【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物细胞工程
，尤其涉及一种永生化仔猪口腔黏膜上皮细胞 系及其建立方法和应用。
技术介绍
口腔黏膜上皮细胞作为哺乳动物免疫系统的第一道防线，是细菌病毒感染宿主遇 到的最早的一类细胞。口腔黏膜上皮细胞能够像髓系细胞一样产生免疫反应，在识别微生 物抗原方面具有重要作用。口腔黏膜上皮细胞体外培养存在很大的困难，取材不易，费时费 力，传代次数有限，细胞稳定性、均一性很差，许多实验结果因细胞培养代数的不同而没有 可比性，极大地限制了其研究和应用。因此，建立一株稳定的口腔黏膜上皮细胞系，为相关 疾病致病机理及疫苗等的研究提供良好的细胞模型，具有重大的意义。西北农林科技大学 动物医学院张彦明教授领导的研究团队已经先后成功建立了永生化猪脐静脉血管内皮细 胞系、猪小肠黏膜上皮细胞系等，具有建立永生化细胞系的成熟技术。本专利技术创建了仔猪口 腔黏膜上皮细胞的分离与培养方法，并通过转染将真核表达质粒PCI-neo-hTERT导入原代 猪口腔黏膜上皮细胞，经过G418抗性筛选获得阳性克隆细胞，进一步筛选克隆化细胞，获得 永生化的仔猪口腔黏膜上皮细胞系，为...
【技术保护点】
一种永生化仔猪口腔黏膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于，所述永生化仔猪口腔黏膜上皮细胞系的建立方法包括：原代培养猪口腔黏膜上皮细胞；提取纯化含有hTERT基因的真核表达质粒pCI‑neo‑hTERT，采用脂质体转染法，将质粒导入原代培养的仔猪口腔黏膜上皮细胞；真核表达质粒pCI‑neo‑hTERT转染细胞24h后给细胞换液，48h后加含500μg/mL G418的DMEM/F12培养基筛选；高倍镜下标记阳性克隆，套环法或刮除法结合有限稀释法筛选阳性克隆，转入另外培养板培养；扩大培养：用含250μg/mL G418的培养基继续筛选培养一个月，得到抗G418稳转阳性细胞；筛选1...
【技术特征摘要】
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