含硫醚桥的肽的细菌表面展示和筛选制造技术

本发明专利技术涉及翻译后修饰的异源性蛋白的细菌细胞表面展示。提供了分离的编码蛋白质物质的核酸构建体，所述蛋白质物质从N端至C端包含至少(a)N端羊毛硫抗生素前导序列；(b)将被翻译后修饰成含脱氢残基或硫醚桥的多肽的感兴趣的氨基酸序列；(c)亲水跨细胞壁结构域；(d)分选酶识别基序；(e)疏水跨膜结构域；和(f)C端带电荷的膜锚定结构域。还提供了表达所述构建体的革兰氏阳性宿主细胞及宿主细胞的文库。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及蛋白质工程和筛选治疗性相关肽的领域。更具体地，涉及翻译后修饰的异源性蛋白质的细胞表面展示。在微生物(例如细菌)表面的蛋白质或肽的异源展示是有用的研究手段，并已经与宽范围的有趣的应用相关联。将蛋白质或肽功能与编码的基因相连接能够从大的组合的文库中筛选和/或最优化具有期望性质的肽。已经开发了多种展示形式，包括核糖体展示、噬菌体展示、细菌表面展示和酵母展示。噬菌体展示或许是最为熟知的系统。
技术介绍
细胞表面展示的一个最有趣的应用是从大文库中选择对感兴趣的治疗性的靶分子高亲合的配体。迄今，只展示过线性肽、二硫键连接的环肽和与有机核耦合的肽。这导致了多种有用的肽的鉴定，包括治疗有效性(前导)肽。然而，已经认识到这些肽对蛋白质水解的敏感性和不稳定性为其治疗应用的主要缺点。转译后向肽中引入环状结构，例如硫醚交联，可避免这些稳定性问题。然而，目前，仍然难于有效地将这样的结构引入到合成肽中，尤其是大的肽中。
技术实现思路
本专利技术旨在提供允许脱氢氨基酸和或含硫醚肽的细胞表面展示的新型展示系统。为此，构建了独特的重组核酸构建体，其编码融合肽，所述融合肽除了包含将被环化的肽序列外，还包含特本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.06 EP 10168589.91.一种编码融合肽的分离的核酸构建体，所述融合肽从N端到C端至少包含以下序列元件: (a)N端羊毛硫抗生素前导序列； (b)将被翻译后修饰成含脱氢残基或硫醚桥的多肽的感兴趣的氨基酸序列； (C)亲水跨细胞壁结构域； (d)分选酶识别基序； (e)疏水跨I吴结构域；和 (f)C端带电荷的膜锚定结构域。2.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，所述羊毛硫抗生素前导序列为乳链菌肽前导序列。3.根据权利要求1或2所述的核酸构建体，其中，所述跨细胞壁结构域衍生自乳酸菌的多域细胞膜蛋白酶的跨细胞壁结构域。4.根据权利要求3所述的核酸构建体，其中，所述跨细胞壁结构域包含瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)的 prtH、乳酸乳球菌(Lactococcus Iactis)的 prtP、化胺性链球菌(Streptococcus pyogenes)的 scpA或无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的csp的跨细胞壁结构域的氨基酸序列或它们的功能类似物或片段。5.根据前述任一项权利要求所述的核酸构建体，其中，所述分选酶识别基序包含氨基酸序列LPXTG，其中X可为氨基酸D、E、A、N、Q或K，优选地，其中所述分选酶识别基序由LPKTG组成。6.根据前述任一项权利要求所述的核酸构建体，其中，所述疏水跨膜结构域具有20至30个氨基酸的长度。7.根据前述任一项权利要求所述的核酸构建体，其中，所述带电荷的膜锚定结构域具有至少四个氨基酸残基的长度，优选地，其中，至少50%的所述残基为带正电荷氨基酸，更优选赖氨酸和/或精氨酸残基。8.根据前述任一项权利要求所述的核酸构建体，其中，所述蛋白质物质在元件(a)和(b)之间和/或元件(b)和(c)之间进一步包含至少一个蛋白水解裂解位点。9.根据权利要求8所述的核酸构建体，在元件(a)和(b)之间包含因子Xa蛋白酶识别位点，优选氨基酸序列IEGR。10.根据权利要求8或9所述的核酸构建体，在元件(b)和(c)之间包含人鼻病毒3C蛋白酶识别位点，优选氨基酸序列EALFQGP。11.根据前述任一项 权利要求所述的核酸构建体，其中，所述感兴趣的氨基酸序列为治疗相关的肽，优选地选自由激素、酶抑制剂、酶活化剂、受体配体、抑制肽、羊毛硫抗生素蛋白和病毒蛋白组成的组中。12.—种表达载体，包含根据权利要求1至11的任一项所述的核酸。13.—种革兰氏阳...

【专利技术属性】
技术研发人员：芝贝·博斯姆，
申请(专利权)人：兰提欧派普有限公司，
类型：
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