表达流感血凝素的重组HVT载体和免疫原性组合物，以及其生产和用途制造技术

重组病毒载体和包含它们用于用作运载体以诱导免疫学应答的组合物。可以在用于针对各种各样的病原体进行保护的包含一种或多种重组病毒载体的组合物或疫苗中使用多价病毒载体。这些病毒载体的形成可以包括外来基因的插入和表达以针对各种各样的病原体进行保护。进一步提供了制备和使用所述重组病毒载体的方法，以及包含所述载体和/或抗原的免疫原性组合物。特别地，免疫原性组合物可以包含重组病毒载体例如vHVT509、vHVT522和/或vHVT523。vHVT522和/或vHVT523。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达流感血凝素的重组HVT载体和免疫原性组合物，以及其生产和用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年6月17日提交的美国临时申请63/040,411的优先权。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，其已经以ASCII格式以电子方式提交并且通过提及而以其整体合并入本文。创建于2021年6月15日的所述ASCII副本的名称为BI20
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AH022
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WO
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1_SL.txt并且大小为69,660个字节。
专利

[0005]本专利技术涉及用于插入和表达外来基因的重组病毒载体，其用于用作安全的免疫接种运载体以针对各种各样的病原体进行保护。本专利技术还涉及包含一种或多种重组病毒载体的多价组合物或疫苗，其用于针对各种各样的病原体进行保护。本专利技术涉及制备和使用所述重组病毒载体的方法，以及包含所述载体和/或抗原的免疫原性组合物。
[0006]专利技术背景
[0007]家禽疫苗接种广泛用于针对破坏性疾病来保护家禽群，所述破坏性疾病包括新城疫(Newcastle disease；ND)、传染性黏液囊病(infectious bursal disease；IBD)、马立克病(Marek's disease；MD)、传染性支气管炎(infectious bronchitis；IB)、传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis；ILT)和禽流感(avian influenza；AI)，例如高致病性禽流感(HPAI)。ND由属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)的禽副粘病毒1(APMV
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1)(也称为ND病毒(NDV))引起。在一些情况下，MD由禽疱疹病毒2(疱疹病毒科(Herpesviridae))(也称为MD病毒血清型1(MDV1))引起。IB由属于冠状病毒科(Coronaviridae)的IB病毒(IBV)引起，ILT由禽疱疹病毒1(疱疹病毒科)(也称为ILT病毒(ILTV))引起，和AI由属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的AI病毒(AIV)引起。
[0008]重组疫苗可以用于针对一种或多种不同的疾病在禽类中提供保护性免疫应答。特别地，疫苗可以在禽类动物中降低死亡率、临床征候和影响。例如，所开发出的疫苗可以用于在禽类例如鸡中针对传染性黏液囊病(也称为冈博罗病)、新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)、传染性喉气管炎(ILT)、禽流感(AI)和/或马立克病提供保护。
[0009]已提出了许多重组禽类病毒载体，以便针对这些禽类病原体对鸟类进行疫苗接种。所使用的病毒载体包括禽痘病毒，尤其是禽痘(EP
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A
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0,517,292)，马立克病毒，例如血清型1、2和3(HVT)(WO87/04463；WO2013/082317)，或者备选地ITLV、NDV和禽腺病毒。当将这些重组禽类病毒载体中的一些用于疫苗接种时，它们展示出可变的保护水平。
[0010]马立克病病毒(MDV)属于α
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疱疹病毒科和马立克病毒属(Mardivirus)。MDV病毒体是有包膜的并且其大小为大约160nm。衣壳包括大小为100至200kbp的线性双链DNA的大基因组。
[0011]在MDV的血清型之中有MDV血清型1(MDV1)和MDV血清型2(MDV2)，其对于家禽都是致病性的，而MDV血清型3(MDV3)不是。在一些情况下，MDV3被称为Meleagrid疱疹病毒1、火
鸡疱疹病毒和/或火鸡的疱疹病毒(HVT)。
[0012]已经使用MDV3(即，HVT)的不同毒株，例如PB1或FC
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126，来针对由MDV1和/或MDV2引起的MD对禽类(例如，鸡)进行疫苗接种。当需要针对更有毒力的MDV1变体的保护作用时，已经将HVT与MDV2疫苗株(例如SB1)或者与减毒的MDV1疫苗株相组合地进行了使用。
[0013]已经开发和许可了几种重组火鸡疱疹病毒(也称为Meleagrid疱疹病毒1或MDV血清型3)载体，其表达来自各种病原体(包括IBDV、NDV、ILTV和AIV)的抗原(美国专利号5,980,906、5,853,733、6,183,753、5,187,087)。
[0014]已经开发和许可了几种重组火鸡疱疹病毒(HVT，也称为Meleagrid疱疹病毒1或MDV血清型3)载体，其表达来自各种病原体(包括IBDV、NDV、ILTV和AIV)的抗原(美国专利号5,980,906、5,853,733、6,183,753、5,187,087)。例如，表达IBDV VP2保护性基因的HVT载体，其已显示出明显的相对于传统IBD疫苗的优点(Bublot等人,J.Comp.Path.2007,Vol.137,S81
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S84；美国专利号5,980,906)。其他感兴趣的HVT载体为表达NDV(Morgan等人,1992,Avian dis.36,858
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70；美国专利号6,866,852、5,650,153)、ILTV(Johnson等人,2010Avian Dis 54,1251
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1259；美国专利号6,299,882、5,853,733；EP 1801204)或者NDV和IBDV(美国专利号9,114,108；WO2016102647、WO2013/057235、WO2015032910、WO2013144355)保护性基因的那些。US2016/0158347报道了使用寡脱氧核苷酸TLR21激动剂来增加针对由HVT载体所表达的抗原的免疫应答。
[0015]进一步地，自从其在1996年在中国广东出现，A/goose/Guangdong/1/1996(Gs/GD)谱系的H5N1高致病性禽流感(HPAI)病毒已在全球散布开，其感染家养和野生鸟类并且偶尔溢出进入哺乳动物(包括人)中。随着时间过去，H5N1 HPAI病毒已分叉为多个在系统发生上和在抗原性上不同的进化枝和亚进化枝(基于H5血凝素(HA)基因)，并且已出现了对于许多疫苗种子株有抗性的抗原变体。这样的基因和抗原多样性已在维持用于家禽疫苗的相关H5种子株中造成了挑战。因此，高度希望的是开发出广泛保护性H5甲型流感疫苗，其可以提供对于在抗原性上不同的共循环病毒以及未来的漂移变体的覆盖。
[0016]已经调查了几种策略以克服该挑战并且拓宽中和抗体的储库，包括靶向HA的保守结构域的多价H5N1疫苗，和基于合成的共有DNA抗原的疫苗。按照后一种策略，利用称为“计算机优化的广泛反应性抗原”(Computationally Optimized Broadly Reactive Antigen；COBRA)的先前所描述的方法来生成具有新型H5 HA共有序列的抗原。在使用小鼠、白鼬和食蟹猴的先前研究中，COBRA HA抗原疫苗针对用同源和异源H5N1 HPAI病毒的致死攻击进行了保护本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.重组病毒载体，其包含：至少一个源自预先确定的病毒的核酸序列，所述预先确定的病毒选自：火鸡疱疹病毒(rHVT)、马立克病病毒或Meleagrid疱疹病毒；来自禽流感病毒的第一外源核酸序列，从而所述重组病毒载体在体内表达外源禽流感病毒血凝素抗原；和来自禽类疾病的第二外源核酸序列，其编码并且在体内表达所述禽类疾病的至少一种抗原。2.权利要求1的重组病毒载体，其中所述预先确定的病毒包含马立克病病毒血清型3。3.权利要求1的重组病毒载体，其中所述预先确定的病毒包含马立克病病毒毒株FC
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126。4.权利要求1的重组病毒载体，其中所述禽流感是H5亚型的。5.权利要求1的重组病毒载体，其中编码禽流感HA抗原的所述第一外源核酸序列是经密码子优化的。6.权利要求1的重组病毒载体，其中所述第二外源核酸序列编码传染性黏液囊病病毒抗原、新城疫抗原或传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原。7.权利要求1的重组病毒载体，其中所述第二外源核酸序列编码传染性黏液囊病病毒VP2抗原或新城疫F抗原。8.通过重组方法构建的权利要求1的重组病毒载体，所述重组方法包括用所述预先确定的病毒和用于插入到基因间I(IG1)位点中的插入质粒转染细胞，所述插入质粒包含编码传染性黏液囊病病毒VP2抗原的所述第一外源核酸序列、内部核糖体进入位点(IRES)、编码禽流感HA的所述第二外源核酸序列和SV40 poly A尾，其侧翼为来自所述IG1区域的序列。9.权利要求1的重组病毒载体，其进一步包含与编码AIV H5 HA蛋白的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。10.权利要求1的重组病毒载体，其中关于在所述重组病毒载体中所使用的AIV HA COBRA
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C基因的氨基酸序列与预先确定的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。11.权利要求1的重组病毒载体，其中关于所述重组病毒载体的IBDV VP2基因的氨基酸序列与预先确定的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。12.权利要求1的重组病毒载体，其中关于所述重组病毒载体的NDV
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F基因的氨基酸序列与预先确定的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。13.用于产生权利要求1的重组病毒载体的方法，其包括重组方法，所述重组方法包括用所述预先确定的病毒和用于插入到HVT基因间1(IG1)位点中的插入质粒转染细胞，所述插入质粒包含编码传染性黏液囊病病毒VP2抗原的所述第一外源核酸序列、内部核糖体进入位点(IRES)、编码禽流感HA的所述第二外源核酸序列和SV40 poly A尾，其侧翼为来自所述IG1区域的序列。14.组合物，其包含权利要求1的重组病毒载体和在兽医学上可接受的承载体。15.权利要求14的组合物，其中所述预先确定的病毒处于这样的量，所述量在当将所述组合物施用给禽类时足以针对马立克病病毒和/或传染性黏液囊病病毒和/或禽流感在所
述禽类中诱导免疫应答。16.用于针对马立克病病毒、禽流感和传染性黏液囊病病毒在禽类中诱导免疫应答的方法，其包括向所述禽类施用有效量的权利要求1的重组病毒载体或者有效量的权利要求14的组合物。17.重组病毒载体，其包含并且在体内表达：外源禽流感病毒HA抗原，和编码新城疫病毒F抗原的外源核酸分子。18.权利要求1或17的重组病毒载体，其中所述禽流感是H5亚型的。19.权利要求17的重组病毒载体，其中编码禽流感HA抗原的外源核酸分子是经密码子优化的。20.通过重组方法构建的权利要求17的重组病毒载体，所述重组方法包括用预先确定的病毒和关于基因间1(IG1)位点的插入质粒转染细胞，所述插入质粒包含小鼠CMV启动子、编码新城疫病毒F抗原的外源核酸序列、内部核糖体进入位点(IRES)、编码禽流感HA的外源核酸序列和SV40 poly A尾，其侧翼为来自所述IG1区域的序列。21.用于产生权利要求17的重组病毒载体的方法，其包括重组方法，所述重组方法包括用预先确定的病毒和关于基因间1(IG1)位点的插入质粒转染细胞，所述插入质粒包含小鼠CMV启动子、编码新城疫病毒F抗原的外源核酸序列、内部核糖体进入位点(IRES)、编码禽流感HA的外源核酸序列和SV40 poly A尾，其侧翼为来自所...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健有限公司，
类型：发明
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