一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及灭活疫苗技术领域，公开了一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法，所述增强剂包括0.15‑1.2mg/mL的单磷酰脂质A、0.5‑0.9mg/mL的β‑葡聚糖和10‑50mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为6‑12份、β‑葡聚糖7‑11份和猪源细胞质多肽10‑18份；所述制备方法为将含有单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β‑葡聚糖的混合液与吐温‑80混合，得到水相溶液；然后将白油和司盘‑80混合，得到油相溶液；最后将水相溶液与油相溶液混合乳化后，得到灭活疫苗免疫增强剂。本发明专利技术能够提高猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的免疫时间，并提高抗体水平。

【技术实现步骤摘要】
一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法
本专利技术涉及灭活疫苗
，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(简称PRRS)又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(简称PRRSV)引起的，以妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎，仔猪和育肥猪发生呼吸道症状的疾病。PRRS难以有效的防制，首先是PRRSV以肺巨噬细胞为靶细胞，具有抗体依赖性增强作用(ADE)造成了一定的免疫抑制，其次是PRRSV不断的发生着变异，并且PRRS没有有效的治疗药物，当前，疫苗免疫被认为是预防和控制PRRS的重要手段。同时与其他控制手段相比，疫苗免疫也是各种规模猪场(大、中、小型猪场)的最经济的选择。猪繁殖与呼吸综合征疫苗广泛应用以来，该病的传播和蔓延势头有所减缓。目前我国用于预防猪蓝耳病的疫苗共有三种类型：猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(包括进口美洲经典毒株和国内经典毒株)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗和猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗。目前的三种类型疫苗各有优点，比如活疫苗相对于灭活疫苗，弱毒的活疫苗诱导的免疫反应持续时间长且更有效，能激活细胞免疫和体液免疫；灭活疫苗相对于活疫苗，灭活疫苗的主要优点是安全，疫苗株不会传染给其他猪只。但是现有灭活疫苗的缺点很明显，主要体现在抗体产生慢、免疫期短、抗原谱窄，抗体水平较低、不能诱导产生粘膜抗体等；这些灭活疫苗的缺点严重的影响了灭活疫苗的大面积推广使用，因此需要一种能够提高抗原免疫增强作用免疫增强剂来弥补目前灭活疫苗中的缺陷。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法，能够提高猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的免疫时间，并提高抗体水平。本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，所述增强剂包括0.15-1.2mg/mL的单磷酰脂质A、0.5-0.9mg/mL的β-葡聚糖和10-50mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为6-12份、β-葡聚糖7-11份和猪源细胞质多肽10-18份。单磷酰脂质A作为佐剂加入，通过在感染前产生病原体特异性免疫应答，通常，单独使用疫苗抗原进行免疫接种并不能够诱导稳健或持久的免疫反应，从而可能导致抵抗感染的保护性免疫失败，因此，单磷酰脂质A佐剂增强免疫后的细胞或体液免疫应答。β-葡聚糖能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激猪的机体免疫系统。猪源细胞质多肽，其通过病毒特异性刺激，产生免疫增强成分，作为添加物特异性提高抗原免疫增强作用。进一步，所述免疫增强剂包括0.55-75mg/mL的单磷酰脂质A、0.7-0.8mg/mL的β-葡聚糖和20-30mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为8-10份、β-葡聚糖8-10份和猪源细胞质多肽12-15份。进一步，所述免疫增强剂包括0.65mg/mL的单磷酰脂质A、0.75mg/mL的β-葡聚糖和25mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为9份、β-葡聚糖9份和猪源细胞质多肽14份。进一步，所述免疫增强剂为油乳剂。本专利技术还提供了一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，将含有单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液与吐温-80混合，得到水相溶液；然后将白油和司盘-80混合，得到油相溶液；最后将水相溶液与油相溶液混合乳化后，得到灭活疫苗免疫增强剂。进一步，所述吐温-80的体积为单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液体积的1.5-2倍，所述白油和司盘-80的体积比为1:3，所述白油和司盘-80油相溶液的体积与吐温-80的体积相等。进一步，所述猪源细胞质多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取新鲜的猪源性组织使用去离子水清洗、分割，加入去离子水高速绞碎成浆液；S2、在浆液中加入总质量1-2％的氯化钠，加热到80-100℃下溶解，然后进行抽滤，收集滤液，得到第一滤液和滤渣；S3、向第一滤液中加入第一滤液总重量2-3％的2709碱性蛋白酶和第一滤液总重量1-2％猪源细胞质多肽提取剂，在温度为55-65℃，pH为8-9的条件下间歇搅拌，酶解提取5-7h，得到第一酶解提取液；S4、在滤渣中加入与滤渣等质量的去离子水，然后加入2709碱性蛋白酶调节混合液的pH为8-9，再加入总质量4-6％的猪源细胞质多肽提取剂，将其控制在45-50℃的温度下酶解提取5-7h，得到第二酶解提取液；S5、将第一酶解提取液和第二酶解提取液混合，在45-50℃的温度下酶解提取1-2h，然后抽滤，收集滤液，得到第二滤液；S6、在第二滤液中加入第二滤液质量2-3％的活性炭，搅拌反应50-70min，滤出活性炭，调节滤液pH为7，先经蒸发浓缩，再经过干燥后得到猪源细胞质多肽。进一步，所述猪源细胞质多肽提取剂，按体积份数，包括磷酸溶液1-2份、乙腈溶液2-3份、甲醇溶液0.5-0.8份和三氟乙酸0.2-0.6份组成的混合溶液。将后的经磷酸、乙腈溶液处理去除磷脂、脂肪和高峰度蛋白，后经疏水性固相萃取柱去除小分子干扰杂质，经溶液三氟乙酸与乙腈洗脱最终得到目标多肽。进一步，所述猪源细胞质多肽提取剂，按体积份数，包括磷酸溶液1.5份、乙腈溶液2.5份、甲醇溶液0.65份和三氟乙酸0.4份组成的混合溶液。本专利技术的有益效果：1、本专利技术的单磷酰脂质A通过在感染前产生病原体特异性免疫应答；β-葡聚糖能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激猪的机体免疫系统；猪源细胞质多肽，其通过病毒特异性刺激，产生免疫增强成分，作为添加物特异性提高抗原免疫增强作用。增强剂可与灭活疫苗组分之间的协同效应，提高机体的免疫水平、对抗原的免疫应答，从而提高免疫后的抗体水平、缩短免疫窗口期，增强疫苗的免疫效果。2、本专利技术的免疫增强剂通过2709碱性蛋白酶和源细胞质多肽提取剂提取猪源细胞中的多肽，提取过程中无废水、废渣产生，制备方法简单，易操作，成本低。具体实施方式以下将结合实施例对本专利技术进行详细说明：实施例1、本实施例为第一种猪源细胞质多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取新鲜的猪源性组织使用去离子水清洗、分割，加入去离子水高速绞碎成浆液；S2、在浆液中加入总质量1％的氯化钠，加热到80℃下溶解，然后进行抽滤，收集滤液，得到第一滤液和滤渣；S3、向第一滤液中加入第一滤液总重量2％的2709碱性蛋白酶和第一滤液总重量1％猪源细胞质多肽提取剂，在温度为55℃，pH为8的条件下间歇搅拌，酶解提取5h，得到第一酶解提取液；其中本实施例的猪源细胞质多肽提取剂，按体积份数包括磷酸溶液1L、乙腈溶液2L、甲醇溶液0.5L和三氟乙酸0.2L组成的混合溶液；S4、在滤渣中加入与滤渣等质量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述增强剂包括0.15-1.2mg/mL的单磷酰脂质A、0.5-0.9mg/mL的β-葡聚糖和10-50mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为6-12份、β-葡聚糖7-11份和猪源细胞质多肽10-18份。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述增强剂包括0.15-1.2mg/mL的单磷酰脂质A、0.5-0.9mg/mL的β-葡聚糖和10-50mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为6-12份、β-葡聚糖7-11份和猪源细胞质多肽10-18份。


2.根据权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂包括0.55-75mg/mL的单磷酰脂质A、0.7-0.8mg/mL的β-葡聚糖和20-30mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为8-10份、β-葡聚糖8-10份和猪源细胞质多肽12-15份。


3.根据权利要求2所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂包括0.65mg/mL的单磷酰脂质A、0.75mg/mL的β-葡聚糖和25mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为9份、β-葡聚糖9份和猪源细胞质多肽14份。


4.根据权利要求3所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂为油乳剂。


5.一种如权利要求1-4任一权利要求所述的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征在于：将含有单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液与吐温-80混合，得到水相溶液；然后将白油和司盘-80混合，得到油相溶液；最后将水相溶液与油相溶液混合乳化后，得到灭活疫苗免疫增强剂。


6.根据权利要求5所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征在于：所述吐温-80的体积为单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液体积的1.5-2倍，所述白油和司盘-80的体积比为1:3，所述白油和司盘-80油相溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈建军，陈雪，张秀文，屈健，陈芳，李阳，
申请(专利权)人：浙江美保龙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33