一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法技术

本申请属于基因工程技术领域，具体涉及一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法。该方法通过同源重组替换启动子来提高PGPR菌的AcdS基因的表达量、AcdS酶活力和ACC代谢速率，进而提高PGPR菌对ACC的趋化强度。ACC是产AcdS的PGPR在根系定殖的关键趋化物之一，基于这一基础发明专利技术人以现有典型的恶臭假单胞菌UW4为例，对其进行了改造以提升其AcdS酶活，进一步对改造后菌株对ACC趋化强度进行实验后发现，相较于原始出发菌株，改造后菌株对ACC趋化强度得到了明显增强，而这可为PGPR在植物根际趋化定殖以及推进PGPR菌肥在农业生产中的应用奠定一定技术基础。

A Modification Method for Improving AcdS Production Ability of PGPR

【技术实现步骤摘要】
一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法
本申请属于基因工程
，具体涉及一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法。
技术介绍
实现农业的可持续发展已成为全球的战略共识。目前，我国农业过度依赖化肥、农药等不可再生物质，化肥的平均施用量是发达国家化肥施用上限的2倍，农药用量是世界的3倍，已造成严重的土壤退化、沙化、面源污染和食品安全问题，这种不可持续的农业发展模式急需改变。植物促生根际细菌（plantgrowthpromotingrhizobacteria，PGPR）是能够在植物根际定殖，提高植物营养的可给性、抑制病原菌的生长或产生某些特殊的促生物质，促进植物种子萌发和植物生长、发育的一类细菌。已有研究表明，使用PGPR菌肥，能够减少化肥用量20%-30%，减少农药用量30%以上，并且可使农作物增产10%-80%，在发展可持续农业中的作用越来越受到重视。然而，PGPR在实际应用中的使用效果并不稳定，其主要原因在于：PGPR在植物根际的定殖量与促生效果呈显著正相关，因此影响PGPR使用效果的关键因素是在田间应用过程中能否在根际定殖并存活、并在与土著微生物竞争中取得优势。现有研究认为，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法，其特征在于，该方法通过同源重组替换启动子来提高PGPR菌的

【技术特征摘要】
1.一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法，其特征在于，该方法通过同源重组替换启动子来提高PGPR菌的AcdS基因的表达量、AcdS酶活力和ACC代谢速率，进而提高PGPR菌对ACC的趋化强度，所述PGPR菌为恶臭假单胞菌。2.如权利要求1所述改善PGPR产AcdS能力的改造方法，其特征在于，所述恶臭假单胞菌具体为恶臭假单胞菌UW4菌株；所述启动子为启动子Bra20。3.如权利要求2所述改善PGPR产AcdS能力的改造方法，其特征在于，具体步骤为：（一）构建同源重组质粒pEX18Gm-Bra20所构建的同源重组质粒pEX18Gm-Bra20由同源重组片段UPD与质粒pEX18Gm连接而成，其中同源重组片段UPD由二个DNA片段组成，一个是上游同源臂UH，另一片段PDH是下游同源臂DH和启动子Bra20连接在一起的片段；具体步骤为：（1）获得上游同源臂UH片段设计PCR扩增用引物，引物序列如SEQIDNO.1~2所示，具体为：上游引物F1：5′-CGGAATTCGCAGTTCCCAACCGAATCTGGAA-3′，下游引物R1：5′-CAAAACGATTCAGGTTCATTCCCTGTGTAGCCTGGCTAGCCTTACAGATTTCGCATATTATATGTGAATCACAGTGATATGTCAAGTATT-3′；以UW4基因组DNA为模板，进行PCR扩增；（2）获得PDH片段设计PCR扩增用引物如SEQIDNO.3~4所示，具体为：上游引物F2：5′...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱立友，刘文亮，李涛，高玉千，戚元成，王明道，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41