猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的保护性抗原决定子的鉴定及其用途制造技术

本发明专利技术涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）保护性抗原决定子多肽（ＰＡＤ多肽）以及编码ＰＡＤ的核酸。ＰＡＤ通过ＰＲＲＳＶ的ＧＰ５蛋白和Ｍ蛋白组成的异源二聚体产生，其中ＧＰ５的细胞外结构域具有不同的Ｎ糖基化状态。ＰＡＤ及其编码核酸可用于开发抗ＰＡＤ抗体，有效提供抗ＰＲＲＳＶ感染保护作用的疫苗，以及检测ＰＡＤ特异性疫苗产生的ＰＡＤ抗体的存在的诊断方法中。本发明专利技术还涉及抗ＰＡＤ抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗ＰＲＲＳＶ的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的ＰＲＲＳＶ感染的方法和检测抗ＰＲＲＳＶ的ＰＡＤ的抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术的实施方案总体涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，更具体 涉及PRRSV的新保护性抗原决定子(PAD)的发现，以及其在疫苗、治疗 和诊断分析中的应用。
技术介绍
1987年中，美国猪生产业经历了一种未知的感染性疾病，对养猪业造 成了严重的经济影响。该疾病综合征在欧洲包括德国、比利时、荷兰、西 班牙和英格兰都有报道。该疾病的特征在于繁殖不能，呼吸疾病和各种临床症状包括丧失胃口 ， 发热，腹泻以及轻微的神经症状。该综合征的主要组成部分是繁殖不能， 表现为早产，晚期流产，先天体弱，死产，木乃伊胎，产崽率降低，以及 动情期恢复延迟。临床呼吸疾病症状在3周龄以下的猪中最为明显，并据 报道出现于所有生产期。受累幼猪生长缓慢，皮毛粗糙，呼吸窘迫(喘粗 气)，并且死亡率增加。该疾病综合征由很多名称，包括猪神秘病(mystery swine disease) (MSD)， 猪流4亍性流产(porcine epidemic abortion)以及呼吸综合征(respiratory syndrome) (PEARS),猪不孕与呼吸综合征(swine infertility and respira本文档来自技高网...

【技术保护点】
对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染免疫的方法，包括给予猪第一ＧＰ５－Ｍ异源二聚体，其中所述第一ＧＰ５－Ｍ异源二聚体的ＧＰ５具有位于北美（ＮＡ）ＰＲＳＳＶ毒株ＧＰ５的位置４４的糖基化或位于欧洲（ＥＵ）ＰＲＲＳＶ毒株ＧＰ５的位置４６的糖基化；给予猪第二ＧＰ５－Ｍ异源二聚体，其中所述第二ＧＰ５－Ｍ异源二聚体的ＧＰ５不具有位于北美（ＮＡ）ＰＲＳＳＶ毒株ＧＰ５的位置４４或欧洲（ＥＵ）ＰＲＲＳＶ毒株ＧＰ５的位置４６的糖基化，由此对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染免疫。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2005-11-29 60/740,5191.对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染免疫的方法，包括给予猪第一GP5-M异源二聚体，其中所述第一GP5-M异源二聚体的GP5具有位于北美(NA)PRSSV毒株GP5的位置44的糖基化或位于欧洲(EU)PRRSV毒株GP5的位置46的糖基化；给予猪第二GP5-M异源二聚体，其中所述第二GP5-M异源二聚体的GP5不具有位于北美(NA)PRSSV毒株GP5的位置44或欧洲(EU)PRRSV毒株GP5的位置46的糖基化，由此对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染免疫。2. 权利要求1的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体在病毒或载体中递送。3. 权利要求2的方法，其中所述病毒是PRRSV,马动脉炎病毒(EAV),乳酸脱氢酶-升高型病毒(LDV)，或猿出血热病毒(SHFV)。4. 权利要求2的方法，其中所述第一 GP5-M异源二聚体通过HLV013的PRRSV递送。5. 权利要求1的方法，其中所述第二GP5在NAPRRSV GP5蛋白或EUPRRSVGP5蛋白的细胞外结构域中存在或不存在聚糖。6. 权利要求2的方法，其中所述第二 GP5-M异源二聚体通过HLV093的PRRSV递送。7. 权利要求1的方法，其中所述猪用导致PRRS的PRRSV攻击。8. 权利要求1的方法，其中所述免疫方案提供异源反应性。9. 权利要求1的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体是灭活的疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、重组疫苗或DNA疫苗。10. 权利要求1的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体经口鼻给药。11. 对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染免疫的方法，包括给予猪第一 GP5-M异源二聚体，其中所述第一 GP5-M异源二聚体的GP5具有位于北美(NA) PRSSV毒株GP5的细胞外结构域中的糖基化或位于欧洲(EU) PRRSV毒株GP5的细胞外结构域中的糖基化；给予猪第二 GP5-M异源二聚体，其中所述第二 GP5-M异源二聚体的GP5不具有位于北美(NA) PRSSV毒株GP5的细胞外结构域中或欧洲(EU) PRRSV毒株GP5的细胞外结构域中的糖基化，由此对猪进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染免疫。12. 鉴定激发抗PRRSV的保护作用的GP5-M异源二聚体的方法，包括:给予受试猪第一GP5-M异源二聚体，其中所述GP5具有位于北美(NA)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)毒株GP5的位置44的糖基化或位于欧洲(EU) PRRSV毒株GP5的位置46的糖基化；给予受试猪第二 GP5-M异源二聚体，其中所述第二 GP5-M异源二聚体的GP5不具有位于北美(NA) PRSSV毒株GP5的位置44或欧洲(EU) PRRSV毒株GP5的位置46的糖基化；用致PRRS的感染量的病毒攻击给予第一和第二 GP5-M异源二聚体的受试猪和未给予所述第一和第二 GP5-M异源二聚体的对照猪；测定第一和第二给药的GP5-M异源二聚体是否产生有效的抗攻击PRRSV保护作用。13.权利要求12的方法，其中测定所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体是否产生有效的抗攻击PRRSV保护作用包括以下步骤观察PRRS症状的改变，其中给予第一和第二 GP5-M异源二聚体导致下述的PRRS临床表现或症状减轻表明所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体提供有效的抗PRRS保护作用，所述临床表现或症状包括与对照猪相比体重下降，体重增加减少，嗜眠症，呼吸窘迫，喘粗气(呼气费力)，发热，皮毛粗糙，打喷嚏，咳嗽，眼睛水肿，结膜炎，宏观病变，微观肺病变，心肌炎，淋巴腺炎，脑炎和鼻炎，而包含以下任何一种情况的PRRS临床表现或症状加重表明所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体不能提供有效的抗PRRS保护作用与对照猪相比体重下降，体重增加减少，嗜眠症，呼吸窘迫，喘粗气(呼气费力)，发热，皮毛粗糙，打喷嚏，咳嗽，眼睛水肿，结膜炎，宏观病变，微观肺病变，心肌炎，淋巴腺炎，脑炎和鼻炎。14. 权利要求12的方法，其中测定所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体是否提供有效的抗攻击PRRSV的保护作用的步骤包括通过电子显微镜术，荧光聚焦中和(FFN)检测，或Western印迹分析来确定受试猪中攻击PRRSV的存在或缺失，其中攻击PRRSV的存在表明所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体不能提供有效的抗PRRS保护作用，并且攻击PRRSV的缺失表明所述第一和第二给药的GP5-M异源二聚体提供有效的抗PRRS保护作用。15. 权利要求12的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体在病毒或载体中递送。16. 权利要求15的方法，其中所述病毒是PRRSV,马动脉炎病毒(EAV),乳酸脱氢酶-升高型病毒(LDV)，或猿出血热病毒(SHFV)。17. 权利要求15的方法，其中所述第一 GP5-M异源二聚体通过HLV013的PRRSV递送。18. 权利要求12的方法，其中第二GP5在NA或EUPRRSV毒株的EUPRRSVGP5蛋白中的GP5的细胞外结构域中具有或不具有聚糖。19. 权利要求15的方法，其中所述第二 GP5-M异源二聚体通过HLV093的PRRSV递送。20. 权利要求12的方法，其中所述第一和第二 GP5-M异源二聚体提供异源反应性。21. 权利要求12的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体是灭活的疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、重组疫苗或DNA疫苗。22. 权利要求12的方法，其中所述第一或第二 GP5-M异源二聚体经口鼻给药。23. 分离的多肽，用于产生抗PRRS的保护性作用，包括包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基质蛋白(M蛋白)与PRRSV糖蛋白5 (GP5)的异源二聚体的序列，其中所述GP5蛋白具有位于北美PRRSV毒株GP5蛋白的位置44或欧洲PRRSV毒株GP5蛋白的位置46的天冬酰胺的N糖基化。24. 权利要求23的分离的多肽，其中PRRSV的M蛋白和PRRSV的GP5，其中GP5蛋白通过二硫键与M蛋白相连，其中二硫键由北美PRRSV毒株中位置9或EU PRRSV毒株中位置8的M蛋白中的半胱氨酸与北...

【专利技术属性】
技术研发人员：DL哈里斯，MM厄尔德曼，
申请(专利权)人：衣阿华州立大学研究基金公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]