一种人类游离DNA提取方法及其试剂盒技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种人类游离DNA提取方法及其试剂盒，包括磁珠预处理液、细胞裂解液、结合液、漂洗液Ⅰ、漂洗液Ⅱ、核酸洗脱液以及羧基化磁珠，所述结合液包括以下浓度的组分：0.1～0.3mmol/L聚山梨酯80降解物、12～26mmol/L聚乙二醇8000以及1～2mmol/L氯化钠。本发明专利技术试剂盒的提取效率，提取纯度和CT值均显著优于现有试剂盒，具有低成本，易操作的优点。

A human free DNA extraction method and its kit

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular relates to a method of human free DNA extraction and kit, including magnetic pretreatment liquid, cell lysates, combined with liquid, rinse rinse I, II, and nucleic acid eluted carboxylated beads, the combination of the concentration of the liquid comprises the following components: 0.1 ~ 0.3mmol/L polysorbate 80 degradation products, 12 ~ 26mmol/L and 1 ~ 2mmol/L polyethylene glycol 8000 and sodium chloride. The extraction efficiency of the kit, the purity of the extraction and the CT value are significantly better than the existing kits, which has the advantages of low cost and easy operation.

【技术实现步骤摘要】
一种人类游离DNA提取方法及其试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种人类游离DNA提取方法及其试剂盒。
技术介绍
核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类，是一类带有遗传信息的生物大分子。真核生物的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内，但在人类的外周血中也游离着片段性的游离DNA(Cell-freeDNA,cfDNA)，这些游离DNA可以单链或双链DNA的形式存在，大多数游离DNA是以核蛋白形式存在的双链DNA，且片段较小，长度一般在几十或几百个bp之间。研究发现，游离DNA中含有非常重要的遗传信息。1997年YMDLo等人在怀有男胎的孕妇外周血中检测到了Y染色体存在，证明了孕妇外周血中存在胎儿游离DNA。目前临床上游离DNA主要运用于父源性DNA检测，如SRY基因型鉴定胎儿性别、检测RhD血型；产前诊断，如21三体等非整倍体疾病检测；以及肿瘤检测等方面。使用游离的DNA进行检测的第一步就是要对人类血清血浆中的游离DNA进行提取纯化，提取产物的质量直接影响到后续检测结果的准确性和可靠性。而游离DNA的片段小、在血清和血浆中含量低，这无疑给试剂盒提取的得率提出本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括磁珠预处理液、细胞裂解液、结合液、漂洗液Ⅰ、漂洗液Ⅱ、核酸洗脱液以及羧基化磁珠，所述结合液包括以下浓度的组分：0.1～0.3mmol/L聚山梨酯80降解物、12～26mmol/L聚乙二醇8000以及1～2mmol/L氯化钠。

【技术特征摘要】
1.一种人类游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括磁珠预处理液、细胞裂解液、结合液、漂洗液Ⅰ、漂洗液Ⅱ、核酸洗脱液以及羧基化磁珠，所述结合液包括以下浓度的组分：0.1～0.3mmol/L聚山梨酯80降解物、12～26mmol/L聚乙二醇8000以及1～2mmol/L氯化钠。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液为：20～100mmol/LTris-Hcl、50～200mmol/LNaCl、10～100mmol/L乙二胺四乙酸二钠、1～10mol/L异硫氰酸胍、0.5～3mol/L醋酸钾、0.5％～5wt％曲拉通以及1～10wt％吐温20，PH值为4.0～6.8。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液Ⅰ为：20～200mmol/LTris-Hcl、50～250mmol/LNaCl、10～100mmol/L乙二胺四乙酸二钠、1～10mol/L盐酸胍、0.5～5wt％曲拉通、1～10wt％吐温20以及异丙醇30wt％，PH值为4.0～6.8。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液Ⅱ为：70-80％的乙醇。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸洗脱液为：5～30mmol/LTris-Hcl和0.2～2mmol/LEDTA，pH为6.5～8.0。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述聚山梨酸酯80降解物由以下步骤制得：往100ml摇瓶内加入聚山梨酯80溶液，接种2～5wt％浓度为800～1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30～...

【专利技术属性】
技术研发人员：周煌凯，钟诗龙，邓美英，陆嫚云，徐毓璇，姚啟聪，
申请(专利权)人：广州海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44