氨基酸的消化情况，对于推荐量没有比较。本专利技术建立了一套高效率，低成本的蛋白质体外评定方法。可以准确、快速地评价婴儿 食品中蛋白质的营养价值，从而促进婴儿食品质量的提高，保证婴儿奶粉蛋白效价的快速检 出。体外评价也可用于对新开发的蛋白类产品进行评估和筛选，还可以对食物在体内消化吸 收的研究提供技术平台。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种。 本专利技术的目的是这样实现的-以市售婴儿配方奶粉为处理对象，凯氏定氮法测定奶粉中蛋白质含量后配制成12%液态样 品；取100毫升样品预热并且恒温至37'C，加入含有胃蛋白酶和凝乳酶的胃液，同时以一定速 度搅拌，在0 60分钟内加入不同氢离子浓度的胃液。用lmol/L氢氧化钠溶液调pH为中性后， 再加入胰蛋白酶、凝乳酶和胆盐构成肠液酶，同时以一定速度搅拌，反应2小时后沸水浴灭活， 冷却后取样，加入等体积的10%三氯乙酸沉淀15分钟，离心后取上清液测定蛋白质和氨基酸， 分别得到蛋白质消化率、必需氨基酸消化率、必需氨基酸的修正氨基酸分值，然后计算蛋白 质生物质量。本专利技术还可以包括这样一些特征1、 所述的胃液是由浓度为0.8mg/ml胃蛋白酶，浓度为1.2 mg/ml凝乳酶，浓度为 0.088mol/L H+组成的。2、 所述的肠液酶是由0.8g胰蛋白酶，1. 2g凝乳酶复配然后添加5g胆盐组成。3、 所述的搅拌过程采用蠕动泵完成。4、 所述的胃液添加方式是流加式，具体添加方式如表l所述表l时间加入胃液的速度及量0-10min0时刻加入5ml维持10min10-28min1. 2ml/min加入28-40min0. 9 ml/min加入40-50min0. 6 ml/min加入50-55min0. 3 ral/min加入55—60min0时刻加入5ml维持10min将上清液采用凯氏定氮法测定可溶性蛋白，计算蛋白质的消化率。蛋白质含量采用凯氏 定氮法，色氨酸含量采用荧光法，其余氨基酸含量采用氨基酸测定仪测定。实ft床隨J^上清液中的可溶性蛋白的含量腳/舶质麵化率=附沖总舶舱量xiO线 必需氨基酸消化率-上清，2^ ，，含量x100。/。总氨基酸含量采用如下方法检测称取6-8ml胃液消化前的样品，加入2ml浓度为6mol/L浓盐酸，封口后放在(110土1)。C 的恒温干燥箱中水解22h后，取出冷却。打开水解管，将水解液全部转移到蒸发皿中，在沸 水浴上蒸干，加蒸馏水，再蒸干，残留物用lmL超纯水定容，经0.22um滤膜过滤，滤液采用生物液相法分析氨基酸总量。酸水解会破坏一部分色氨酸，故测色氨酸时采用碱水解，水解完之后用荧光法检测器含必需氨基酸消化率修正的氨基酸分-必需氨基酸消化率x样品中的氨基酸浓度 推荐的氨基酸浓度其中推荐氨基酸浓度如表2所述表2必需氨基酸婴儿参考模式(mg/g)亮氨酸83异亮氨酸41蛋氨酸+胱氨酸29苏氨酸40苯丙氨酸+酪氨酸68赖氨酸53缬氨酸44总必需氨酸358蛋白质生物质量=蛋白质消化率x必须氨基酸消化率修正的氨基酸分(四) 附图说明 图l为本专利技术的工艺流程图(五) 具体实施例方式下面举例对本专利技术作更详细的描述1. 评价样品的处理以市售婴儿配方奶粉为处理对象，测定奶粉中蛋白质含量后配制成12%液态样品；取100毫升样品预热并且恒温至37'C备用。2. 胃液的制备及使用所述的胃液是由浓度为0. 8mg/ml胃蛋白酶，浓度为1. 2 mg/ml凝乳酶，浓度为0. 088mol/L H+组成。按表3所述方法使用表3时间加入胃液的速度及量0-10min0时刻加入5ml维持10min10-28min1. 2ml/min加入28-40min0.9 ml/min加入40-50min0. 6 ml/min力口入50-55min0. 3 ml/min加入55-60min0时刻加入5ml维持10min胃液处理1小时后用1M氢氧化钠溶液调整pH至中性，上述过程用蠕动泵蠕动搅拌完成c 3.肠液酶的制备及使用0. 8g胰蛋白酶，1. 2g凝乳酶复配然后添加5g胆盐组成。将肠液酶添加到胃液处理过的 样品中，蠕动泵搅拌2小时，沸水浴灭活。4. 检测可溶性蛋白和氨基酸加入等体积的10%三氯乙酸，离心后取上清液测定蛋白质和氨基酸，蛋白质含量采用凯氏 定氮法，色氨酸含量采用荧光法，其余氨基酸含量采用氨基酸测定仪测定。总氨基酸含量采 用如下方法检测称取6-8ml胃液消化前的样品，加入2ml浓度为6mol/L浓盐酸，封口后放在(110士1) °C 的恒温干燥箱中水解22h后，取出冷却。打开水解管，将水解液全部转移到蒸发皿中，在沸 水浴上蒸干，加蒸馏水，再蒸干，残留物用lmL超纯水定容，经0.22um滤膜过滤，滤液采 用生物液相法分析氨基酸总量。5. 计算蛋白质生物质量蛋白质的消化率=.上清液中的可溶性蛋白的含量必需氨基酸消化率=样品中总蛋白的含量 上清液中的氨基酸含量:100%xl00%必需氨基酸消化率修正的氨基酸分=必需氨基酸消化率><样品中的氨基酸浓度 推荐的氨基酸浓度其中推荐氨基酸浓度如表4所述表4必需氨基酸婴儿参考模式(mg/g)亮氨酸83异亮氨酸41蛋氨酸+胱氨酸29苏氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
全面评价婴儿配方奶粉中蛋白质生物质量的体外方法，其特征是：首先将婴儿奶粉复溶，检测总蛋白和酸水解氨基酸总量，然后经过人工模拟的胃液和肠液酶消化后，经１０％三氯醋酸沉淀，检测上清液可溶性氮和氨基酸。通过上述检测结果计算蛋白质消化率、必需氨基酸消化率，将上清液中的必需氨基酸总量与ＷＨＯ推荐的模式对比值乘以必需氨基酸的消化率获得修正氨基酸分，然后将蛋白质消化率乘以修正氨基酸分获得的数值确定为蛋白质生物质量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：霍贵成，郭鸰，任大喜，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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