高效裂解串联基因，高效裂解质粒及构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，特别涉及一种由噬菌体PhiX174突变裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA组成的高效裂解串联基因，基因序列如序列表中序列3所示。含有上述高效裂解串联基因的高效裂解质粒。高效裂解质粒在制备菌蜕中的应用。本发明专利技术构建的安全高效的裂解质粒pBV-mELS能够在大肠杆菌菌液OD600值达到1.0以上时进行诱导，裂解效率可到达99.99995%，不仅突破了裂解基因E介导的裂解过程依赖宿主细菌生长状态（OD600为0.4～0.6）的局限性，大大提高了菌蜕的产量，还能够有效清除菌蜕中残存的遗产物质，降低了危害性遗传元件（抗生素抗性基因和病原决定簇基因）的侧向传播。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及一种由噬菌体PhiX174突变裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA组成的闻效裂解串联基因，含有此闻效裂解串联基因的闻效裂解质粒及构建方法，还涉及所述高效裂解质粒在制备菌蜕中的应用。
技术介绍
细菌菌蜕(Bacterial Ghosts, BGs)是革兰氏阴性菌被噬菌体PhiX174的裂解蛋白E裂解后形成的完整的细菌空壳。裂解蛋白E是由91个氨基酸组成的疏水跨膜蛋白，其本身不具有任何酶的活性，但可通过寡聚化介导跨膜孔道的形成。孔道形成后，在细胞内高渗透压的作用下革兰氏阴性菌的大部分胞质内容物由孔道排出，从而形成不含核酸、核糖体及其它组分的细菌空壳。这种非变性的基因灭活方式使菌蜕完好地保留了细菌的各种表面抗原成分和免疫粘附分子。因此，菌蜕不仅可以直接作为疫苗使用，而且还可作为递呈异源抗原的重组疫苗及作为核酸疫苗甚至药物的递送载体。细菌菌蜕的形成是通过对裂解基因E的严格表达调控实现的，应用最广泛的是入pL/pR-cI857温控表达系统。基因E的温控表达介导的细菌裂解已经成功地应用于很多革兰氏阴性菌，例如:大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、幽门螺旋杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效裂解串联基因，其特征是基因序列如序列表中序列3所示。

【技术特征摘要】
1.一种闻效裂解串联基因，其特征是基因序列如序列表中序列3所7]^。2.根据权利要求1所述的高效裂解串联基因，其特征是由噬菌体PhiX174突变裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA串联组成的。3.含有上述权利要求1或2所述的高效裂解串联基因的高效裂解质粒。4.根据权利要求3所述的高效裂解质粒，其特征是将权利要求1或2所述的高效裂解串联基因酶切插入PBV220载体中。5.一种权利要求3或4所述的高效裂解质粒的构建方法，其特征是包括以下步骤: (1)以噬菌体PhiX174RFI DNA为模板、以序列表中的序列4和序列5为引物进行PCR扩增，获得突变裂解基因E ； (2)以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板、序列表中序列6和序列7为引物进行PCR扩增，获得葡萄球菌核酸酶A基因； (3)将步骤(I)中得到的突变裂解基因E和步骤(2)中得到的葡萄球菌核酸酶A基因作为下一步PCR反应的模板，用序列表中的序列4和序列7进行扩增，得到串联基因； (4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金宝，张玉玉，吴家强，王可，杜以军，李俊，于江，彭军，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：