一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞及其诱导分化方法，其是体外贴壁培养多能干细胞，保持其未分化状态；将细胞制备成单细胞或细胞团块悬液，接种于包被基质胶的培养皿上，使用多能干细胞培养液进行培养；细胞贴壁后在培养液中添加GSK‑3通路抑制剂组合；生长2～10天后，得到中胚层祖细胞群体；使用间充质干细胞培养液持续传代培养2～6次后检测间充质的细胞表型，即得。本发明专利技术解决成人来源间充质干细胞及其他非限定诱导途径多能干细胞来源的间充质干细胞异质性与混杂的缺点，获得的中胚层谱系间充质干细胞具有更强的增殖与免疫调节能力；标准化诱导分化程序可保证不同批次间获得的细胞群具有良好的一致性。

【技术实现步骤摘要】
一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞及其制备方法
本专利技术属于生物与医学领域，更具体地，本专利技术涉及一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞及其制备方法，包括使用特殊的培养条件和选择技术。本专利技术还涉及利用这群中胚层谱系间充质干细胞的治疗方法或其临床应用。
技术介绍
间充质干细胞(MSCs)属于成体干细胞的一种，是在成人体内许多组织如骨髓、脐带血、脂肪和外周血等中都存在的一大类多能细胞，在正常时处于静止状态，当所在的组织或器官受到损伤时，他们可以迅速进入增殖状态并保持极大的增殖潜力，并分化为不同的细胞类型以修复受损组织。最先发现的一类MSCs是骨髓间充质干细胞(FriedensteinAJ,JEmbryolExpMorphol,1966)，其能在不同的诱导条件下向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、神经细胞、造血支持细胞等方向分化，具有典型的干细胞特点。由于MSCs具有易于分离扩增及具有多向分化潜能等优点，最早被认为是组织工程理想的种子细胞而成为研究热点。随后发现MSCs具有强大的免疫调节能力，更进一步推动了MSCs相关的研究，使其成为最有希望实现临床化的明星细胞之一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)体外贴壁培养多能干细胞，保持其未分化状态；(2)当(1)中细胞扩增到所需数量后，将细胞制备成单细胞或多细胞团块；(3)将单细胞或多细胞团块接种于包被基质胶的培养皿上，使用多能干细胞培养液进行培养；(4)生长0.5～5天后，在培养液中添加GSK‑3通路抑制剂组合；(5)生长2～10天后，得到中胚层祖细胞群体；将培养液更换为间充质干细胞培养液，持续培养至细胞汇合；(6)解离收集细胞并将收集的细胞接种入新的培养皿中，使用间充质干细胞培养液持续传代培养2～6次后检测间充质干细胞的细胞表型，即得来自多能干细胞的中胚...

【技术特征摘要】
1.一种来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)体外贴壁培养多能干细胞，保持其未分化状态；(2)当(1)中细胞扩增到所需数量后，将细胞制备成单细胞或多细胞团块；(3)将单细胞或多细胞团块接种于包被基质胶的培养皿上，使用多能干细胞培养液进行培养；(4)生长0.5～5天后，在培养液中添加GSK-3通路抑制剂组合；(5)生长2～10天后，得到中胚层祖细胞群体；将培养液更换为间充质干细胞培养液，持续培养至细胞汇合；(6)解离收集细胞并将收集的细胞接种入新的培养皿中，使用间充质干细胞培养液持续传代培养2～6次后检测间充质干细胞的细胞表型，即得来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞群。2.根据权利要求1所述的来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞的诱导分化方法，其特征在于，步骤(3)所述的单细胞或多细胞团块的接种数目为2×102至2×106/cm2。3.根据权利要求1所述的来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞的诱导分化方法，其特征在于，步骤(3)中所述基质胶为Matrigel或层粘连蛋白。4.根据权利要求1所述的来自多能干细胞的中胚层谱系间充质干细胞的诱导分化方法，其特征在于，步骤(3)中还添加有ROCK通路抑制剂；所述ROCK通路抑制剂为Y27632或Thiazovivin。5.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：项鹏，李伟强，翟志臣，宋武，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44