一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液及其制备方法技术

技术编号:14569779 阅读:93 留言:0更新日期:2017-02-06 03:38
一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液及其制备方法,属于兽用生物制品技术领域。该稀释液每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分:氨基酸组合10~30g、复方中药多糖10~30g和脂质体10~30g,所述的氨基酸组合包括叶酸、核黄素磷酸钠、右泛醇和抗坏血酸,所述的复方中药多糖由独活、云香草、蔓荆子、密蒙花、玄参和赤芍提取得到。本发明专利技术的有益效果是:(1)病毒接种后,可促进细胞生长,保持细胞正常生长。(2)处理后病毒更容易感染细胞,大幅提高病毒感染细胞几率。(3)相同培养时间可以大幅提高病毒滴度,病毒含量提高10-100倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品
,具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液及其制备方法
技术介绍
猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起的,以妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎,仔猪和育肥猪发生呼吸道症状的疾病。PRRS难以有效的防制,首先是PRRSV以肺巨噬细胞为靶细胞,具有抗体依赖性增强作用(ADE)造成了一定的免疫抑制,其次是PRRSV不断的发生着变异,并且PRRS没有有效的治疗药物,免疫接种是目前控制该病的最主要措施。灭活疫苗的主要优点是安全,疫苗株不会传染给其他猪只,同时其毒力也不会返强。田间试验研究表明,灭活疫苗的使用不会导致经产母猪和后备母猪的繁殖失败。目前蓝耳病灭活疫苗主要采用油包水剂型的油乳剂疫苗。油包水型疫苗具有较好的缓释作用,免疫后持续刺激机体达到免疫保护方面表现尤为突出。但油包水剂型的疫苗往往所需较高的抗原浓度来提高疫苗的效力。为提高PRRS灭活疫苗的效力,需要在确保疫苗病毒株免疫原性的前提下尽量提高疫苗在灭活前的病毒含量。研究表明,自1996年报道PRRS以来,国内许多学者先后分离到PRRSV,但各地方分离株的滴度都呈现出较低的状态:(1)台湾分离株,为<br>美洲型毒株,毒价为106TCID50/0.1ml(台湾养猪科学研究所);(2)CH-1a、CH-1b、CH-1c、CH-1d株,为美洲型毒株,毒价为106TCID50/0.1ml(哈尔滨兽医研究所)。因此为了提高病毒含量,通常的做法是通过浓缩蓝耳病抗原十几倍甚至几十倍,如此以来不仅增加了生产成本,同时在浓缩过程中蓝耳病病毒的免疫原性会有所降低。本专利技术针对上述不足,提出一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,通过该稀释液处理猪繁殖与呼吸综合征病毒后接种细胞,可特异性提高该病毒在靶细胞上的增殖量,可以提高1-2个病毒滴度即病毒含量提高10-100倍。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题,本专利技术的目的在于设计提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液及其制备方法。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分:氨基酸组合10~30g、复方中药多糖10~30g和脂质体10~30g,所述的氨基酸组合包括叶酸、核黄素磷酸钠、右泛醇和抗坏血酸,所述的复方中药多糖由独活、云香草、蔓荆子、密蒙花、玄参和赤芍提取得到。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于该稀释液的pH为7.0~7.5。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的磷酸缓冲液由氯化钠6~10g,氯化钾0.05~0.5g,磷酸氢二钠1~1.2g,磷酸二氢钾0.05~0.5g,氯化钙0.05~0.2g,含6个结晶水的氯化镁0.05~0.2g溶于1000ml双蒸水中得到。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分:氨基酸组合14~26g、复方中药多糖15~25g和脂质体12~28g。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的氨基酸组合含有以下重量百分比含量的氨基酸:叶酸20~40%、核黄素磷酸钠10~40%、右泛醇10~30%和抗坏血酸30~60%。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的脂质体按以下步骤制得:按大豆卵磷脂3重量份和甘氨胆酸1重量份称取大豆卵磷脂和甘氨胆酸,用氯仿进行溶解,并使其混合均匀,并通过减压法去除溶液中氯仿,制备脂质体膜;配制pH值为7.0~8.0、浓度为0.1m/l的枸橼酸和枸橼酸钾缓冲溶液,将该缓冲溶液加入到脂质体膜溶液中,脱水后用匀浆机制备成脂质体。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的复方中药多糖按以下步骤制得:a、按独活5~20份、云香草10~30份、蔓荆子10~30份、密蒙花5~20份、玄参10~30和赤芍20~40份称取各中药原料,切碎、洗净后用冷水浸泡过夜,再加入原料重量15倍的纯化水,水浴至90℃,并保持在90℃,熬制2小时,熬制过程中每10分钟搅拌一次;b、弃去a中药渣,收集药液,室温冷却后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,收集上清;c、将b中上清进行醇沉,沉淀得到粗制中药多糖;d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖,洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解,溶解后,按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜,吸附后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,收集上清;e、将d中上清液进行10倍浓缩,制得中药多糖浓缩液;f、将e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复方中药多糖。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的步骤a中按独活10~15份、云香草15~25份、蔓荆子15~25份、密蒙花10~15份、玄参15~25和赤芍25~35份称取各中药原料。所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液的制备方法,其特征在于包括以下工艺步骤:1)磷酸缓冲溶液的配制:按氯化钠6~10g,氯化钾0.05~0.5g,磷酸氢二钠1~1.2g,磷酸二氢钾0.05~0.5g,氯化钙0.05~0.2g,含6个结晶水的氯化镁0.05~0.2g溶于1000ml双蒸水中,无菌条件下通过0.22μm滤膜,过滤除菌备用;2)复方中药多糖的制备:a、按独活5~20份、云香草10~30份、蔓荆子10~30份、密蒙花5~20份、玄参10~30和赤芍20~40份称取各中药原料,切碎、洗净后用冷水浸泡过夜,再加入原料重量15倍的纯化水,水浴至90℃,并保持在90℃,熬制2小时,熬制过程中每10分钟搅拌一次;b、弃去a中药渣,收集药液,室温冷却后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,收集上清;c、将b中上清进行醇沉,沉淀得到粗制中药多糖;d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖,洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解,溶解后,按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜,吸附后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,收集上清;e、将d中上清液进行10倍浓缩,制得中药多糖浓缩液;f、将e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉;3)脂质体按的制备:按大豆卵磷脂3重量份和甘氨胆酸1重量份称取大豆卵磷脂和甘氨胆酸本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分:氨基酸组合10~30g、复方中药多糖10~30g和脂质体10~30g,所述的氨基酸组合包括叶酸、核黄素磷酸钠、右泛醇和抗坏血酸,所述的复方中药多糖由独活、云香草、蔓荆子、密蒙花、玄参和赤芍提取得到。

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下
重量配比的组分:氨基酸组合10~30g、复方中药多糖10~30g和脂质体10~30g,所述的氨
基酸组合包括叶酸、核黄素磷酸钠、右泛醇和抗坏血酸,所述的复方中药多糖由独活、云香
草、蔓荆子、密蒙花、玄参和赤芍提取得到。
2.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于该稀释液的
pH为7.0~7.5。
3.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的磷酸
缓冲液由氯化钠6~10g,氯化钾0.05~0.5g,磷酸氢二钠1~1.2g,磷酸二氢钾0.05~0.5g,
氯化钙0.05~0.2g,含6个结晶水的氯化镁0.05~0.2g溶于1000ml双蒸水中得到。
4.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的每
1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分:氨基酸组合14~26g、复方中药多糖15~
25g和脂质体12~28g。
5.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的氨基
酸组合含有以下重量百分比含量的氨基酸:叶酸20~40%、核黄素磷酸钠10~40%、右泛醇10
~30%和抗坏血酸30~60%。
6.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的脂质
体按以下步骤制得:按大豆卵磷脂3重量份和甘氨胆酸1重量份称取大豆卵磷脂和甘氨胆
酸,用氯仿进行溶解,并使其混合均匀,并通过减压法去除溶液中氯仿,制备脂质体膜;配制
pH值为7.0~8.0、浓度为0.1m/l的枸橼酸和枸橼酸钾缓冲溶液,将该缓冲溶液加入到脂质
体膜溶液中,脱水后用匀浆机制备成脂质体。
7.如权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒稀释液,其特征在于所述的复方
中药多糖按以下步骤制得:
a、按独活5~20份、云香草10~30份、蔓荆子10~30份、密蒙花5~20份、玄参10~30和
赤芍20~40份称取各中药原料,切碎、洗净后用冷水浸泡过夜,再加入原料重量15倍的纯化
水,水浴至90℃,并保持在90℃,熬制2小时,熬制过程中每10分钟搅拌一次;
b、弃去a中药渣,收集药液,室温冷却后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,收集上清;
c、将b中上清进行醇沉,沉淀得到粗制中药多糖;
d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖,洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解,
溶解后,按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜,吸附后经10000rpm离心10分钟,弃去沉淀,...

【专利技术属性】
技术研发人员:沈建军张秀文李阳
申请(专利权)人:浙江美保龙生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:浙江;33

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