大熊猫白介素18基因以及真核表达质粒构建与免疫效应制造技术

本发明专利技术是一种大熊猫白介素18(IL-18)基因及其真核表达质粒构建与免疫效应。本发明专利技术采集大熊猫血液，提取RNA，RT-PCR扩增大熊猫的白介素18基因，将扩增的大熊猫IL-18编码区克隆到pMD18-T载体，挑选阳性重组子送公司测序，测序正确的重组子命名为pMD-AmIL-18。根据大熊猫白介素18基因序列重新设计引物，以pMD-AmIL-18为模板，用PCR扩增大熊猫白介素18基因，定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，成功构建了大熊猫白介素18成熟蛋白真核表达质粒，研制出分子佐剂pAmIL-18。该佐剂可以作为疫苗的免疫增强剂。通过检测小鼠血清中CDV特异性抗体，IFN-γ和IL-2含量、脾细胞增殖指数(SI)、脾细胞中的CD3+CD4+％、CD3+CD8+％T淋巴的含量，结果发现pAmIL-18对犬瘟热弱毒疫苗有一定的免疫增强作用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
大熊猫白介素18基因及其真核表达质粒与应用，利用淋巴细胞分离液分离大熊猫血液淋巴细胞，然后用ConA刺激淋巴细胞，扩增出IL‑18基因，该基因的开放阅读框由579个核苷酸组成，编码192个氨基酸残基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，谭雪梅，邓家波，牛李丽，余建秋，严悦，张义正，严慧娟，
申请(专利权)人：成都动物园，
类型：发明
国别省市：四川;51