stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。本发明专利技术提供了促进stomatin基因表达在制备产品中的应用；所述产品的用途为抑制肿瘤细胞转移。本发明专利技术还保护用于抑制stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为抑制肿瘤细胞增殖。本发明专利技术通过实验证明，stomatin基因过表达可促进肺癌细胞的生长、增殖，但却能显著抑制其垂直及水平迁移扩散能力，高度提示其在肺癌发生发展中发挥重要功能，既能发挥癌基因的功能促进肿瘤增殖、生长，又有阻碍肿瘤发展的功能，抑制肿瘤转移。本发明专利技术为肺癌诊断治疗提供了一个新的靶点。

Application of stomatin protein and its coding gene in diagnosis and treatment of lung cancer

The invention discloses the application of stomatin protein and its coding gene in the diagnosis and treatment of lung cancer. The invention provides an application of promoting stomatin gene expression in a preparation product for inhibiting tumor cell metastasis. The invention also protects the application of a substance used to inhibit stomatin gene expression in a preparation product for inhibiting the proliferation of cancer cells. The present invention has been proved by experiments that stomatin gene overexpression can promote the growth and proliferation of lung cancer cells, but can significantly inhibit their vertical and horizontal migration and diffusion ability, highly suggesting that stomatin gene plays an important role in the occurrence and development of lung cancer. It can not only play the function of oncogene to promote the proliferation and growth of tumors, but also hinder the development of tumors and inhibit the metastasis of tumors. The invention provides a new target for diagnosis and treatment of lung cancer.

【技术实现步骤摘要】
stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。
技术介绍
肺癌是全球癌症相关死亡的最常见原因。尽管近年来肺癌早期诊断和综合治疗技术得到极大发展，但对肺癌患者总生存率的影响不大。因此，确定新的关键基因及其功能机制对探索和发展肺癌诊断治疗新方法至关重要。stomatin是一个重要的脂筏蛋白，能同多种胞膜表面的离子通道蛋白及转运蛋白相互作用，是重要的胞膜组成成分。然而，stomatin在肿瘤发生及发展过程中的作用及功能还不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。本专利技术保护stomatin基因或用于促进stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。本专利技术还保护stomatin蛋白或用于提高stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。本专利技术还保护一种产品，其活性成分为促进stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。所述产品还包括用于抑制肿瘤增殖的物质。本专利技术还保护一种产品，其活性成分为提高stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。所述产品还包括用于抑制肿瘤增殖的物质。本专利技术还保护stomatin基因或用于抑制stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：(b1)抑制肿瘤细胞增殖；(b2)促进肿瘤细胞凋亡；(b3)抑制肿瘤生长；(b4)治疗癌症。本专利技术还保护stomatin蛋白或用于降低stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：(b1)抑制肿瘤细胞增殖；(b2)促进肿瘤细胞凋亡；(b3)抑制肿瘤生长；(b4)治疗癌症。本专利技术还保护一种产品，其活性成分为抑制stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：(b1)抑制肿瘤细胞增殖；(b2)促进肿瘤细胞凋亡；(b3)抑制肿瘤生长；(b4)治疗癌症。所述产品还包括用于抑制肿瘤转移的物质。本专利技术还保护一种产品，其活性成分为降低stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：(b1)抑制肿瘤细胞增殖；(b2)促进肿瘤细胞凋亡；(b3)抑制肿瘤生长；(b4)治疗癌症。所述产品还包括用于抑制肿瘤转移的物质。以上任一所述促进肿瘤细胞凋亡具体为促进肿瘤细胞早期凋亡。本专利技术还保护stomatin基因或stomatin蛋白作为靶点，在筛选或开发癌症治疗药物中的应用。本专利技术还保护stomatin基因或stomatin蛋白作为癌症治疗靶点的应用。以上任一所述癌症具体可为肺癌。以上任一所述肿瘤细胞具体可为肺癌细胞。以上任一所述肿瘤细胞具体可为人肺癌细胞。所述肺癌细胞具体可为A549细胞、H520细胞、H1299细胞或95D细胞。以上任一所述stomatin蛋白如序列表的序列1所示。以上任一所述stomatin基因的编码区如序列表的序列2所示。以上任一所述抑制stomatin基因表达的物质为抑制stomatin基因表达的siRNA。以上任一所述促进stomatin基因表达的物质为含有stomatin基因的重组质粒。所述重组质粒具体为将pcDNA3.1-myc-his(-)A质粒XhoI和EcoRI酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列2所示的DNA分子得到的重组质粒。本专利技术公开了stomatin蛋白在肺癌诊断治疗中的应用。本专利技术通过实验证明，stomatin基因过表达可促进肺癌细胞的生长、增殖，但却能显著抑制其垂直及水平迁移扩散能力，高度提示其在肺癌发生发展中发挥重要功能，既能发挥癌基因的功能促进肿瘤增殖、生长，又有阻碍肿瘤发展的功能，抑制肿瘤转移。本专利技术为肺癌诊断治疗提供了一个新的靶点。附图说明图1为MTT检测stomatin对细胞增殖促进作用。图2为流式检测stomatin敲降对A549细胞早期凋亡的促进作用。图3为流式检测stomatin过表达对A549细胞早期凋亡的抑制作用。图4为流式检测stomatin敲降对H1299细胞早期凋亡的促进作用。图5为动物实验检测stomatin对肺癌细胞增殖促进作用。图6为划痕检测stomatin敲降A549细胞水平迁移情况。图7为transwell检测stomatin敲降A549细胞运动能力。图8为Matrigel侵袭实验检测stomatin敲降A549细胞侵袭能力。图9为动物实验检测stomatin对肺癌细胞转移抑制作用。图10为stomatin影响肺癌细胞actin细胞骨架重塑。图11为stomatin表达升高抑制EMT发生。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。A549细胞：美国ATCC，货号：CCL-185TM。H520细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。H1299细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。95D细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。pcDNA3.1-myc-his(-)A：Invitrogen，货号：V85520。BALB/c裸鼠：北京华阜康生物技术股份有限公司，雌性，3-5周龄，体重15-20g。stomatin蛋白如序列表的序列1所示。stomatin基因编码区如序列表的序列2所示。实施例1、细胞制备一、瞬时敲降stomatin表达的细胞制备1、针对stomatin基因设计siRNA，序列如下：正义链(5'-3')：GGAAUGUUCUGGGCACCAAdTdT；反义链(3'-5')：dTdTCCUUACAAGACCCGUGGUU。2、人工合成步骤1中的siRNA。3、取步骤2合成的siRNA，采用小RNA转染试剂盒(锐博生物，货号：C10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.stomatin基因或用于促进stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)‑(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。

【技术特征摘要】
1.stomatin基因或用于促进stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。2.stomatin蛋白或用于提高stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。3.一种产品，其活性成分为促进stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下((a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；(a5)抑制肿瘤转移；(a6)抑制肿瘤扩散；(a7)治疗癌症。4.一种产品，其活性成分为提高stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：(a1)抑制肿瘤细胞转移；(a2)抑制肿瘤细胞扩散；(a3)抑制肿瘤...

【专利技术属性】
技术研发人员：马洁，袁伟，安华英，隋晨光，
申请(专利权)人：北京医院，
类型：发明
国别省市：北京,11