针对RSV的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及组合物，这些组合物包含稳定化在该融合前构象的重组呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽，其中如与野生型RSV F多肽相比，所述RSV F多肽包含至少一个突变，其中该至少一个突变选自下组，该组由以下各项组成：a)在位置486上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，b)在位置489上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，以及c)在位置398上的氨基酸丝氨酸(S)的突变和/或在位置394上的氨基酸赖氨酸(K)的突变。本发明专利技术还涉及包含编码所述稳定的RSV F多肽的分离的核酸分子的组合物。子的组合物。

【技术实现步骤摘要】
针对RSV的疫苗
[0001]本申请是申请日为2016年7月7日，申请号为201680039241.4，题目为“针对RSV的疫苗”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及医学领域。更具体地，本专利技术涉及针对RSV的疫苗。

技术介绍

[0003]在20世纪50年代发现呼吸道合胞病毒(RSV)后，该病毒很快成为人类中与下呼吸道感染和上呼吸道感染相关的公认的病原体。据估计，全世界每年有6400万RSV感染，导致16万人死亡(世卫组织急性呼吸道感染更新2009年9月)。最严重的疾病尤其发生在早产儿，老年人和免疫受损的个体中。在2岁以下的儿童中，RSV是最常见的呼吸道病原体，占因呼吸道感染而住院的约50％，并且住院高峰发生在2
‑
4月龄。据报道，几乎所有儿童到2岁时都被RSV感染过。终身重复感染归因于无效的自然免疫力。在老年人中，RSV疾病负担与由非大流行性A型流感感染引起的那些相似。
[0004]RSV是一种属于肺病毒亚科的副粘病毒。它的基因组编码各种蛋白质，包括称为RSV糖蛋白(G)和RSV融合蛋白(F)的膜蛋白，它们是用于中和抗体的主要抗原靶标。针对F1蛋白质的融合介导部分的抗体可以防止细胞中的病毒吸收，并且因此具有中和作用。
[0005]当前不存在针对RSV感染的疫苗，但是由于疾病负担高其是被希望的。RSV融合糖蛋白(RSV F)是一种有吸引力的疫苗抗原，因为如上所述，它是人类血清中中和抗体的主要靶标。因此，针对RSV F(帕利珠单抗)的中和单克隆抗体可以防止严重的疾病并且已经被批准用于在婴儿中的预防。
[0006]RSV F通过从不稳定的融合前构象融合到稳定的融合后构象的不可逆的蛋白质重折叠，将病毒和宿主细胞膜融合。已经确定了RSV F(McLellan JS等人，Science[科学]342,592
‑
598(2013)；McLellan JS等人，Nat Struct Mol Biol[自然结构与分子生物学]17,248
‑
250(2010)；McLellan JS等人，Science [科学]340,1113
‑
1117(2013)；Swanson KA等人，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America[美国国家科学院院刊]108,9619
‑
9624(2011))和来自相关的副粘病毒的融合蛋白的两种构象的结构，提供了对这种复杂的融合机器的机制的深刻理解。与其他I类型融合蛋白一蛋白质一样，无活性前体(RSV F0)需要在细胞内成熟过程中通过弗林蛋白酶样蛋白酶进行切割。RSV F含有两个弗林蛋白酶位点，这导致三个多肽：F2、p27和F1，其中后者在其N
‑
末端含有疏水性融合肽(FP)。为了从融合前构象重折叠成融合后构象，在残基137和216之间的包括FP和七肽重复区A(HRA)的重折叠区域1(RR1)必须从螺旋、环和链的组合转化成长的连续螺旋。然后，位于RR1的N
‑
末端片段的FP能够远离病毒膜延伸并插入到靶细胞的近侧膜中。接下来，在融合前F刺突中形成C
‑
末端茎并包括七肽重复区B(HRB)的重叠区域2(RR2)重新定位到RSV F的头部的另一侧并且将HRA卷曲螺旋三聚体与HRB结构域结合以形成六螺旋束。RR1卷曲螺旋的形成和RR2的重新定位以完成六螺旋束是在重折叠过程中发生的最显
著的结构变化。
[0007]人类血清中的大多数中和抗体是针对融合前构象，但是由于它的不稳定性，融合前构象具有在溶液中和病毒体表面上过早重折叠成融合后构象的倾向。具有高表达水平并保持稳定的融合前构象的RSV F蛋白质将成为用于针对RSV的基于亚基或载体的疫苗的有希望的候选者。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了组合物，这些组合物包含稳定的、重组的、融合前呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽，即稳定化在融合前构象的重组RSV F多肽。本专利技术的RSV F多肽包含至少一个表位，该表位对融合前构象F蛋白质是特异性的。在某些实施例中，这些融合前RSV F多肽是可溶性融合前RSVF多肽。
[0009]本专利技术还提供了包含编码稳定的融合前RSV F多肽的核酸分子的组合物。
[0010]在某些实施例中，这些核酸分子编码稳定化在融合前构象的全长膜结合RSV F蛋白质。在某些实施例中，这些核酸分子编码可溶性稳定化的融合前RSV F多肽。
[0011]在某些实施例中，这些核酸分子存在于载体中。在某些实施例中，对编码RSV F多肽的核酸进行密码子优化，用于在人类细胞中表达。
[0012]本专利技术进一步提供了如在此所述的组合物，用于诱导针对RSV F蛋白质的免疫应答，尤其用作疫苗。
[0013]本专利技术还涉及用于在受试者中诱导抗呼吸道合胞病毒(RSV)免疫应答的方法，这些方法包括给予受试者有效量的如在此所述的组合物。优选地，该诱导免疫应答特征在于对RSV的中和抗体和/或针对RSV的保护性免疫。在具体的方面中，本专利技术涉及一种用于在受试者中诱导中和抗呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白质抗体的方法，该方法包括给予受试者有效量的包含融合前RSV F多肽、编码所述RSV F多肽的核酸分子、和/或包含所述核酸分子的载体的组合物。
[0014]本专利技术进一步提供了一种用于针对RSV对受试者进行疫苗接种的方法，该方法包括给予受试者根据本专利技术的组合物。
[0015]在某些实施例中，肌内给予这些组合物。
[0016]在某些实施例中，向受试者不止一次给予根据本专利技术的组合物。
[0017]本专利技术还提供了一种用于在例如受试者的鼻道和肺中减少感染和/或复制RSV的方法，该方法包括给予受试者根据本专利技术的组合物。这将在受试者中减少由RSV感染引起的不良反应，并且因此有助于保护受试者免受给予疫苗后的这种不良反应。在某些实施例中，RSV感染的不良反应基本上可以被预防，即降至如此低的水平，以至于它们不具有临床相关性。
附图说明
[0018]图1：使融合前构象稳定化的RSV F突变。在升高的温度下热休克后，保留处于融合前构象的表面表达的RSV F突变体的百分比。在不同浓度进行实验2
‑
5次。在显示误差条时，它们代表来自独立实验的至少两个数据点的标准偏差。
具体实施方式
[0019]呼吸道合胞病毒(RSV)的融合蛋白(F)参与了病毒膜与感染所需的宿主细胞膜的融合。将RSV F mRNA翻译成被称为F0的574个氨基酸前体蛋白质，其在N
‑
末端含有信号肽序列(例如，SEQ ID NO:1的氨基酸残基1
‑
26)，该信号肽序列在内质网中被信号肽酶去除。F0在两个位点(在氨基酸残基109/110和136/137之间)处被转运高尔基氏体中的细胞蛋白酶(尤其弗林蛋白酶)切割，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组合物，该组合物包含稳定化在融合前构象的重组呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽，其中如与野生型RSV F多肽相比，所述RSV F多肽包含至少一个突变，其中该至少一个突变选自下组，该组由以下各项组成：a)在位置486上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，b)在位置489上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，以及c)在位置398上的氨基酸丝氨酸(S)的突变和/或在位置394上的氨基酸赖氨酸(K)的突变。2.一种组合物，该组合物包含编码重组呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽的核酸序列，该重组呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽稳定化在该融合前构象，其中如与野生型RSV F多肽相比，所述RSV F多肽包含至少一个突变，其中该至少一个突变选自下组，该组由以下各项组成：a)在位置486上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，b)在位置489上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，以及c)在位置398上的氨基酸丝氨酸(S)的突变和/或在位置394上的氨基酸赖氨酸(K)的突变。3.根据权利要求2所述的组合物，其中该核酸序列包含于载体中。4.根据权利要求1、2或3所述的组合物，其中在位置486上的氨基酸的突变是从天冬氨酸(D)到天冬酰胺(N)的突变。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：扬森疫苗与预防公司，
类型：发明
国别省市：