本发明专利技术公开了用于血液、口腔拭子进行PCR的裂解液及试剂盒，属于分子诊断技术领域，本发明专利技术试剂盒包含裂解液，裂解液包含以下浓度的组分：Tris‑Hcl 60～70mM、硫酸铵16～17mM、Mgcl2·6H2O 6～7mM、EDTA 6～7μM、SDS 1.5～2.5μM和蛋白酶K 30～55μg/ml，Tris‑Hcl的pH值为8.2～9。裂解液处理后的血液、口腔拭子可直接进行PCR，大大优化现有的检测技术。
【技术实现步骤摘要】
用于血液、口腔拭子进行PCR的裂解液及试剂盒
本专利技术属于分子诊断
，尤其涉及用于血液、口腔拭子进行PCR的裂解液及试剂盒。
技术介绍
PCR，即聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应技术。该技术自从美国Cetus公司人类遗传室KaryMullis及同事于1958年专利技术以来，在微生物学、遗传病学和法医等领域中得到广泛应用。实时荧光定量PCR技术(qPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出，该技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团或荧光染料，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过绘制标准曲线对未知模板进行定量分析。TaqMan探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变(SNP分型)，其有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。与普通的PCR相比，荧光定量PCR技术检测由于具有特异性强、灵敏度高、重复性好、速度快和全封闭反应等优点，使其在医学、农学和临床检测学中得广泛使用。在进行荧光定量PCR检测前，首先要提取样本的核酸。目前核酸提取的主要方法有：磁珠法、离心柱法和酚氯仿抽提法。这些方法均存在一些不足：1)前两者提取成本高，提取效率偏低；2)传统的酚氯仿抽提法存在着提取步骤繁琐及纯度不足的问题。另外，核酸提取过程中，由于受到操作者的熟练程度及实验条件的影响，常造成DNA污染或者提取量不足，这将导致后续的研究或者检测不能进行。因此，寻找不需要核酸提取直接PCR的方法对提高检测效率和质量具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术存在的不足，而提供用于血液、口腔拭子进行PCR的裂解液及试剂盒，本专利技术试剂盒包含裂解液，全血、口腔拭子裂解后可直接进行PCR，大大优化现有的检测技术：为血液、口腔拭子提供一种快速、简便、高效、实用的检测方法，省略核酸提取过程，简化了操作过程，节约了时间和成本，且能大量处理样本，操作检测时可防止污染。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：用于血液、口腔拭子的裂解液，其包含以下浓度的组分：Tris-Hcl60～70mM、硫酸铵16～17mM、Mgcl2·6H2O6～7mM、EDTA6～7μM、SDS1.5～2.5μM和蛋白酶K30～55μg/ml，所述Tris-Hcl的pH值为8.2～9；裂解液处理后的血液、口腔拭子可直接进行PCR，PCR包括荧光定量PCR。作为上述技术方案的改进，裂解液包含以下浓度的组分：Tris-Hcl67mM、硫酸铵16.6mM、Mgcl2·6H2O6.7mM、EDTA6.7μM、SDS1.7μM和蛋白酶K50μg/ml，所述Tris-Hcl的pH值为8.8。另外，本专利技术还提供所述的裂解液在PCR中的应用。作为上述技术方案的改进，所述PCR为荧光定量PCR，裂解液在处理血液或口腔拭子时，裂解液与血液或口腔拭子样本的体积比为19:1；样本与样本混匀后，先95℃加热3min，再65℃加热10min，12000rpm离心1min，上清液即为待检测液。作为上述技术方案的进一步改进，荧光定量PCR的反应体系为18μl，待检测液为2μl。作为上述技术方案的进一步改进，荧光定量PCR的反应程序为：95℃10min；95℃15s，65℃1min，40个循环；65℃检测荧光信号。另外，本专利技术还提供一种用于血液、口腔拭子进行PCR的试剂盒，其包含所述的裂解液，所述PCR包括荧光定量PCR。作为上述技术方案的改进，所述试剂盒还包括进行荧光定量PCR的反应液。作为上述技术方案的进一步改进，进行荧光定量PCR的所述反应液包含DNA聚合酶、引物、dNTPs、荧光染料和无核酸酶水。作为上述技术方案的进一步改进，进行荧光定量PCR的所述反应液包含DNA聚合酶、引物、dNTPs、Taqman探针和无核酸酶水。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供用于血液、口腔拭子进行PCR的裂解液及试剂盒，本专利技术试剂盒包含裂解液，全血、口腔拭子裂解后可直接进行PCR，大大优化现有的检测技术；其具有以下优点：1)抗干扰能力强，不受血液、口腔拭子中组分影响；2)样本中DNA产量明显高于使用商业化的核酸提取试剂盒；3)简单易行，大部分实验室均能操作；4)步骤简单，成本低廉；5)节约了时间和成本，且能大量处理样本，操作检测时可防止污染。附图说明图1显示实施例4中样本1的SNP分型的检测结果；图2显示实施例4中样本2的SNP分型的检测结果；图3显示实施例4中样本3的SNP分型的检测结果；图4显示实施例5中样本的SNP分型的检测结果；其中，I、II和III表示1例口腔拭子样本分成3份，上述3条曲线是FAM标记的，下面3条曲线是VIC标记的；图5显示实施例6中1号样本的SNP分型的检测结果；其中，1FAM和1VIC标记的曲线采用的方法是提取血液DNA后再进行qPCR，1’FAM和1’VIC标记的曲线是采用专利技术方法获得；图6显示实施例6中2号样本的SNP分型的检测结果；其中，2FAM和2VIC标记的曲线采用的方法是提取血液DNA后再进行qPCR，2’FAM和2’VIC标记的曲线是采用专利技术方法获得；图7显示实施例6中3号样本的SNP分型的检测结果；其中，3FAM和3VIC标记的曲线采用的方法是提取血液DNA后再进行qPCR，3’FAM和3’VIC标记的曲线是采用专利技术方法获得；图8显示实施例7中血液DNA的凝胶电泳结果；其中，M为maker，A为商业化核酸提取试剂盒提取的DNA，B为本专利技术裂解液中DNA，B的亮度明显高于A的亮度。具体实施方式为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步说明。实施例1本实施例提供一种裂解液，其由下浓度的组分组成：Tris-Hcl67mM、硫酸铵16.6mM、Mgcl2·6H2O6.7mM、EDTA6.7μM、SDS1.7μM和蛋白酶K50μg/ml，Tris-Hcl的pH值为8.8。实施例2本实施例提供一种裂解液，其由下浓度的组分组成：Tris-Hcl70mM、硫酸铵17mM、Mgcl2·6H2O7mM、EDTA7μM、SDS2.5μM和蛋白酶K55μg/ml，Tris-Hcl的pH值为9。实施例3本实施例提供一种裂解液，其由下浓度的组分组成：Tris-Hcl60mM、硫酸铵16mM、Mgcl2·6H2O6mM、EDTA6μM、SDS1.5μM和蛋白酶K30μg/ml，Tris-Hcl的pH值为8.2。以下样本检测采用实施例1的裂解液，检测中所用的PCR扩增仪器为天隆TL988。取正常人全血样本，对其SNP位点进行实时荧光定量PCR检测实施例41)取保存于EDTA管中3例人全血样本各3μl，分别加入含57μl裂解液的离心管中，分别作为1号样本、2号样本、3号样本，涡旋混匀和短暂离心，95℃加热3min，再65℃加热10min；12000rpm离心1min，上清液即为待检测液；2)3个样本待检测液各取2μl，分别加入到SNP位点检测反应液中，在实时荧光定量PCR仪上进行扩增，95℃15min，进行40个循环的95℃15s，65℃1min，在65℃检测荧光信号。如图1～3所示，图1、2和3本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于血液、口腔拭子的裂解液，其特征在于，包含以下浓度的组分：Tris‑Hcl 60～70mM、硫酸铵16～17mM、Mgcl2·6H2O 6～7mM、EDTA 6～7μM、SDS 1.5～2.5μM和蛋白酶K 30～55μg/ml，所述Tris‑Hcl的pH值为8.2～9；裂解液处理后的血液、口腔拭子可直接进行PCR，所述PCR包括荧光定量PCR。
【技术特征摘要】
1.用于血液、口腔拭子的裂解液，其特征在于，包含以下浓度的组分：Tris-Hcl60～70mM、硫酸铵16～17mM、Mgcl2·6H2O6～7mM、EDTA6～7μM、SDS1.5～2.5μM和蛋白酶K30～55μg/ml，所述Tris-Hcl的pH值为8.2～9；裂解液处理后的血液、口腔拭子可直接进行PCR，所述PCR包括荧光定量PCR。2.如权利要求1所述的裂解液，其特征在于，包含以下浓度的组分：Tris-Hcl67mM、硫酸铵16.6mM、Mgcl2·6H2O6.7mM、EDTA6.7μM、SDS1.7μM和蛋白酶K50μg/ml，所述Tris-Hcl的pH值为8.8。3.如权利要求1或2所述的裂解液在PCR中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR为荧光定量PCR，裂解液在处理血液或口腔拭子时，裂解液与血液或口腔拭子样本的体积比为19:1；裂解液与样本混匀后，先9...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏昊强，姚啟聪，江伟钊，王芳，周煌凯，刘倩，关丽雅，邓美英，程祖福，
申请(专利权)人：广州海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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