犬腺病毒载体制造技术

技术编号:21039976 阅读:79 留言:0更新日期:2019-05-04 08:52
本发明专利技术涉及CAdV载体疫苗的领域,且尤其涉及适于自所述载体疫苗表达靶抗原的启动子。本发明专利技术揭示及主张重组型犬腺病毒、其制备方法、其用途(包括用于免疫学、免疫原性、疫苗或治疗性组合物中,或作为载体用于克隆、复制或表达DNA,及使用所述组合物及载体的方法)、其表达产物,及所述表达产物的用途。另外,本发明专利技术揭示及主张经截短的EHV4启动子、含有所述启动子的表达盒,及含有所述启动子或表达盒的重组型病毒及质粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】犬腺病毒载体序列表本申请含有根据37C.F.R.1.821-1.825的序列表。伴随本申请的该序列表通过引用整体并入本文。
本专利技术涉及(载体)疫苗的领域,且尤其涉及具体而言具有适于自所述载体疫苗表达靶抗原的改良表达盒的重组型2型犬腺病毒。
技术介绍
腺病毒作为重组疫苗的载体业经广泛研究(参见综述Bru,T.,S.Salinas及E.J.Kremer,Anupdateoncanineadenovirustype2anditsvectors.Viruses,2010.2(9):第2134-53页)。过去几十年来,在腺病毒方面、特别是在基因疗法及疫苗研发的领域中累积了大量信息。腺病毒的若干特征使得其作为基因转移工具上具有吸引力:(1)腺病毒基因组的结构经充分表征;(2)大部分病毒DNA可被外来序列取代;(3)重组变体相对稳定;(4)重组型病毒可以高效价生长;(5)人类恶性病与腺病毒皆不相关;及(6)使用减弱的野生型腺病毒作为疫苗较安全。针对有效载体化CAV-2疫苗的经发表靶标包括猫狂犬病(Hu,R.L.等人,Experimentalimmunizationofcatswitharecombinantrabies-canineadenovirusvaccineelicitsalong-lastingneutralizingantibodyresponseagainstrabies.Vaccine,2007.25(29):第5301-7页)、狗狂犬病(Hu,R.等人,Preventionofrabiesvirusinfectionindogsbyarecombinantcanineadenovirustype-2encodingtherabiesvirusglycoprotein.MicrobesInfect,2006.8(4):第1090-7页)、小鼠狂犬病(Li,J.等人,AsingleimmunizationwitharecombinantcanineadenovirusexpressingtherabiesvirusGproteinconfersprotectiveimmunityagainstrabiesinmice.Virology,2006.356(1-2):第147-54页)、浣熊狂犬病(Henderson,H.等人,Oralimmunizationofraccoonsandskunkswithacanineadenovirusrecombinantrabiesvaccine.Vaccine,2009.27(51):第7194-7页)、绵羊狂犬病(Bouet-Cararo,C.等人,Canineadenoviruseselicitbothhumoralandcell-mediatedimmuneresponsesagainstrabiesfollowingimmunizationofsheep.Vaccine,2011.29(6):第1304-10页)、臭鼬狂犬病(Henderson,H.等人,Oralimmunizationofraccoonsandskunkswithacanineadenovirusrecombinantrabiesvaccine.Vaccine,2009.27(51):第7194-7页)及猪狂犬病(Liu,Y.等人,Efficacyandsafetyofalivecanineadenovirus-vectoredrabiesvirusvaccineinswine.Vaccine,2008.26(42):第5368-72页)、犬瘟热(Fischer,L.等人,Vaccinationofpuppiesborntoimmunedamswithacanineadenovirus-basedvaccineprotectsagainstacaninedistemperviruschallenge.Vaccine,2002.20(29-30):第3485-97页)及猫泛白细胞减少症(Yang,S.等人,Completeprotectionofcatsagainstfelinepanleukopeniaviruschallengebyarecombinantcanineadenovirustype2expressingVP2fromFPV.Vaccine,2008.26(11):第1482-7页)。CAV-2亦具有作为经口疫苗的潜能,如通过针对狂犬病经口疫苗接种以下的效能所指示:狗(Zhang,S.等人,Oralvaccinationofdogs(Canisfamiliaris)withbaitscontainingtherecombinantrabies-canineadenovirustype-2vaccineconferslong-lastingimmunityagainstrabies.Vaccine,2008.26(3):第345-50页)、浣熊及臭鼬(Henderson,H.等人,2009,Zhao等人,2014.ExperimentalOralImmunizationofFerretBadgers(Melogalemoschata)withaRecombinantCanineAdenovirusVaccineCAV-2-E3Δ-RGPandanAttenuatedRabiesVirusSRV9.J.WildlifeDiseases50(2):374-377)。有趣地,尽管基于可复制型腺病毒的载体存在抵抗载体的被动免疫性,但其已显示效能(Gallichan,W.S.等人,Mucosalimmunizationwitharecombinantadenovirusvectorinduceslocalandsystemicimmunityandprotectionfromherpessimplexvirus.AdvExpMedBiol,1995.371B:第1581-5页;Lubeck,M.D.等人,Immunogenicityofrecombinantadenovirus-humanimmunodeficiencyvirusvaccinesinchimpanzeesfollowingintranasaladministration.AIDSResHumRetroviruses,1994.10(11):第1443-9页;Wang,Y.等人,TheuseofanE1-deleted,replication-defectiveadenovirusrecombinantexpressingtherabiesvirusglycoproteinforearlyvaccinationofmiceagainstrabiesvirus.JVirol,1997.71(5):第3677-8页),从而表明其可克服母源免疫性(Papp,Z.、L.A.Babiuk及M.E.Baca-Estrada,Theeffectofpre-existingadenovirus-specificimmunityonimmuneresponsesinducedbyrecombinantadenovirus本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组型犬腺病毒(rCAdV)载体,其包含编码可操作连接至马疱疹病毒‑4(EHV4)启动子的至少一个异源DNA的表达盒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.20 US 62/397,1391.一种重组型犬腺病毒(rCAdV)载体,其包含编码可操作连接至马疱疹病毒-4(EHV4)启动子的至少一个异源DNA的表达盒。2.如权利要求1的rCAdV载体,其中该马疱疹病毒-4(EHV4)启动子包含4pgG600(SEQIDNO.:29)或4pMCP600(SEQIDNO.:30)或其互补核苷酸序列,或其功能片段或功能衍生物或其互补核苷酸序列,其中该启动子序列导致异源抗原的表达。3.如权利要求2的rCAdV载体,其中该启动子序列的功能片段或衍生物具有至少80%、85%序列相同性,优选90%、91%、92%、93%、94%序列相同性,更优选95%、96%、97%、98%、99%、99.9%序列相同性。4.如权利要求2的rCAdV载体,其中该功能片段是4pgG600(SEQIDNO.:29)的截短或其互补核苷酸序列,优选地序列相同性为整个长度上的至少72%。5.如权利要求2的rCAdV载体,其中该功能片段是4pMCP600(SEQIDNO.:30)的截短或其互补核苷酸序列,优选地序列相同性为整个长度上的至少78%(或更高)。6.如权利要求2的rCAdV载体,其中该启动子序列的功能片段或衍生物具有550个核苷酸,优选500、490、480、470、460、455、450、445、440、435、434、433、432、431、430个核苷酸,最优选455或430个核苷酸的长度。7.如权利要求1的rCAdV载体,其中该马疱疹病毒-4(EHV4)启动子包含4pgG600(SEQIDNO.:29)。8.如权利要求1的rCAdV载体,其中该马疱疹病毒-4(EHV4)启动子包含4pMCP600(SEQIDNO.:30)。9.如权利要求1的rCAdV载体,其中该马疱疹病毒-4(EHV4)启动子包含G430(SEQIDNO.:31)。10.如权利要求1的rCAdV载体,其中该马疱疹病毒-4(EHV4)启动子包含gMCP455(SEQIDNO.:32)。11.如权利要求1的rCAdV载体,其被包装成感染性CAdV。12.如权利要求1的rCAdV载体,其中该异源DNA编码选自由以下组成的群的多肽:所关注的表位、生物反应调节剂、生长因子、识别序列、治疗基因及融合蛋白。13.如权利要求12的rCAdV载体,其中该异源DNA编码所关注的抗原性表位。14.如权利要求13的rCAdV载体,其中该所关注的抗原性表位是犬或猫病原体的抗原。15.如权利要求13的rCAdV载体,其中该所关注的抗原性表位是源于产食性动物病原体的抗原。16.如权利要求14的rCAdV载体,其中该所关注的抗原性表位选自由以下组成的群:麻疹病毒(Morbillivirus)抗原、狂犬病病毒糖蛋白、猫白血病病毒(FeLV)包膜蛋白、免疫缺陷病毒抗原、细小病毒抗原、痘病毒抗原。17.如权利要求15的rCAdV载体,其中该产食性动物病原体是源于猪、牛、马、家禽和/或羊动物。18.如权利要求17的rCAdV载体,其中该产食性动物病原体选自由以下组成的群:牛病毒性腹泻病毒(Bovineviraldiarrheavirus;BVDV)、副流行性感冒-3病毒(PI-3)、感染性牛鼻气管炎病毒(InfectiousBovineRhinotracheitisvirus;IBR)、牛呼吸道合胞病毒(BovineRespiratorySyncytialVirus;BRSV)、牛疱疹病毒(BovineHerpesvirus;BHV)、牛轮状病毒(BovineRotavirus;BRV)、牛肠病毒(BovineEnterovirus;BEV)、牛冠状病毒(BovineCoronovirus;BCV)、牛狂犬病(BovineRabies;BR)、牛细小病毒(BovineParvovirus;BPV)、腺病毒星状病毒(AdenovirusAstrovirus)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica)(先前称为溶血性巴氏杆菌(Pasteurellahaemolytica))、多杀巴斯德菌(Pasteurellamultocida)、睡眠嗜血杆菌(Haemophilussomnus)(绵羊嗜组织菌(Histophilusovis)及羔羊嗜血菌(Haemophilusagni))、放线菌属(Actinomyces)(棒状杆菌属(Corynebacterium))、化脓性放线菌(Actinomycespyogenes)、鹦鹉衣原体(Chlamydiapsittaci)、性病胚胎弯曲杆菌(Campylobacterfetusvenerealis)及胚胎胚胎弯曲杆菌(Campylobacterfetusfetus)(先前称为肠道胚胎弯曲杆菌(Cfetusintestinalis))、问号钩端螺旋体(Leptospirainterrogans)、哈德焦钩端螺旋体(Leptospirahardjo)、波蒙纳钩端螺旋体(Leptospirapomona)及感冒伤寒型钩端螺旋体(Leptospiragrippotyphosa)、犬钩端螺旋体(Leptospiracanicola)、感冒伤寒型钩端螺旋体、哈德焦钩端螺旋体(哈德焦普拉基特诺钩端螺旋体(Leptospirahardjoprajitno)及牛哈德焦钩端螺旋体(Leptospirahardjo-bovis))、流产布氏杆菌(Brucellaabortus)、猪布氏杆菌(Brucellasuis)及马尔他布氏杆菌(Brucellamelitensis)、单核细胞增生利斯特菌(Listeriamonocytogenes)、鹦鹉衣原体、鸣疽梭状芽胞杆菌(Clostridiumchauvoei)、败血梭菌(Clostridiumsepticum)、溶血梭菌(Clostridiumhaemolyticum)、诺维氏梭菌(Clostridiumnovyi)、索氏梭菌(Clostridiumsordellii)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、破伤风梭菌(Clostridiumtetani)、牛莫拉菌(Moraxellabovis)、克雷伯氏菌属(Klebsiellaspp)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium);新港沙门菌(Salmonellanewport)、鸟副结核分枝杆菌(Mycobacteriumaviumparatuberculosis)、小隐胞子虫(Cryptosporidiumparvum)、人隐胞子虫(cryptosporidiumhominis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、坏乳链球菌(Streptococcusdysgalactiae)、乳房链球菌(Streptococcusuberis)、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)、大肠杆菌(Escheric...

【专利技术属性】
技术研发人员:A·加列R·库昆特拉R·B·曼德尔A·蒙特K·雷米特E·M·沃恩
申请(专利权)人:勃林格殷格翰动物保健有限公司
类型:发明
国别省市:德国,DE

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