【技术实现步骤摘要】
一种固定在枯草芽孢杆菌表面的重组乙酰胆碱酯酶
本专利技术属于分子生物学领域，尤其涉及黑腹果蝇乙酰胆碱酯酶的定点突变和枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白Cot的应用。
技术介绍
有机磷农药具有高效、广谱、对植物安全、价格低廉等特点，在我国被大量使用，直至21世纪初期，有机磷农药化学品几乎占到中国农药市场的70％。有机磷农药能够和乙酰胆碱酯酶(AChE)不可逆的结合，被世界卫生组织认定为对脊椎动物最具危险的杀虫剂之一，它广泛存在于环境中，并通过大气、水体、食物和生物富集等方式作用于人类。长期接触或食用含有有机磷农药残留物的物质，会造成慢性中毒，如神经系统失调、脏器毒性、癌症、出生缺陷、生殖毒性等。在2010年至2018年之间，我国已经发生多起因误食有机磷农药残留超标的蔬菜引发的食物中毒事件，因此，对果蔬中的有机磷农药残留检测具有重要意义。国家标准中现行有效的测定各种食物中有机磷农药残留的方法是气相色谱法(GB23200.93-2016等)、气相色谱-质谱连用法(GB23200.97-2016等)以及快速检测的酶抑制法(GB/T18630-2002等)。其中气相色谱法和气相色谱-...
【技术保护点】
1.一种固定在枯草芽孢杆菌表面的重组乙酰胆碱酯酶，其特征在于，是由下列步骤得到的：(1)黑腹果蝇乙酰胆碱酯酶基因DMache获得：由化学合成法合成DMache，如SEQ ID No.1所示；引物设计F、R：F：5'‑AGCTTCTAGAATGGCCATCTCCTGTCGGCAGAGCAGAGTR：5'‑ATTACCCGGGTTATGGTGGTGGTGGTGGTGGGAAAACCCTT以合成的DMache为模板，用上述引物扩增目的基因；(2)突变体构建：设计以下引物，使用重叠延伸PCR获得突变体：1‑F：AGCTTCTAGAGCCATCTCCTGTCGGCAGAGCAGAGT...
【技术特征摘要】
1.一种固定在枯草芽孢杆菌表面的重组乙酰胆碱酯酶，其特征在于，是由下列步骤得到的：(1)黑腹果蝇乙酰胆碱酯酶基因DMache获得：由化学合成法合成DMache，如SEQIDNo.1所示；引物设计F、R：F：5'-AGCTTCTAGAATGGCCATCTCCTGTCGGCAGAGCAGAGTR：5'-ATTACCCGGGTTATGGTGGTGGTGGTGGTGGGAAAACCCTT以合成的DMache为模板，用上述引物扩增目的基因；(2)突变体构建：设计以下引物，使用重叠延伸PCR获得突变体：1-F：AGCTTCTAGAGCCATCTCCTGTCGGCAGAGCAGAGT1-R：AGATCTCCTCGCCGGAGAAGGGGGGGAAGTACTCGTAACGCTCTTGGA2-F：TCCAAGAGCGTTACGAGTACTTCCCCCCCTTCTCCGGCGAGGAGATCT2-R：CTCGCGTTCCGCTTGCGTTGCCTTGGGAAAAATATTGTTC3-F：GAACAATATTTTTCCCAAGGCAACGCAAGCGGAACGCGAG3-R：ATCCATTCGGGCCACAATGAGGTGCTTGTGCGGTGTGTAAA4-F：TTTACACACCGCACAAGCACCTCATTGTGGCCCGAATGGAT4-R：ATTACCCGGGTTATGGTGGTGGTGGTGGTGGGAAAACCCTT第一轮PCR：用引物1-F和1-R扩增出片段1、引物2-F、2-R扩增出片段2、引物3-F、3-R扩增出片段3、引物4-F、4-R扩增出片段4；第二轮PCR：以1-F、2-R为引物将片段1和片段2连接，以3-F、4-R为引物将片段3和片段4连接，最后再以1-F、4-R为引物将两个片段连接到一起，使用片段纯化试剂盒将上述PCR产物纯化，获得突变体，如SEQIDNo.2所示；(3)表面展示载体的构建及转化(i)芽孢衣壳蛋白基因的获得：设计如下三组引物：Cotb-F：5'-CGCGGATCCACGGATTAGGCCGTTTGTCCTCATGGACCCGTCotb-R：5'-GATCTCTAGAAGGAGGTGGAAAACGACGAAGAGGAGGTGGGGATGATTGATCATCotg-：5'-CGCGGATCCAGTGTCCCTAGCTCCGAGAAAAAATCCAGCotg-R：5'-GATCTCTAGAAGG...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕绍武，王利武，葛丹阳，姜蒙蒙，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。