游离DNA的稳定剂和用于游离DNA检测的采血管制造技术

本发明专利技术公开了一种血液中游离DNA的稳定剂和用于血液中游离DNA检测的采血管，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。通过上述方式，本发明专利技术所提供的实施方式能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定存储。

Free DNA stabilizers and blood vessels used for free DNA detection

The invention discloses a stabilizer free DNA in the blood and blood vessels for DNA detection of free in the blood, the stabilizer comprises a first solution and a second solution, so that the storage stability at room temperature under the conditions of free DNA in blood; among them, the first solution includes a first buffer first, anticoagulant, cell stabilizer, metabolic inhibitors and the first solvent; the second solution includes: second buffer, second anticoagulants, blood compatibility reagent, stabilizer, preservative free DNA. By the above method, the method of implementation provided by the present invention can keep the free DNA in the blood stable under the condition of normal temperature.

【技术实现步骤摘要】
游离DNA的稳定剂和用于游离DNA检测的采血管
本专利技术涉及医疗
，特别是涉及一种游离DNA的稳定剂和用于游离DNA检测的采血管。
技术介绍
在生物样本库的建设中，血液在临床上具有易于收集的特点，血液中的游离DNA作为重要的遗传物质被保存并用于研究，因此，规范化地收集、处理和保存血液中游离DNA样本，逐渐成为临床研究和基础研究的重要保证。目前，血液中游离DNA的研究应用非常普遍，例如用于癌症检测，胎儿产前诊断等。但是，血液中游离DNA的含量低，离开人体后易受环境影响，血样采集、保存、血浆分离方法等不当时，都会明显影响游离DNA的分析结果。现阶段主要通过低温冷冻技术来实现对血液中游离DNA的长期保存。本专利技术的专利技术人在长期研发过程中发现，上述低温冷冻技术不但需要昂贵的能耗成本，人员安全和设备运行也存在着不可预计的风险。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种血液中游离DNA的稳定剂和用于血液中游离DNA检测的采血管，能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定存储。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种血液中游离DNA的稳定剂，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。为解决上述技术问题，本专利技术采用的另一个技术方案是：提供一种用于血液中游离DNA检测的采血管，所述采血管包括：采血管本体和密封膜囊，所述密封胶膜位于所述采集管本体内部，且设置于所述采集管本体的管口处，其中，所述采血管本体的管底处存储有上述任一实施例中所述的第一溶液，所述密封膜囊内存储有上述任一实施例中所述的第二溶液，所述第一溶液和所述第二溶液使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储。本专利技术的有益效果是：区别于现有技术的情况，本专利技术所提供的血液中游离DNA的稳定剂包括第一溶液和第二溶液，其中，第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂；本专利技术所提供的上述组合的稳定剂能够快速穿过细胞膜和细胞结构来稳定和保护细胞，防止细胞破裂而释放细胞中的DNA，从而避免细胞外游离DNA的浓度增加，同时上述组合的稳定剂能防止游离DNA在体外发生降解，并防止血液发生凝固。在一个应用场景中，本专利技术所提供的血液中游离DNA的稳定剂与全血混合后不需要干燥，仍保持液体状态，能在液体状态和室温条件下保护血液中的游离DNA达1-2个月。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。其中：图1是本专利技术用于血液中游离DNA检测的采血管一实施方式的结构示意图；图2是血液采集方法一实施方式的示意图；图3是以装有本专利技术血液中游离DNA的稳定剂的采血管和Streck管采取全血样品，游离DNA提取率的结果图；图4是以装有本专利技术血液中游离DNA的稳定剂的采血管和Streck管采取全血样品，游离DNA提取浓度的结果图；图5是琼脂糖凝胶电泳示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在一个实施例中，本专利技术所提供的血液中游离DNA的稳定剂包括第一溶液和第二溶液；其中，第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。当上述稳定剂与血液接触前，第一溶液与第二溶液是独立存储的；当上述稳定剂与血液接触后，第一溶液与第二溶液混合，以使得血液中游离DNA在常温条件下能稳定存储。具体地，在上述第一溶液中，第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液一般为弱碱性溶液，游离DNA在弱碱性溶液中会被去质子化，从而提高游离DNA的溶解性；在一个实施方式中，Tris-HCl缓冲液的质量浓度为4.8-7.2g/L，例如4.8、6、7.2g/L等。在其他实施例中，第一缓冲液也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。第一抗凝剂包括二水合乙二胺四乙酸二钠EDTANa2·2H2O，EDTANa2·2H2O可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，使血液中的钙离子失去凝血作用，从而防止血液发生凝固；在一个实施方式中，EDTANa2·2H2O的质量浓度为2.97-4.46g/L，例如2.97、3.72、4.46g/L等。在其他实施例中，第一抗凝剂也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。细胞稳定剂包括十二烷基硫酸钠SDS，SDS能够渗透进入细胞内部，使细胞内部中各个成分稳定；在一个实施方式中，SDS的质量浓度为16-24g/L，例如，16、20、24g/L等。在其他实施例中，细胞稳定剂也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。代谢抑制剂包括右旋葡萄糖，能够有效抑制血液中细胞的代谢，在一个实施方式中，右旋葡萄糖的质量浓度为8-12g/L，例如8、10、12g/L等。在其他实施例中，代谢抑制剂也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。第一溶剂包括二甲基亚砜DMSO，DMSO除承担溶剂的角色外，在其他实施例中，还具有缓冲的作用，可以稳定保护第一溶液中其他组分，在一个实施方式中，DMSO的质量浓度为0.08-0.12g/L，例如0.08、0.1、0.12g/L等。在其他实施例中，第一溶剂也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。具体地，在上述第二溶液中，第二缓冲液包括甘油，甘油除了具有缓冲的作用，还可以兼具溶剂的作用，可以稳定保护第二溶液中其他组分；在一个实施方式中，甘油的质量浓度为0.8-1.2g/L，例如0.8、1.0、1.2g/L。在其他实施例中，第二缓冲液也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。第二抗凝剂包括三氟柳，三氟柳能够抑制血小板的凝聚，主要体现在以下几个方面，一方面，三氟柳不可逆的抑制环氧合酶1(COX-1)，并降低血栓素B2(TXB2))的生物合成，而TXB2能够在很大程度上引起血小板的聚集；再一方面，三氟柳还通过提高人中性粒细胞内皮样NO合酶的活性，刺激NO的产生，进一步抑制血小板的聚集；又一方面，三氟柳能够降低内皮细胞环腺苷酸磷酸二脂酶的活性，升高cAMP的水平，从而限制了细胞内钙离子的内流，抑制了血小板的聚集；在一个实施方式中，三氟柳的摩尔浓度为40-60umol/L，例如，40、50、60umol/L等。在其他实施例中，第二抗凝剂也可包括其他物质，本专利技术对此不作限定。血液生物相容性试剂包括β-环糊精，β-环糊精是由若干葡萄糖单元组成的一类环状低聚糖，β-环糊精的分子空腔外侧存在多个羟基，分子空腔内表面仅存在氢原子，所以整本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血液中游离DNA的稳定剂，其特征在于，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。

【技术特征摘要】
1.一种血液中游离DNA的稳定剂，其特征在于，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。2.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，与所述血液接触前，所述第一溶液与所述第二溶液独立存储；与所述血液接触后，所述第一溶液与所述第二溶液混合。3.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl缓冲液、所述第一抗凝剂包括二水合乙二胺四乙酸二钠EDTANa2·2H2O、所述细胞稳定剂包括十二烷基硫酸钠SDS、所述代谢抑制剂包括右旋葡萄糖、所述第一溶剂包括二甲基亚砜DMSO。4.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述第二缓冲液包括甘油、所述第二抗凝剂包括三氟柳、所述血液生物相容性试剂包括β-环糊精、所述游离DNA稳定剂包括色甘酸二钠和软磷脂、所述防腐剂包括柠檬酸钾。5.根据权利要求3所述的稳定剂，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的质量浓度为4.8-7.2g/L；所述EDTANa2·2H2O的质量浓度为2.97-4.46g/L；所述SDS的质量浓度为16-24g/L；所述右旋葡萄糖的质量浓度为8-12g/L；所述DMSO的质量浓度为0.08-0.12g/L。6.根据权利要求5所述的稳定剂，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的质量浓度为6g/L；所述EDTANa2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王国华，王金星，宋炜，
申请(专利权)人：南通普惠精准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32