双chU6启动子双shRNA表达质粒的构建及应用制造技术

本发明专利技术涉及双chU6启动子双shRNA表达质粒的构建及应用，属于生物制药领域。构建鸡U6启动子（chU6），设计两个靶向分别针对IBDVVP1和VP2基因的小发夹RNA（shRNA）：VP1-shRNA2550和VP2-shRNA392。构建表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA，转染鸡胚成纤维细胞（CEF），接种IBDV，可抑制病毒复制。将表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA与IBDV混合，接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔，可保护鸡胚免受IBDV感染。本发明专利技术构建的双chU6启动子双shRNA表达质粒是一种新型IBDV防治制剂，具有良好的实用价值和推广前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及双chU6启动子双ShRNA表达质粒pSilencer2. l+2chU6+VPlVP2shRNA的构建及应用，属于生物制药领域。
技术介绍
传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是一种高度危害养鸡业的传染病，它是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus, IBDV)引起，以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官一法氏囊为主要特征，被称为世界三大禽病之一。IBDV 感染后，会引起鸡的免疫抑制，使鸡的免疫能力下降、疫苗免疫失败、导致易感其它疾病。长期以来，对IBDV采取了免疫预防为主的综合性防控措施，该病的大规模流行已得到有效控制，但由于近期各地变异株和超强毒株(vvIBDV)的出现使该病的防控难度加大，IBD免疫预防失败已成为各区域禽病防控中的重要问题。目前，使用的常规弱毒疫苗和灭活疫苗，其安全性和制造工艺仍存在不足为预防变异毒株而采用中强毒力活疫苗存在着较大的生物安全问题，因为在不同IBDV毒株之间潜在着基因重配的可能，给该病的防控带来隐患；灭活疫苗存在着抗原制备的困难；以VP2 为靶本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种双ｃｈＵ６启动子双ｓｈＲＮＡ表达质粒，其构建方法为：１）鸡Ｕ６启动子ｃｈＵ６的构建设计引物，上游引物引入ＥｃｏＲ　Ｉ、Ｓａｌ　Ｉ位点，下游引物引入Ｈｉｎｄ　ＩＩＩ、ＸｈｏＩ、ＢａｍＨ　Ｉ位点：ｃｈＵ６（Ｆ）：５－　ＣＧ　ＧＡＡＴＴＣＡＣＧＣＧＴＣＧＡＣ　ＧＣＧＧＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＡＣＡＡＧＣＡＴＣＧＡＧ－３ｃｈＵ６（Ｒ）：５－ＣＣＣＡＡＧＣＴＴＣＣＧＣＴＣＧＡＧＣＧＧＧＡＴＣＣＴＡＧＴＡＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＣＧＡＡＧＣＧＡＧＣＡＣＧＧＡＣ－３　　　以鸡的基因组ＤＮＡ为模板，按下面５０μＬ　ＰＣＲ反应体系扩增ｃｈＵ６启动子：鸡基因组ＤＮＡ　１００ｎｇ，１０×ＰＣＲ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳伟，王永山，马金荣，张海彬，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：84