HIV疫苗组合物、其方法和用途技术

本发明专利技术公开了包含重组肽和蛋白质的免疫原性组合物，所述重组肽和蛋白质包含人免疫缺陷病毒(HIV)抗原和免疫原，例如gp120蛋白肽。在某些情况下，所述免疫原性组合物包含分泌的融合蛋白，其包含与能够自身三聚化的胶原蛋白的C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HIV疫苗组合物、其方法和用途
[0001]与相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年6月10日提交的国际专利申请号PCT/CN2020/095335和2021年4月13日提交的PCT/CN2021/087054的优先权和利益，所述申请的公开内容为所有目的整体通过参考并入本文。
[0003]作为ASCII文本文件提交的序列表
[0004]下述ASCII文本文件上的提交内容整体通过参考并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：165762000442SEQLIST.TXT，记录日期：2021年6月9日，大小：186KB)。


[0005]本公开在某些方面涉及包含重组肽和蛋白质的免疫原性组合物，所述重组肽和蛋白质包含人免疫缺陷病毒(HIV)1病毒抗原和免疫原例如gp120蛋白肽，用于治疗和/或预防HIV感染。

技术介绍

[0006]人免疫缺陷病毒(HIV)包括感染人类的两个慢病毒物种，并且随着时间推移可以引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。目前没有可用的针对HIV 1的免疫接种。在产生针对所有层级的HIV的广泛中和抗体方面，还没有成功的临床试验。需要改进的策略。

技术实现思路

[0007]在某些实施方式中，本文公开了重组亚单位疫苗，其包含HIV蛋白或其片段例如HIV gp120蛋白的胞外结构域(例如无跨膜和胞质结构域)，所述胞外结构域被框内融合到能够形成二硫键连接的同三聚体的胶原蛋白的C
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前肽。得到的重组亚单位疫苗例如gp120三聚体可以从被转染的细胞表达和纯化，并预期在三聚体形式下采取天然样构象。这解决了病毒抗原当以不含跨膜和/或胞质结构域的可溶性形式作为重组肽或蛋白表达时常常遇到的错误折叠的问题。这种错误折叠的病毒抗原不准确地保留本源病毒抗原构象，并且通常不能唤起中和抗体。
[0008]一方面，本文提供了一种包含多个重组多肽的蛋白质，每个重组多肽包含连接到胶原蛋白的C
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端前肽的HIV gp120蛋白肽或其片段或表位，其中所述重组多肽的C
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端前肽形成多肽间二硫键。
[0009]在一些实施方式中，所述HIV是HIV
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1，任选为层级1B、层级1A、层级2或层级3病毒。在一些实施方式中，所述表位是线性表位或构象表位。
[0010]在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽包含外部结构域亚单位肽、内部结构域亚单位肽或其任何组合，并且其中所述蛋白质包含三个重组多肽。在一些实施方式中，所述gp120蛋白包含1、2、3、4或5个C区和1、2、3、4或5个可变区，它们任选地被桥层隔开。在某些实施方式中，所述gp120蛋白肽包含gp120蛋白的外部亚单位或内部亚单位。在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽包含gp120蛋白的内部亚单位和外部亚单位，任选地所述外部亚单
位和内部亚单位通过二硫键或人工引入的连接物相连。在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽不包含跨膜(TM)结构域肽和/或胞质(CP)结构域肽。
[0011]在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选为弗林蛋白酶、跨膜丝氨酸蛋白酶例如TMPRSS2、胰蛋白酶、因子Xa、凝血酶或组织蛋白酶L。在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽不含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶任选为弗林蛋白酶、跨膜丝氨酸蛋白酶例如TMPRSS2、胰蛋白酶、因子Xa、凝血酶或组织蛋白酶L。
[0012]在一些实施方式中，所述gp120蛋白肽是可溶的，或者不直接与脂质双层例如膜或病毒包膜结合。在一些实施方式中，在所述蛋白质的重组多肽之间所述gp120蛋白肽是相同或不同的。在一些所述实施方式中，所述gp120蛋白肽被直接融合到所述C
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端前肽，或通过连接物例如包含甘氨酸
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X
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Y重复序列的连接物连接到所述C
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端前肽，其中X和Y独立地是任何氨基酸，并且任选为脯氨酸或羟脯氨酸。
[0013]在一些实施方式中，所提供的蛋白质是可溶的。在一些实施方式中，所述蛋白质不与脂质双层例如膜或病毒包膜直接结合。在一些实施方式中，所述蛋白质能够与受试者的细胞表面附着因子或受体结合，任选地其中所述受试者是哺乳动物例如灵长动物，例如人类。
[0014]在一些实施方式中，所述C
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端前肽源自于人类胶原蛋白。在一些实施方式中，所述C
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端前肽包含proα1(I)、proα1(II)、proα1(III)、proα1(V)、proα1(XI)、proα2(I)、proα2(V)、proα2(XI)或proα3(XI)的C
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端多肽或其片段。在一些实施方式中，在所述重组多肽之间所述C
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端前肽是相同或不同的。
[0015]在一些实施方式中，所述C
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端前肽包含SEQ ID NO：31
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46中的任一者或与其具有至少90％同一性、能够形成多肽间二硫键并使所述重组多肽三聚化的氨基酸序列。
[0016]在一些实施方式中，每个重组多肽中的gp120蛋白肽采取融合前构象或融合后构象。
[0017]在一些实施方式中，每个重组多肽中的gp120蛋白肽包含SEQ ID NO：19
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30中的任一者或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
[0018]在一些实施方式中，所述重组多肽包含SEQ ID NO：1
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18中的任一者或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
[0019]本文提供了一种免疫原，例如包含任何所提供的蛋白质的免疫原。本文还提供了一种蛋白质纳米粒子，例如包含直接或间接连接到纳米粒子的任何所提供的蛋白质的蛋白质纳米粒子。本文还提供了一种病毒样粒子(VLP)，例如包含任何所提供的蛋白质的VLP。
[0020]本文还提供了一种核酸例如分离的核酸，其编码任何所提供的蛋白质的1、2、3个或更多个重组多肽。在某些实施方式中，编码所述gp120蛋白肽的多肽被框内融合到编码胶原蛋白的C
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端前肽的多肽。
[0021]在某些实施方式中，所述分离的核酸被可操作连接到启动子。在某些实施方式中，所述分离的核酸被可操作连接到启动子。在某些实施方式中，所述分离的核酸是DNA分子。
[0022]在某些实施方式中，所述分离的核酸是RNA分子，任选为mRNA分子例如核苷修饰的mRNA、非扩增型mRNA、自扩增型mRNA或反式扩增型mRNA。
[0023]本文提供了一种载体，例如包含任何所提供的核酸的载体。在某些实施方式中，所述载体是病毒载体。
[0024]本文还提供了一种包含任何本文提供的载体的病毒、假病毒或细胞。任选地，其中所述病毒或细胞具有重组基因组。
[0025]本文提供了一种免疫原性组合物，其包含任何所提供的蛋白质、免疫原、蛋白质纳米粒子、VLP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在哺乳动物中预防HIV感染的方法，所述方法包括用有效量的重组亚单位疫苗免疫接种哺乳动物，所述重组亚单位疫苗包含可溶性HIV病毒表面抗原，所述HIV病毒表面抗原与胶原蛋白的C
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端部分通过框内融合而联结以形成二硫键连接的三聚体融合蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述HIV是HIV
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1，任选为层级1B、层级1A、层级2或层级3病毒。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述HIV病毒表面抗原包括gp120蛋白或其片段或表位。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述gp120蛋白肽包含外部结构域亚单位肽、内部结构域亚单位肽或其任何组合，并且其中所述蛋白质包含三个重组多肽。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述gp120蛋白肽包含1、2、3、4或5个C区和1、2、3、4或5个可变区，它们任选地被桥层隔开。6.根据权利要求1
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5中的任一项所述的方法，其中所述HIV病毒表面抗原包括突变的gp120蛋白。7.根据权利要求1
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6中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：1所示的序列。8.根据权利要求1
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7中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：2所示的序列。9.根据权利要求1
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8中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：3所示的序列。10.根据权利要求1
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9中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：4所示的序列。11.根据权利要求1
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10中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：5所示的序列。12.根据权利要求1
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11中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：6所示的序列。13.根据权利要求1
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12中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：7所示的序列。14.根据权利要求1
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13中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：8所示的序列。15.根据权利要求1
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14中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：9所示的序列。16.根据权利要求1
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15中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：10所示的序列。17.根据权利要求1
‑
16中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：11所示的序列。18.根据权利要求1
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17中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：12所示的序列。19.根据权利要求1
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18中的任一项所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO：13所示的序列。

【专利技术属性】
技术研发人员：梁朋，梁果，
申请(专利权)人：四川三叶草生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：