一种构建DNA大片段文库的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种DNA大片段文库的构建方法及其应用。本发明专利技术提供的DNA大片段文库的构建方法用于DNA大片段文库的构建，包括将DNA大片段的两端加上具有黏性末端的接头或者具有第一切割位点的接头，得到具有黏性末端的DNA大片段的步骤，以及将具有黏性末端的DNA大片段进行环化，得到环化DNA大片段的步骤。本发明专利技术通过对接头的进一步特殊设计，还可以为构建的大片段DNA文库提供质控点。

A method and application of building DNA large fragment library

The invention relates to the construction method of a DNA large fragment library and its application. Construction of a DNA fragment library of the present invention provides the method for constructing a DNA fragment library, including a sticky end at both ends of DNA fragment with joint or has a first cutting site joint, DNA fragment obtained sticky end of the steps, and with a DNA fragment of sticky ends ring, ring by DNA fragment steps. Through the further special design of the joint, the invention can also provide the quality control point for the large fragment DNA library.

【技术实现步骤摘要】
一种构建DNA大片段文库的方法及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种DNA大片段文库的构建方法，由该方法构建的DNA大片段文库以及该DNA大片段文库在测序中的应用。
技术介绍
对基因组序列未知或没有近源物种基因组信息的某个物种，对其不同长度基因组DNA片段及其文库进行序列测定，然后用生物信息学方法进行拼接、组装和注释，从而获得该物种完整的基因组序列图谱，称为基因组从头测序，也叫denovo测序。在基因组学飞速发展的今天，denovo测序与比较基因组方法联合可以用来探索该物种的起源和进化，研究其生长发育、形状生产以及环境适应的分子机制，是快速了解一个物种的途径之一。一个物种基因组序列图谱的完成，也将带动这个物种下游一系列研究的开展，可以构建该物种的基因组数据库，为该物种的后基因组学研究搭建一个高效的平台；为后续的基因挖掘、功能验证提供DNA序列信息。高通量测序也叫二代测序，它可以对上千万条DNA片段同时进行测序，通量、时效和单碱基成本上较Sanger测序有着突破性的提高，这些优点使得目前denovo测序主要由二代测序来完成。二代测序的缺点是读长短，二代测序仪里读长最长的罗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DNA大片段文库的构建方法，包括：步骤B：将DNA大片段的两端加接头，得到具有黏性末端的DNA大片段，所述接头带有生物素标记；步骤C：将步骤B得到的具有黏性末端的DNA大片段进行环化，得到环化DNA大片段，所述环化DNA大片段中除去所述DNA大片段以外的碱基序列为连接区域，其中，所述接头为具有黏性末端的接头，所述具有黏性末端的接头由5'端磷酸化的长链和5'端未磷酸化的短链组成，或者，所述接头为具有第一切割位点的接头，所述具有第一切割位点的接头在至少一条链上有至少一个第一切割位点。

【技术特征摘要】
2016.08.31 CN 20161079420991.一种DNA大片段文库的构建方法，包括：步骤B：将DNA大片段的两端加接头，得到具有黏性末端的DNA大片段，所述接头带有生物素标记；步骤C：将步骤B得到的具有黏性末端的DNA大片段进行环化，得到环化DNA大片段，所述环化DNA大片段中除去所述DNA大片段以外的碱基序列为连接区域，其中，所述接头为具有黏性末端的接头，所述具有黏性末端的接头由5'端磷酸化的长链和5'端未磷酸化的短链组成，或者，所述接头为具有第一切割位点的接头，所述具有第一切割位点的接头在至少一条链上有至少一个第一切割位点。2.根据权利要求1所述的DNA大片段文库的构建方法，其特征在于，当所述接头为具有第一切割位点的接头时，所述步骤B为：将DNA大片段的两端加接头，得到加接头的DNA大片段，采用切割试剂对加接头的DNA大片段进行切割处理，得到具有黏性末端的DNA大片段，所述接头带有生物素标记，当所述接头为具有至少一个脱氧尿苷的接头时，所述步骤B为：将DNA大片段的两端加具有至少一个脱氧尿苷的接头，得到加接头的DNA大片段，采用具有去除脱氧尿苷功能的试剂对加接头的DNA大片段进行切割处理，得到具有黏性末端的DNA大片段，所述接头带有生物素标记。3.根据权利要求1所述的DNA大片段文库的构建方法，其特征在于，所述第一切割位点为黏性末端生成位点，优选地所述黏性末端生成位点为1-20bp的核苷酸序列，更优选为酶切位点和/或核酸酶作用位点，更优选为至少一个脱氧尿苷。4.根据权利要求1-3任一项所述的DNA大片段文库的构建方法，还包括在所述步骤B之前进行的步骤A：将DNA大片段进行末端修复，或者进行末端修复和加A碱基，得到经过处理的DNA大片段，和/或，在步骤A之前进行的步骤A-0：将希望进行测序的DNA片段打断，得到DNA大片段，优选地，所述DNA大片段的片段大小为1.5k～30kbp，优选2k～10kbp，更优选3k～5kbp。5.根据权利要求1所述的DNA大片段文库的构建方法，其特征在于，还包括在步骤C之后进行的如下步骤：在所述步骤C之后进行的步骤D，将所述环化DNA大片段进行线性消化，得到消化后的环化DNA大片段；步骤E：将所述消化后的环化DNA大片段进行打断，得到测序用DNA片段；步骤F：将测序用DNA片段进行片段捕获，采用链霉亲和素化固相载体钓取带有生物素标记的测序用DNA片段；步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁峻彬，李小林，张介中，韩典昂，刘三阳，玄兆伶，李大为，陈重建，
申请(专利权)人：安诺优达基因科技北京有限公司，浙江安诺优达生物科技有限公司，安诺优达义乌医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11