含有副流感病毒的、用于预防猪呼吸和生殖疾病的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种基于副感冒病毒的病毒因子，它可做为疫苗组分用于保护猪免于呼吸及生殖道疾病。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
含有副流感病毒的、用于预防猪呼吸和生殖疾病的疫苗本专利技术涉及一种病毒因子，培养和复制该因子的方法，以及该因子单独或与其他细菌或病毒病原体共同作为疫苗组分在保护免受呼吸及生殖道疾病中的应用。八十年代末期至九十年代初期，在北美及欧洲出现一种新的猪疾病，它象瘟疾一样传播并伴有巨大的经济损失。同时，它被正式命名为猪生殖及呼吸综合症(PRRS)。这种传染性疾病的主要临床症状是母猪的生育力失调及小猪的呼吸道疾病和肥胖。除这些异常之外，还有非特异性的症状发生，如食欲不振，感情淡漠，和发烧，该疾病的特征对母猪而言，是晚期流产和死胎，分娩出干尸和生命力弱的小猪。作为这种流行病的后果，是大量地发生乳腺炎-子宫炎-乳泌缺乏综合症的症状以及回复动情。在流行区，流行病的开始阶段主要作用于乳猪和仔猪，进一步阶段则是喂肥的猪发病率升高。这时，除主要发生于呼吸道的疾病之外，其他典型的猪的疾病亦相应以增高的频率被观察到。该流行病引起了巨大的经济损失，除了直接的动物损失之外，这种损失由于其特征产品量的降低引起(产仔及断奶之后果，妊娠率，增重)。推测主要感染因子是一种在肺泡巨噬细胞内复制的新RNA病毒。另一方面，流行病学的调查表明呼吸和生殖疾病可另外由其它病毒或病毒和细菌继发或多发感染引起和加强，因此主张不仅要保护猪免受PRRS的主要致病因子，还要免受其他引起呼吸和生殖疾病的致病因子。本专利技术涉及：1.一种针对猪呼吸道和生殖道疾病，特别是与称为PRRS的疾病综合症相关的疫苗，其特征在于含有作为抗原物质的副感冒病毒及其失活，或减毒的变体或突变体，它们以常规或重组技术制造。可以是完整的或部分的及其片段。2.一种基于引起猪呼吸及生殖道疾病的副感冒病毒的抗原。3.一种制备基于引起猪呼吸及生殖道疾病的副感冒病毒的抗原物质的-->法，其特征在于，副感冒病毒是复制的，而且从如此获得的病毒悬浮中以常规的方法分离抗原物质。4.这种基于引起猪呼吸和生殖道疾病的副感冒病毒的抗原在诊断和/或预防这些疾病中的应用。5.这种基于引起猪呼吸和生殖道疾病的副感冒病毒的抗原在用于探知这些疾病的诊断剂生产中的应用，和在用于预防这些疾病的疫苗生产中的应用。  抗原物质是指：1.由病毒在细胞培养物或鸡胚中复制得到的完整的，活的病毒颗粒。2.由病毒在原代细胞培养物、永生细胞系、禽胚或在实验动物连续传代，随后在细胞培养物或鸡胚中复制而得到完整的，活的，减毒的病毒颗粒。3.用传统方法，如化学或物理灭活而制备的完整的、杀死的病毒。4.由在细胞培养物或鸡胚中复制的病毒制备的病毒颗粒的亚单位。5.通过重组技术由细胞系统表达的，并可由此可操作地分开和分离的病毒颗粒的亚单位。6.由载体系统表达的病毒抗原，借助于重组技术将病毒基因组或其部分插入到基因组载体上，如痘病毒，疱疹病毒，腺病毒或其它合适的载体系统。优选采用2型副感冒病毒(PIV-2)。PIV-2从猪的呼吸及生殖道中分离，特别优选来自显示出PRRS-样症状的猪。被命名为SER的PIV-2毒株是尤其合适的，按布达佩斯条约，该毒株于1993年6月12日保藏于Collection Nationale desCultures et de Microorganismes(Institut Pasteur，Paris，France)，保藏号为I-1331。本专利技术的疫苗中，副感冒病毒的抗原物质可以以与其他病毒或细菌的抗原物质混合物存在。这些病毒和细菌是指：衣原体属，尤其是鹦鹉热衣原体(Chlamydia  psittaci)及Chlamydia pecorum，其浓度是105-1010FU1/dose，猪丹毒杆菌，其浓度是107-1012CFU/dose，PRRS病毒，其浓度是104-109TCID250/dose，以及猪微小病毒，其浓度是104-109TCID250/dose。尤其优选PIV-2和衣原体的混合物，特别是鹦鹉热衣原体，或Ch.pecorum，是特别优选的。-->1IFU＝包含体形成单位，2TCID＝组织培养感染剂量下列术语应用于下列过程：共转染：两种不同的DNA序列同时导入细胞，病毒可在细胞中复制，其目的是导入含有外源DNA序列的病毒重组体。不同的DNA序列是①能够插入到穿梭载体的外源DNA序列和②纯化的载体病毒的基因组。基因组载体：活的病原体，特别是病毒，它适于外源DNA插入，借助于外源DNA插入其基因组从而感染细胞或器官，并在那里表达外源DNA。免疫原：在较高等生物体中引发免疫反应的肽或蛋白，可以通过外源DNA序列在载体中表达。克隆：将外源DNA序列插入载体。质粒：能够在原核或直核细胞中复制的染色体之外的环状DNA序列。穿梭载体：含有其侧翼为载体病毒的DNA序列的插入外源DNA的细菌噬菌体或质粒，尤其是细菌质粒。转染：将DNA序列转运到原核或直核细胞，其目的是诱导含有导入的DNA序列的细胞基因组的重组体。载体：在其遗传信息中装载外源DNA序列的质粒，细菌噬菌体或病毒。用于产生完整的活性病毒颗粒的病毒复制可以已知方式完成，一方面，可以是在作为原代细胞或永久性细胞系的动物细胞的组织培养物中完成，如猪细胞，猴细胞或牛细胞，优选猪肾细胞如克隆的永久性猪肾细胞PK15(ATCC CCLL33或其衍生物)或原代猪肾细胞EPK或猴肾细胞如永久性猴肾细胞BGM(Flow03-240或其衍生物)或Vero(ATCC CCL81或其衍生物)或牛肾细胞例如永久性牛肾细胞MDBK(ATCC CCL22或其衍生物)，另一方面，在鸡胚中完成(例如Valo-Bruteier Fa.Lohmann)。在细胞培养物中的复制以常规方式完成，即从单层或悬液培养物的形式在静态滚瓶或载体培养中完成。采用的细胞生长培养基是常规已知的培养基，如Gibco BRL GmbH，Dieselstraβe5，76344Eggenstein的产品目录所描述的，例如特别是基础必需培养基(MEM)，它含有作-->为必需营养物的氨基酸，维生素，盐及碳水化合物，补充以缓冲物质例如碳酸氢钠(NaHCO3)或羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(Hepes)以及选择的动物血清，例如，来自牛，马或其胎儿的血清。Eagles MEM含有0.1-5g/LNaHCO3，优选0.5-3g/L，其胎牛血清浓度为体积比1-30％，优选体积比2-10％是特别优选采用的。用于病毒复制的细胞或细胞层以常规方式生长直至几乎铺满或至最佳细胞密度。在用病毒感染它们之前，优选移去细胞生长培养基而且细胞优选用病毒复制培养基洗涤。病毒复制培养基采用所有常规已知的细胞培养基，例如，特别是，上述MEM。然后使用病毒悬液进行感染。病毒悬液中，病毒被病毒复制培养基稀释为0.01-50MOI(感染多重性，相应于感染性病毒颗粒数/存在细胞数的比率)，优选0.1-10MOI。病毒的复制可以加入，亦可不加入动物血清进行。当加入血清时，以1-30％体积比浓度加至复制培养基，优选2-10％体积比。感染和病毒复制在温度为室温和40℃之间进行，优选32至39℃之间，特别优选于37℃保持几天，优选直至感染细胞被完全破坏。感染细胞的含病毒培养基被进一步加工，例如，通过使用孔径为例如0.1-0.45μm滤器过滤和/或离心最高达10,00本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗猪呼吸及生殖道疾病的疫苗，其特征在于，它含有作为抗原性物质的副感冒病毒及其变体及其突变体，它们是以活的、死的、减毒的形式或通过重组技术制备的形式，以完整的颗粒或其部分或其亚基存在。

【技术特征摘要】
DE 1994-3-7 P4407489.11.一种抗猪呼吸及生殖道疾病的疫苗，其特征在于，它含有作为抗原性物质的副感冒病毒及其变体及其突变体，它们是以活的、死的、减毒的形式或通过重组技术制备的形式，以完整的颗粒或其部分或其亚基存在。2.一种基于引起猪呼吸及生殖道疾病的副感冒病毒的抗原性物质。3.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：E海伦，N施米尔，W赫斯特，
申请(专利权)人：拜尔公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]