一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学和领域，特别涉及一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法，与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果是，本发明专利技术通过提取组织的总RNA，并进一步进行反转录，采用hTERT引物和β‑Actin引物进行PCR扩增，再进行电泳检测，以β‑Actin引物扩增片段为对照，提高了结果的灵敏度和辨识度，为端粒酶催化蛋白活性检测提供了一种更快速、更灵敏和更便捷的检测方法和检测产品。

A Method for Detecting hTERT Activity of Telomerase Catalytic Protein Subunit

The present invention relates to molecular biology and field, in particular to a method for detecting the activity of hTERT, a subunit of human telomerase catalytic protein. Compared with the existing technology, the beneficial effect of the present invention is that the total RNA of tissues is extracted, further reverse transcription is carried out, PCR amplification is carried out by using hTERT primers and beta Actin primers, and then electrophoretic detection is carried out, and amplified by beta Actin primers. As a control, the sensitivity and identification of the results were improved, which provided a faster, more sensitive and more convenient detection method and product for the detection of the activity of Telomerase Catalytic Protein.

【技术实现步骤摘要】
一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法
本专利技术涉及分子生物学和领域，特别涉及一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法。
技术介绍
端粒酶，在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，把DNA复制损失的端粒填补起来，藉由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短端粒(缩短的端粒其细胞复制能力受限)，从而增强体外细胞的增殖能力。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，从而可能参与恶性转化。端粒酶在保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期的活性和潜在的继续增殖能力等方面有重要作用。端粒酶的存在，就是把DNA复制的缺陷填补起来，即由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。但是，在正常人体细胞中，端粒酶的活性受到相当严密的调控，只有在造血细胞、干细胞和生殖细胞，这些必须不断分裂的细胞之中，才可以侦测到具有活性的端粒酶。当细胞分化成熟后，必须负责身体中各种不同组织的需求本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，引物合成，首先根据端粒酶催化蛋白亚单位hTERT序列设计hTERT上游引物和hTERT下游引物，然后根据已知的β‑Actin序列信息，涉及β‑Actin上游引物和β‑Actin下游引物；步骤二，总RNA提取，取200‑300g组织加入1.2‑2.0mL TRIZO，放置9‑15min，然后加入0.4‑0.8mL氯仿，充分混匀后防止5‑10min，4℃10000‑12000r/min离心20‑30min，吸取上清，加入1‑3mL异丙醇，混匀后放置12‑15min，4℃10000‑12000r/min离心20‑...

【技术特征摘要】
1.一种端粒酶催化蛋白亚单位hTERT活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，引物合成，首先根据端粒酶催化蛋白亚单位hTERT序列设计hTERT上游引物和hTERT下游引物，然后根据已知的β-Actin序列信息，涉及β-Actin上游引物和β-Actin下游引物；步骤二，总RNA提取，取200-300g组织加入1.2-2.0mLTRIZO，放置9-15min，然后加入0.4-0.8mL氯仿，充分混匀后防止5-10min，4℃10000-12000r/min离心20-30min，吸取上清，加入1-3mL异丙醇，混匀后放置12-15min，4℃10000-12000r/min离心20-30min，然后加入2-4mL0-10℃75％乙醇，混匀后4℃8000-10000r/min离心12-15min，去上清并干燥，用水溶解，得到总RNA；步骤三，hTERTcDNA扩增，将步骤二得到的总RNA反转录成cDNA第一链，然后以cDNA第一链为模板，加入hTERT上游引物、hTERT下游引物、β-...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱广斌，
申请(专利权)人：深圳市慧思基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44