RSV疫苗组合物、方法及其用途技术

本发明专利技术提供了一种包含重组肽和蛋白质的免疫原性组合物，所述重组肽和蛋白质包含呼吸道合胞病毒(RSV)病毒抗原和免疫原，例如RSV F蛋白肽。所述免疫原性组合物包含分泌的融合蛋白，所述分泌的融合蛋白包含可溶性RSV病毒抗原，所述可溶性RSV病毒抗原通过框内联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。所述免疫原性组合物可用于产生免疫应答，例如用于治疗或预防RSV感染。所述免疫原性组合物可用于疫苗组合物，例如作为预防性和/或治疗性疫苗的一部分。本文还提供了产生所述重组肽和蛋白质的方法，预防、治疗和/或诊断方法以及相关试剂盒。治疗和/或诊断方法以及相关试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】RSV疫苗组合物、方法及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年6月10日提交的国际专利申请号PCT/CN2020/095295和于2021年4月13日提交的国际专利申请号PCT/CN2021/087045的优先权和利益，所述申请的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
[0003]以ASCII文本文件形式提交的序列表
[0004]以下以ASCII文本文件形式提交的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：165762000242SEQLIST.TXT，记录日期：2021年6月9日，大小：229KB)。


[0005]本公开在一些方面涉及一种包含重组肽和蛋白质的免疫原性组合物，所述重组肽和蛋白质包含呼吸道合胞病毒(RSV)病毒抗原和免疫原，例如RSV F蛋白肽，所述免疫原性组合物用于治疗和/或预防RSV感染。

技术介绍

[0006]呼吸道合胞病毒(RSV)导致成人和儿童呼吸道感染，是婴儿期和儿童期下呼吸道感染和住院治疗的主要原因。尽管RSV感染率高，但包括预防剂、治疗剂和疫苗在内的治疗手段却有限或不可用。需要改进的方法来治疗RSV。本文提供了满足这些和其它需要的组合物、方法、用途和制品。

技术实现思路

[0007]在一个方面，本文提供了一种包含多个重组多肽的蛋白质，各重组多肽包含连接到胶原蛋白C端前肽的呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白肽或其片段或表位，其中所述重组多肽的C端前肽形成了多肽间二硫键。在一些实施方式中，所述RSV属于A亚型或B亚型。在一些实施方式中，所述表位是线性表位或构象表位。
[0008]在一些实施方式中，本文公开了重组亚单位疫苗，所述重组亚单位疫苗包含RSV F蛋白或其片段的胞外结构域(例如，无跨膜结构域和胞质结构域)，所述胞外结构域与能够形成二硫键连接的同三聚体的胶原蛋白C前肽框内融合。所产生的重组亚单位疫苗如F三聚体可以从转染的细胞表达并纯化，并且预计呈三聚体形式的天然样构象。这解决了病毒抗原在表达为无跨膜结构域和/或胞质结构域的可溶性形式的重组肽或蛋白质时经常遇到的错误折叠问题。这种错误折叠的病毒抗原不能准确地保留天然病毒抗原构象，而且往往不能激发出中和抗体。
[0009]在一些实施方式中，所述F蛋白肽包含F1亚单位肽、F2亚单位肽或其任何组合，并且所述蛋白质包含三个重组多肽。在一些实施方式中，所述F蛋白肽包含信号肽、七肽重复序列C(HRC)肽、pep27肽、融合肽(FP)、七肽重复序列A(HRA)肽、结构域I肽、结构域II肽或七肽重复序列B(HRB)肽或其任何组合。在一些实施方式中，所述F蛋白肽包含F蛋白的F1亚单
位但不包含F2亚单位，或相反。在一些实施方式中，所述F蛋白肽包含F蛋白的F1亚单位和F2亚单位，任选地不存在pep27，并且任选地其中所述F1亚单位和所述F2亚单位通过二硫键或人工引入的连接物连接。在一些实施方式中，所述F蛋白肽不包含跨膜(TM)结构域肽和/或胞质(CP)结构域肽。在一些实施方式中，所述F蛋白肽包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选地为弗林蛋白酶、胰蛋白酶、因子Xa、凝血酶或组织蛋白酶L。在一些实施方式中，所述F蛋白肽不包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选地为弗林蛋白酶、胰蛋白酶、因子Xa、凝血酶或组织蛋白酶L。
[0010]在一些实施方式中，所述F蛋白肽是可溶性的，或不直接结合到脂质双分子层，例如膜或病毒包膜。在一些实施方式中，F蛋白肽在所述蛋白质的重组多肽间是相同的或不同的。在一些实施方式中，所述F蛋白肽直接与C端前肽融合，或通过连接物如包含甘氨酸
‑
X
‑
Y重复序列的连接物连接到C端前肽，其中X和Y独立地为任何氨基酸，任选地为脯氨酸或羟脯氨酸。
[0011]在一些实施方式中，所述蛋白质是可溶性的，或不直接结合到脂质双分子层，例如膜或病毒包膜。在一些实施方式中，所述蛋白质能够形成包含F蛋白肽三聚体的莲座样寡聚物。在一些实施方式中，所述蛋白质能够结合到受试者的细胞表面附着因子或受体，任选地其中所述受试者是哺乳动物，如灵长类动物，例如人类。
[0012]在一些实施方式中，所述C端前肽属于人类胶原蛋白。在一些实施方式中，所述C端前肽包含proα1(I)、proα1(II)、proα1(III)、proα1(V)、proα1(XI)、proα2(I)、proα2(V)、proα2(XI)或proα3(XI)的C端多肽或其片段。在一些实施方式中，在所述重组多肽间所述C端前肽是相同或不同的。在一些实施方式中，所述C端前肽包含SEQ ID NO:48
‑
63中的任一个或与其具有至少90％同一性、能够形成多肽间二硫键并使所述重组多肽三聚化的氨基酸序列。
[0013]在一些实施方式中，各重组多肽中的F蛋白肽呈融合前构象或融合后构象，任选地其中所述蛋白质包含莲座样寡聚物，所述莲座样寡聚物包含拐杖形棒状F蛋白肽三聚体。在上述实施方式中的任一个中，各重组多肽中的F蛋白肽可以包含SEQ ID NO:17
‑
47中的任一个或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
[0014]在上述实施方式中的任一个中，所述重组多肽可以包含SEQ ID NO:1
‑
16中的任一个或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。在上述实施方式中的任一个中，所述重组多肽可以包含直接或间接地连接到SEQ ID NO:48
‑
63中的任一个或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列的SEQ ID NO:17
‑
47中的任一个或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
[0015]本文还提供了一种包含本文所提供的蛋白质的免疫原。本文提供了一种包含直接或间接地连接到纳米粒子的本文所提供的蛋白质的蛋白质纳米粒子。本文提供了一种包含本文所提供的蛋白质的病毒样粒子(VLP)。
[0016]本文还提供了一种分离的核酸，所述分离的核酸编码本文所提供的蛋白质的1、2、3个或更多个重组多肽。在一些实施方式中，编码F蛋白肽的多肽与编码胶原蛋白C端前肽的多肽框内融合。在一些实施方式中，本文所提供的分离的核酸可操作地连接到启动子。
[0017]在一些实施方式中，本文所提供的分离的核酸是DNA分子。在一些实施方式中，本文所提供的分离的核酸是RNA分子，任选地为mRNA分子，如核苷修饰mRNA、非扩增mRNA、自扩增mRNA或反式扩增mRNA。
[0018]本文还提供了一种包含本文所提供的分离的核酸的载体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体。
[0019]在一些方面，本文提供了一种包含本文所提供的载体的病毒、假病毒或细胞，任选地其中所述病毒或细胞具有重组基因组。在一些方面，本文提供了一种免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含本文所提供的蛋白质、免疫原、蛋白质纳米粒子、VLP、分离的核酸、载体、病毒、假病毒或细胞，以及药学上可接受的载剂。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在哺乳动物中预防呼吸道合胞病毒(RSV)感染的方法，所述方法包括用有效量的重组亚单位疫苗免疫接种哺乳动物，所述重组亚单位疫苗包含可溶性RSV病毒表面抗原，所述可溶性RSV病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述RSV属于A亚型或B亚型。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含F蛋白或其片段或表位。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含F1肽或其片段或表位。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含F2肽或其片段或表位。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含F1肽或其片段或表位和F2肽或其片段或表位。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含突变F蛋白或其片段或表位。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含突变F1肽或其片段或表位。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述RSV病毒表面抗原包含突变F2肽或其片段或表位。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:1所示的序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:3所示的序列。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:5所示的序列。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:7所示的序列。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:9所示的序列。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:11所示的序列。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:13所示的序列。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:15所示的序列。18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:37所示的序列。19....

【专利技术属性】
技术研发人员：梁朋，梁果，
申请(专利权)人：四川三叶草生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：