疫苗组合物、方法及其用途技术

本发明专利技术提供了包含分泌的融合蛋白的免疫原性组合物，其中所述分泌的融合蛋白包含可溶性流感或狂犬病病毒抗原，所述抗原与能够自身三聚化的胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。本发明专利技术还提供了免疫原性组合物的用途，用于产生针对流感或狂犬病感染的免疫应答以及用于疫苗组合物中。本发明专利技术还提供了产生重组肽和蛋白质的方法，预防、治疗和/或诊断方法以及相关试剂盒。治疗和/或诊断方法以及相关试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疫苗组合物、方法及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年6月10日提交的国际专利申请号PCT/CN2020/095296和于2021年4月13日提交的国际专利申请号PCT/CN2021/087074的优先权和收益权，所述申请的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
[0003]以ASCII文本文件形式提交的序列表
[0004]以下以ASCII文本文件形式提交的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：165762000342SEQLIST.TXT，记录日期：2021年6月9日，大小：99.5KB)。


[0005]本公开在一些方面涉及包含重组肽和蛋白质的免疫原性组合物，所述重组肽和蛋白质包含病毒抗原和免疫原，例如用于治疗和/或预防流感感染的流感HA蛋白肽，以及用于治疗和/或预防狂犬病病毒感染的狂犬病病毒糖蛋白(G)肽。

技术介绍

[0006]RNA病毒如流感病毒和狂犬病病毒是世界各地发病率和死亡率的主要促成因素。针对病毒性病原如流感病毒和狂犬病病毒的各种免疫接种策略包括基于鸡蛋的灭活疫苗和灭活重组亚单位疫苗。需要改进策略以提高疫苗接种的功效，例如通过提高制备疫苗的速度。本文提供了满足这些和其它需要的组合物、方法、用途和制品。

技术实现思路

[0007]在一些实施方式中，本文公开了一种在哺乳动物中预防狂犬病病毒感染的方法，所述方法包括用有效量的重组亚单位疫苗免疫接种哺乳动物，所述重组亚单位疫苗包含可溶性狂犬病病毒表面抗原，所述可溶性狂犬病病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。在一些实施方式中，所述狂犬病病毒是CTN
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1毒株。在一些实施方式中，所述狂犬病病毒是PM毒株。在上述实施方式中的任一个中，所述狂犬病病毒表面抗原可以包含G蛋白或其片段或表位。在上述实施方式中的任一个中，所述狂犬病病毒表面抗原可以包含结合至神经生长因子受体NGFR(p75)、神经细胞粘附分子NCAM和/或尼古丁乙酰胆碱受体nAchR的肽或其片段或表位。在上述实施方式中的任一个中，所述融合蛋白可以包含SEQ ID NO:3所示的序列。在上述实施方式中的任一个中，所述融合蛋白可以包含SEQ ID NO:4所示的序列。在上述实施方式中的任一个中，所述融合蛋白可以包含SEQ ID NO:5所示的序列。在上述实施方式中的任一个中，所述融合蛋白可以包含SEQ ID NO:6所示的序列。在上述实施方式中的任一个中，所述融合蛋白可以包含与SEQ ID NO:16
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31中任一个所示的第二序列连接的SEQ ID NO:10
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15中任一个所示的第一序列，其中所述第一序列的C端直接或间接地连接到所述第二序列的N端。
[0008]在上述实施方式中的任一个中，所述重组亚单位疫苗可以通过肌肉内注射给药。
在上述实施方式中的任一个中，所述重组亚单位疫苗可以通过鼻内喷雾给药。在上述实施方式中的任一个中，所述重组亚单位疫苗可以以单剂或以数周或数月的间期隔开的一系列剂量给药。在上述实施方式中的任一个中，所述重组亚单位疫苗可以在无佐剂的情况下、与佐剂一起或与多于一种佐剂一起给药。
[0009]在一些实施方式中，本文公开了一种从哺乳动物血清中检测针对狂犬病病毒的抗体的方法，所述方法包括使所述血清与可溶性狂犬病病毒表面抗原接触的步骤，所述可溶性狂犬病病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。在一些实施方式中，所述可溶性狂犬病病毒表面抗原是G蛋白或肽。
[0010]在一些实施方式中，本文公开了一种使用重组亚单位疫苗的方法，所述重组亚单位疫苗包含来自狂犬病病毒的可溶性表面抗原，所述可溶性狂犬病病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白，所述方法包括：免疫接种哺乳动物，纯化所产生的中和抗体，以及使用所述中和抗体通过被动免疫来治疗被所述狂犬病病毒感染的患者。在一些实施方式中，所述中和抗体包含多克隆抗体。在一些实施方式中，所述中和抗体是单克隆抗体。
[0011]在一个方面，本文提供了一种包含多个重组多肽的蛋白质，各重组多肽包含与胶原蛋白C端前肽连接的流感病毒血凝素(HA)蛋白肽或其片段或表位，其中所述重组多肽的C端前肽形成了多肽间二硫键。
[0012]在一些实施方式中，本文公开了重组亚单位疫苗，所述重组亚单位疫苗包含流感HA蛋白或其片段的胞外结构域(例如，没有跨膜结构域和胞质结构域)，所述胞外结构域与能够形成二硫键连接的同三聚体的胶原蛋白C前肽框内融合。所产生的重组亚单位疫苗如HA三聚体可以从转染的细胞表达并纯化，并且预期呈三聚体形式的天然样构象。这就解决了病毒抗原在表达为无跨膜结构域和/或胞质结构域的可溶性形式的重组肽或蛋白质时经常遇到的错误折叠问题。这种错误折叠的病毒抗原不能准确地保留天然病毒抗原构象，而且往往不能激发出中和抗体。
[0013]在任何实施方式中的一些中，所述流感病毒是甲型流感病毒或乙型流感病毒，任选地其中所述甲型流感病毒属于H1、H3或H5亚型，如H1N1或H3N2。在任何实施方式中的一些中，所述表位是线性表位或构象表位。
[0014]在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽包含HA1亚单位肽、HA2亚单位肽或其任何组合，其中所述蛋白质包含三个重组多肽。在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽包含信号肽、柄肽、退化酯酶(vestigial esterase，VE)肽、受体结合结构域(RBD)肽、融合肽(FP)、螺旋A肽、环B肽、螺旋C肽、螺旋D肽、膜近端区(MPR)肽或其任何组合。在一些实施方式中，所述HA蛋白肽包含HA蛋白的HA1亚单位或HA2亚单位。在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽包含HA蛋白的HA1亚单位和HA2亚单位，任选地其中所述HA1亚单位和所述HA2亚单位通过二硫键或人工引入的连接物连接。在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽不包含跨膜(TM)结构域肽和/或胞质(CP)结构域肽。
[0015]在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选地为弗林蛋白酶、跨膜丝氨酸蛋白酶如TMPRSS2、胰蛋白酶、因子Xa或组织蛋白酶L。在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽不包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选地为弗林蛋白酶、跨膜丝氨酸蛋白酶如TMPRSS2、胰蛋白酶、因子Xa或组织蛋白酶L。
[0016]在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽是可溶性的，或不直接与脂质双分子层(例如膜或病毒包膜)结合。在任何实施方式中的一些中，在所述蛋白质的重组多肽间所述HA蛋白肽是相同或不同的。在任何实施方式中的一些中，所述HA蛋白肽直接与C端前肽融合，或通过连接物如包含甘氨酸
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X
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Y重复序列的连接物与C端前肽连接，其中X和Y独立地为任何氨基酸，任选地为脯氨酸或羟脯氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在哺乳动物中预防流感病毒感染的方法，所述方法包括用有效量的重组亚单位疫苗免疫接种哺乳动物，所述重组亚单位疫苗包含可溶性流感病毒表面抗原，所述可溶性流感病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述流感病毒是甲型流感病毒或乙型流感病毒，任选地其中所述甲型流感病毒属于H1、H3或H5亚型，例如H1N1或H3N2。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述流感病毒表面抗原包含血凝素(HA)蛋白或其片段或表位。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述流感病毒表面抗原包含血凝素(HA)信号肽、柄肽、退化酯酶(VE)肽、受体结合结构域肽、融合肽(FP)、螺旋A肽、环B肽、螺旋C肽、螺旋D肽、膜近端区肽或其任何组合。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述流感病毒表面抗原包含血凝素(HA)柄肽或其片段或表位。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述流感病毒表面抗原包含唾液酸结合肽或其片段或表位。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:1所示的序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:2所示的序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:7所示的序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:8所示的序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:16所示的序列。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:22所示的序列。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含与SEQ ID NO:16
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31中任一个所示的第二序列连接的SEQ IDNO:7
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9中任一个所示的第一序列，其中所述第一序列的C端直接或间接地连接到所述第二序列的N端。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗通过肌肉内注射给药。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗通过鼻内喷雾给药。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗以单剂或以数周或数月的间期隔开的一系列剂量给药。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗在无佐剂的情况下给药。18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗与佐剂一起给
药。19.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述重组亚单位疫苗与多于一种佐剂一起给药。20.一种从哺乳动物血清中检测针对流感病毒的抗体的方法，所述方法包括使所述血清与可溶性流感病毒表面抗原接触的步骤，所述可溶性流感病毒表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述可溶性流感病毒表面抗原是HA蛋白或肽。22.一种使用包含来自流感病毒的可溶性表面抗原的重组亚单位疫苗的方法，所述可溶性表面抗原与胶原蛋白C端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白，所述方法包括：免疫接种哺乳动物，纯化所产生的中和抗体，以及使用所述中和抗体通过被动免疫来治疗感染所述流感病毒的患者。23.根据权利要求29所述的方法，其中所述中和抗体包括多克隆抗体。24.根据权利要求29所述的方法，其中所述中和抗体是单克隆抗体。25.一种在禽类或猪中预防流感病毒感染的方法，所述方法通过用有效量的重组亚单位疫苗免疫接种所述禽类或猪，所述重组亚单位疫苗包含可溶性病毒表面抗原HA，所述可溶性病毒表面抗原HA与胶原蛋白C端部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁朋，梁果，
申请(专利权)人：四川三叶草生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：