冠状病毒诊断组合物、方法及其用途技术

本发明专利技术公开了包含冠状病毒病毒抗原和免疫原例如冠状病毒S蛋白肽的重组肽和蛋白质，用于分析诸如中和抗体的分析物。在某些情况下，所述重组肽和蛋白质包含含有可溶性冠状病毒病毒抗原的分泌融合蛋白，所述可溶性冠状病毒病毒抗原与能够自身三聚化的胶原蛋白的C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冠状病毒诊断组合物、方法及其用途
[0001]与相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年6月10日提交的国际专利申请号PCT/CN2020/095332和2021年4月13日提交的PCT/CN2021/087051的优先权和利益，所述申请的公开内容为所有目的整体通过参考并入本文。
[0003]作为ASCII文本文件提交的序列表
[0004]下述ASCII文本文件上的提交内容整体通过参考并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：165762000542SEQLIST.TXT，记录日期：2021年6月9日，大小：575KB)。


[0005]本公开在某些方面涉及包含冠状病毒病毒抗原和免疫原例如冠状病毒S蛋白肽的重组肽和蛋白质，用于检测和/或分析冠状病毒感染，例如用于诊断冠状病毒感染的目的。

技术介绍

[0006]冠状病毒是有包膜的正义单链RNA病毒。在已知的RNA病毒中，它们具有最大的基因组(26
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32kb)，并且在系统发育上分为四个属(α、β、γ、δ)，其中β冠状病毒进一步细分成4个谱系(A、B、C、D)。冠状病毒感染广泛的禽类和哺乳动物物种，包括人类。人类冠状病毒可能每年在人类中循环，并通常引起轻度呼吸疾病，尽管在婴儿、老年人和免疫功能受损者中严重程度可能更高。相反，包括中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
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CoV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS
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CoV)和最近的也被称为SARS
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CoV
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2的2019年新型冠状病毒(2019
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nCoV)在内的某些其他冠状病毒，具有高致病性。这些冠状病毒的高致病性和空气传播性引起人们对另一次冠状病毒大流行的可能性的担忧。对诊断冠状病毒感染的有效测试存在着迫切需求。本专利技术提供了满足这些和其他需求的方法、用途和制品。

技术实现思路

[0007]在某些情况下，本文提供了分析样品的方法，所述方法包括：将样品与包含冠状病毒的S蛋白肽或其片段或表位的蛋白质(例如本文公开的S三聚体、NTD/RBD三聚体、RBD三聚体、S1三聚体或S2三聚体)接触，并检测所述蛋白质与能够与所述冠状病毒的S蛋白肽或其片段或表位特异性结合的分析物之间的结合。在某些实施方式中，所述分析物是识别所述S蛋白肽或其片段或表位的抗体、受体或细胞。在某些实施方式中，所述结合指示了所述样品中存在所述分析物和/或所述样品所源自的受试者感染所述冠状病毒。
[0008]在某些情况下，本文中的方法在病毒感染期间和/或用本文公开的蛋白质或肽疫苗接种后提供了能够与所述S蛋白肽或其片段或表位特异性结合的分析物的灵敏检测。在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgG抗体、IgM抗体或IgE抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的此类抗体。在任何前述实施方式中，所述分析物可以是针对冠状病毒例如SARS
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CoV
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2的中和抗体。在任何前述实施方式中，所述方法可以是ELISA或侧流测定法。
[0009]在某些情况下，本文提供了试剂盒，其包含本文提供的蛋白质和含有或固定有所述蛋白质的基材、衬垫或小瓶，任选地其中所述试剂盒是ELISA或侧流测定试剂盒。
[0010]在本文公开的方法的某些实施方式中，所述蛋白质被固定在测试条上的层析条的测试区内。
[0011]在任何前述实施方式中，所述层析条还可以包含对照区，并且其中将对照捕获试剂固定在所述对照区内。
[0012]在任何前述实施方式中，所述测试条还可以包含样品结合区，其包含结合垫，并且所述结合垫的一个末端与所述层析条的一个末端毛细连通。
[0013]在任何前述实施方式中，所述测试条还可以包含样品添加区，其包含样品垫，其中所述样品垫可以与所述结合垫或所述层析条毛细连通。
[0014]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是针对所述冠状病毒表面抗原的中和抗体。
[0015]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是针对所述冠状病毒表面抗原的广谱中和抗体。
[0016]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgG抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的IgG抗体。
[0017]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgM抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的IgM抗体。
[0018]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgE抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的IgE抗体。
[0019]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgA抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的IgA抗体。
[0020]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是IgD抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的IgD抗体。
[0021]在任何前述实施方式中，所述分析物可以是人类抗体，例如特异性针对S蛋白肽或其片段或表位的人类抗体。
[0022]在任何前述实施方式中，所述样品可以源自于被所述冠状病毒感染的受试者。
[0023]在任何前述实施方式中，所述样品可以是来自于被所述冠状病毒感染并且已恢复的受试者的血清。
[0024]在任何前述实施方式中，所述样品还可以包含所述冠状病毒表面抗原的受体。
[0025]在任何前述实施方式中，所述样品可以包含阻断所述受体与所述冠状病毒表面抗原之间的相互作用的中和抗体。
[0026]在某些实施方式中，本文提供了一种蛋白质，其包含多个重组多肽，每个重组多肽包含连接到胶原蛋白的C
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端前肽的冠状病毒表面抗原，其中所述重组多肽的C
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端前肽形成多肽间二硫键。
[0027]在某些实施方式中，所述冠状病毒是严重急性呼吸综合征(SARS)
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冠状病毒(SARS
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CoV)、SARS
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冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)、SARS样冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)
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冠状病毒(MERS
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CoV)、MERS样冠状病毒、NL63
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CoV、229E
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CoV、OC43
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CoV、HKU1
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CoV、WIV1
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CoV、MHV、HKU9
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CoV、PEDV
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CoV或SDCV。
[0028]在任何前述实施方式中，所述表面抗原可以包含冠状病毒刺突(S)蛋白或其片段或表位，其中所述表位任选为线性表位或构象表位，并且其中所述蛋白质包含3个重组多肽。
[0029]在某些实施方式中，所述冠状病毒S蛋白融合肽包含来自于冠状病毒例如SARS
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CoV
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2的S蛋白的胞外结构域(例如不含跨膜和胞质结构域)或其片段，其被框内融合到能够形成二硫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分析样品的方法，所述方法包括：将样品与包含多个重组多肽的抗原接触，每个重组多肽包含连接到胶原蛋白的C
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端前肽的冠状病毒表面刺突蛋白，其中所述C
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端前肽形成多肽间二硫键，并且其中所述样品含有或疑似含有能够与冠状病毒刺突蛋白特异性结合的分析物，并检测所述抗原与所述分析物之间的结合。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物是识别所述抗原的抗体、受体、细胞，和/或所述样品是含有所述分析物的体液，包括但不限于血清或血浆。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述结合指示了所述样品中存在所述分析物和/或所述样品所源自的受试者感染所述冠状病毒。4.根据权利要求1
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3中的任一项所述的方法，其中所述方法是侧流方法。5.根据权利要求4所述的方法，其中将所述抗原用胶体金粒子标记并在测试条上的偶联垫内干燥。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中特异性针对所述分析物的第二抗体被固定在测试条上的层析膜的测试区内。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述测试条还包含其中固定有特异性针对胶原蛋白的C
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端前肽的抗体的对照区。8.根据权利要求5
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7中的任一项所述的方法，其中所述测试条还包含在所述测试条的一个末端上载样用于分析的分析物的样品垫和在相反末端上与所述样品垫毛细连通的吸收垫。9.根据权利要求4
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8中的任一项所述的方法，其中在将分析物载样到样品垫上之后，当抗原标记的胶体金粒子在层析膜上通过毛细力向吸收垫迁移时，抗原标记的胶体金粒子在测试区处的任何成功停留指示了分析物的阳性检测，而任何抗原标记的胶体金粒子仅在对照区处的停留指示了所述分析物的阴性读出。10.根据权利要求1
‑
9中的任一项所述的方法，其中所述分析物是针对冠状病毒表面抗原的抗体。11.根据权利要求1
‑
10中的任一项所述的方法，其中所述分析物是针对冠状病毒表面抗原的中和抗体。12.根据权利要求1
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10中的任一项所述的方法，其中所述分析物是IgG抗体。13.根据权利要求1
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10中的任一项所述的方法，其中所述分析物是IgM抗体。14.根据权利要求1
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12中的任一项所述的抗体，其中所述分析物是人类抗体。15.根据权利要求1
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14中的任一项所述的方法，其中所述分析物源自于感染所述冠状病毒的受试者。16.根据权利要求1
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14中的任一项所述的方法，其中所述分析物是来自于感染所述冠状病毒并且已恢复的受试者的血清。17.根据权利要求1
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14中的任一项所述的方法，其中所述分析物源自于用冠状病毒疫苗免疫接种的受试者。18.根据权利要求1
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17中的任一项所述的方法，其中冠状病毒表面抗原的受体被固定在测试条上的层析膜的第二测试区内，任选地所述受体是受体
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Fc，例如ACE2
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Fc。19.根据权利要求18所述的方法，其中与不含分析物的媒介物对照相比，在载样分析物
后抗原标记的胶体金粒子在所述第二测试区处停留的任何减少，指示了能够阻断所述受体与所述冠状病毒表面抗原之间的相互作用的一种或多种中和抗体的阳性检测。20.根据权利要求1
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19中的任一项所述的方法，其中所述冠状病毒是严重急性呼吸综合征(SARS)
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冠状病毒(SARS
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CoV)、SARS
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冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)、SARS样冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)
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冠状病毒(MERS
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CoV)、MERS样冠状病毒、NL63
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CoV、229E
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CoV、OC43
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CoV、HKU1
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CoV、WIV1
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CoV、MHV、HKU9
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CoV、PEDV
‑
CoV或SDCV。21.根据权利要求1
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19中的任一项所述的方法，其中所述抗原包含冠状病毒刺突(S)蛋白或其片段或表位，其中所述表位任选为线性表位或构象表位，并且其中所述抗原包含由胶原蛋白的C
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端前肽连接的三个重组抗原多肽。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗原包含信号肽、S1亚单位肽或S2亚单位肽或其任何组合。23.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗原包含信号肽、受体结合结构域(RBD)肽、受体结合基序(RBM)肽、融合肽(FP)、七肽重复区1(HR1)肽或七肽重复区2(HR2)肽或其任何组合。24.根据权利要求21中的任一项所述的方法，其中所述抗原包含S蛋白的受体结合结构域(RBD)。25.根据权利要求21中的任一项所述的方法，其中所述抗原包含S蛋白的S1亚单位和S2亚单位。26.根据权利要求21
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25中的任一项所述的方法，其中所述抗原不包含跨膜(TM)结构域肽和/或胞质(CP)结构域肽。27.根据权利要求21
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25中的任一项所述的方法，其中所述抗原包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选为弗林蛋白酶、胰蛋白酶、因子Xa、凝血酶或组织蛋白酶L。...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁朋，梁果，
申请(专利权)人：四川三叶草生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：