一种高效表达的产脂肪酶基因质粒的构建方法技术

本发明专利技术申请所述的一种高效表达的产脂肪酶基因质粒的构建方法，先将获得潮霉素抗性表达盒克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒，然后利用PCR技术分别扩增青霉的脂肪酶基因(PEL)、构巢曲霉强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子(PgpdA)和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子(TtrpC)，得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒，最后，将该PEL基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体。得到的高效表达的产脂肪酶基因质粒，经转化后得到高表达脂肪酶的基因工程青霉菌，表达高效稳定，较常规的脂肪酶的生产方法具有较大的优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术申请涉及一种质粒的构建方法，具体来说，是一种能够高效表达的产脂肪酶基因质粒的构建方法，属于基因工程

技术介绍
近年来脂肪酶(Lipase EC)在工业应用方面取得了很大进展，碱性脂肪酶是在碱性条件下水解的脂肪酶，它可以水解天然油脂，产生脂肪酸和甘油，是一种专门在异相系统油水接口上水解特殊酯类的酶。碱性脂肪酶具有对底物水解效率高、反应温和、无毒、能在一定条件下水解脂肪作用等优点，已经在洗涤剂、造纸、制革、食品、纺织及轻工业等领域得到广泛的应用，并已经成为全世界酶制剂市场上重要的品种。在现有的技术中，通过对大量的微生物菌种进行选育，已经获得了产碱性脂肪酶能力较强的扩展青霉(P. expansium)菌株，其产脂肪酶的能力已经得到大幅度的提高。但是，传统的菌株育种方法主要依靠随机的理化诱变，目标不明确，费时费力而且收效不明显，目前通过采用这些方法来提高该菌株产脂肪酶的能力已经非常有限，潜力小。
技术实现思路
本专利技术申请即是针对目前在获取脂肪酶的技术中存在的缺乏一种稳定高效的，并且能够在转化青霉菌后高效表达脂肪酶的质粒，本专利技术申请的另一目的是提供该种质粒的构建方法。本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种高效表达的产脂肪酶基因质粒的构建方法，其特征在于：所述的构建方法包括下述的步骤：１）获得潮霉素抗性表达盒克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒；２）利用ＰＣＲ技术分别扩增青霉的脂肪酶基因、构巢曲霉３－磷酸甘油醛脱氢酶启动子和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子，得到有强启动子驱动的ＰＥＬ基因表达盒；３）将该ＰＥＬ基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得含潮霉素筛选标记的ＰＥＬ基因超表达载体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王剑英，张田，唐可轩，王节亮，
申请(专利权)人：深圳市绿微康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：94