前列腺癌特异性外泌体、lncRNA及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种前列腺癌特异性外泌体的制备方法。本发明专利技术还公开了一种前列腺癌特异性外泌体及其应用。本发明专利技术还公开了一种前列腺癌外泌体中的长链非编码RNA SAP30L‑AS1和SChLAP1的制备方法。本发明专利技术还公开了前列腺癌外泌体中的长链非编码RNA SAP30L‑AS1和SChLAP1表达量的试剂在制备用于前列腺癌诊断试剂中的应用。本发明专利技术还公开了一种前列腺癌诊断试剂盒。本发明专利技术可以成功分离前列腺癌患者血浆中前列腺癌特异性外泌体，并进行长链非编码RNA SAP30L‑AS1 和SChLAP1的检测。本发明专利技术的诊断效能及灵敏度和特异度均显著提高。

Prostatic carcinoma specific exocrine, lncRNA and its preparation and Application

The present invention discloses a method for preparing prostate cancer specific exocrine. The invention also discloses a prostate cancer specific exocrine and its application. \u672c\u53d1\u660e\u8fd8\u516c\u5f00\u4e86\u4e00\u79cd\u524d\u5217\u817a\u764c\u5916\u6ccc\u4f53\u4e2d\u7684\u957f\u94fe\u975e\u7f16\u7801RNA\u00a0SAP30L\u2011AS1\u548cSChLAP1\u7684\u5236\u5907\u65b9\u6cd5\u3002 The invention also discloses a long chain of prostate cancer exosomes in the expression of RNA SAP30L encoding AS1 and SChLAP1 amount of reagents used for preparing diagnostic reagents in prostate cancer. The invention also discloses a diagnostic kit for prostate cancer. The invention can be successfully prostate cancer specific excretion of plasma in patients with prostate cancer were detected and isolated, long chain non RNA AS1 encoding SAP30L and SChLAP1. The diagnostic efficiency and sensitivity and specificity of the present invention are significantly improved.

【技术实现步骤摘要】
前列腺癌特异性外泌体、lncRNA及其制备方法和应用
本专利技术属于生物技术和肿瘤分子生物
，具体涉及前列腺癌特异性外泌体、lncRNA及其制备方法和应用，尤其涉及用双抗体偶联免疫磁珠的方法分离前列腺癌患者血浆中肿瘤来源外泌体及其lncRNASAP30L-AS1和lncRNASChLAP1作为前列腺癌诊断标志物及用于前列腺癌早期诊断的试剂盒。
技术介绍
根据最新的癌症统计数据分析，前列腺癌(PCa)是世界上男性癌症死亡的主要原因之一，2016年，美国新增前列腺癌病例约占新诊断癌症患者人数的21％，我国前列腺癌的发病率也迅速上升。在早期阶段前列腺癌的主要治疗方法是去势治疗，但是在晚期阶段进展为去势抗性前列腺癌(CRPC)，中位生存期仅约为2至3个月。目前，前列腺特异性抗原(PSA)的血浆定量检测使众多前列腺癌患者得以诊断，但由于PSA具有前列腺组织特异性，因此在某些良性病变如良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎中升高，导致其特异性下降，假阳性会引起患者不必要的有创活检和过度治疗。因此寻找早期诊断前列腺癌的分子标志物是前列腺癌研究的重点。外泌体是一种由多种细胞分泌并可以在多种组织细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种前列腺癌特异性外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）血液处理：将血浆经离心分离后，取上清备用；2）血浆总外泌体的分离；3）双抗体偶联免疫磁珠的制备：取磁珠用磷酸盐缓冲液清洗后，用磷酸盐缓冲液重悬得到悬液；向悬液中加入EpCAM和PSMA抗体进行孵育；孵育后用磁力架分离磁珠，用磷酸盐缓冲液进行清洗，分离的磁珠用磷酸盐缓冲液重悬得到悬浮液备用；4）磁珠特异性捕获：用磁力架分离步骤3）的悬浮液得到双抗体偶联免疫磁珠，将步骤2）得到的血浆总外泌体加入双抗体偶联免疫磁珠中孵育；5）前列腺癌特异性外泌体的制备：孵育完成后，用磷酸盐缓冲液清洗，再次用磁力架分离磁珠，即得到磁珠‑双抗体‑血浆前列...

【技术特征摘要】
1.一种前列腺癌特异性外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）血液处理：将血浆经离心分离后，取上清备用；2）血浆总外泌体的分离；3）双抗体偶联免疫磁珠的制备：取磁珠用磷酸盐缓冲液清洗后，用磷酸盐缓冲液重悬得到悬液；向悬液中加入EpCAM和PSMA抗体进行孵育；孵育后用磁力架分离磁珠，用磷酸盐缓冲液进行清洗，分离的磁珠用磷酸盐缓冲液重悬得到悬浮液备用；4）磁珠特异性捕获：用磁力架分离步骤3）的悬浮液得到双抗体偶联免疫磁珠，将步骤2）得到的血浆总外泌体加入双抗体偶联免疫磁珠中孵育；5）前列腺癌特异性外泌体的制备：孵育完成后，用磷酸盐缓冲液清洗，再次用磁力架分离磁珠，即得到磁珠-双抗体-血浆前列腺癌特异外泌体复合物即为前列腺癌特异性外泌体。2.根据权利要求1所述的前列腺癌特异性外泌体的制备方法，其特征在于，所述磁珠为链霉素亲和修饰的磁珠，磁珠直径为2.8μm。3.根据权利要求1所述的前列腺癌特异性外泌体的制备方法，其特征在于，所述EpCAM和PSMA抗体为生物素标记的EpCAM和PSMA抗体。4.一种前列腺癌外泌体中的长链非编码RNASAP30L-AS1和SChLAP1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）外泌体RNA的提取；2）外泌体RNA反转录合成cDNA；3）长链非编码RNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪付兵，王宇慧，陈浩，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42