一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒。向经过预处理的生物样本中加入CPS‑Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS‑Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS‑Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS‑Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来。本发明专利技术对预处理的生物样本进行消化处理，再将细胞消化液经过核酸吸附硅胶柱，经过洗涤、洗脱步骤就可以获得高质量的DNA。所述方法具有样本通用性强、操作简单快捷、可批量样本处理、成本低廉，核酸得率高、纯度高，可直接用于大规模的分子生物学科研及生产的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒
本专利技术属于生物
更具体地，涉及一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒。
技术介绍
现有商业DNA提取试剂盒类型多、试剂盒性成熟稳定，知名度高，个别产家还具备临床认证资格，能满足基本下游分子诊断试剂的要求。但是现有的商业DNA提取试剂盒同时也存在着以下缺陷和不足：（1）现有的商业DNA提取试剂盒多为进口试剂，成本昂贵，只比较适合少数的科研样本分析，对于做大样本量的项目及生产普及应用是不切实际的；（2）现有的商业DNA提取试剂盒分类过于细化，通用性低，一种DNA提取试剂盒只针对一种样本的DNA提取；（3）现有的商业DNA提取试剂盒多数为进口试剂盒，采购周期比较长，不利用新项目的开发进度的把控；（4）现有研究方法对于杂质较多、目标细胞较少及极其不稳定的样本（如粪便样本）不但提取的流程复杂，而且对如粪便类样本取样要求苛刻、样本保存要求高、对耗材和设备要求高、操作流程繁琐而耗时等的缺陷，另外市面上已有一些粪便DNA提取试剂盒不但不能完全解决这些难题，而且最终提取DNA的实际质量并不能达到官方公开的指标。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有商业DNA提取试剂盒通用性低，提取步骤繁琐，成本高等问题，提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，所述方法适用于人类常规生物样本如血液（外周血或白细胞）、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液脱落细胞及粪便脱落细胞等基因组DNA快速抽提，具有样本通用性强、操作简单快捷、可批量样本处理、成本低廉，核酸得率高、纯度高，可直接用于大规模的分子生物学科研及生产的检测。本专利技术的目的是提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法。本专利技术的另一目的是提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，所述方法为：向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer4将核酸从吸附柱上洗脱下来；其中，所述CPS-Buffer1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5～8%TritonX-100，10～50mmol/LTris-HCl，pH5.5～6.0；所述CPS-Buffer2为95～100%乙醇溶液；所述CPS-Buffer3为70%～80%乙醇；所述CPS-Buffer4由以下终浓度各组分组成：10～20mmol/LTris-HCl，1～5mmol/LEDTA。本专利技术通过将预处理的生物样本进行消化处理，再将处理后的细胞消化液经过简单离心过柱的方式将脱落细胞中的核酸富集到核酸吸附硅胶柱上，再经过简单的洗涤、洗脱步骤就可以获得高质量的DNA，且所用的提取试剂成分简单，成本低。优选地，所述生物样本与CPS-Buffer1体积比为1：1，或质量体积比为2～4mg：5µL。优选地，所述常规生物样本为血液、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液或粪便。以上所述生物样本的预处理方式如下所示：血液：取EDTA抗凝剂外周血500µL或非抗凝外周血经低速离心后得到的白细胞液500µL于2mL灭菌离心管中，待用。唾液：将唾液收集在添加有唾液保存液的唾液收集管中，均匀取500µL于2mL灭菌离心管中，待用。鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子：将拭子放置于2mL灭菌离心管中，加入700µL保存液，彻底震荡均匀，取500µL样本投入量于2mL灭菌离心管中，待用。新鲜组织：一般称0.2g彻底研磨或机械粉碎的新鲜组织于2mL灭菌离心管中，待用；所述新鲜组织为术后、活体取样、器官等新鲜组织。尿液：一般取40～50mL新鲜晨尿（不新鲜的，最好添加对应比例尿液保存液）通过高速离心捕获尿液中脱落细胞于2mL灭菌离心管中。粪便：一般取4.5g左右粪便样本于15mL离心管中，然后再加入9mL粪便保存液，彻底振动溶解均匀，高速离心后取500µL上清样本液于2mL灭菌离心管中，待用。具体地，所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法包括如下步骤：S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µLCPS-Buffer1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；S3.往S2孵化液中加入1000µLCPS-Buffer2，混匀后的混合液；S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；S5.向S4吸附柱中加入700µLCPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；S6.向S5的吸附柱中加入100µLCPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。同时，上述方法在制备通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒中的应用亦在本专利技术保护范围内。一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒，所述试剂盒中包含以下四种提取试剂：CPS-Buffer1、CPS-Buffer2、CPS-Buffer3和CPS-Buffer4；所述CPS-Buffer1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5%～8%TritonX-100，10～50mmol/LTris-HCl，pH5.5～6.0；所述CPS-Buffer2为95%～100%乙醇溶液；所述CPS-Buffer3为70%～80%乙醇；所述CPS-Buffer4由以下终浓度各组分组成：10～20mmol/LTris-HCl，1～5mmol/LEDTA。优选地，所述试剂盒还包含DNA提取所需耗材，如核酸离心吸附柱、收集管、离心管等。一种利用上述试剂盒提取生物样本总DNA的方法，所述方法为向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer4将核酸从吸附柱上洗脱下来。具体地，所述试剂盒提取生物样本总DNA的方法包括如下步骤：S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µLCPS-Buffer1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；S3.往S2孵化液中加入1000µLCPS-Buffer2，混匀后的混合液；S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；S5.向S4吸附柱中加入700µLCPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；S6.向S5的吸附柱中加入100µLCPS-Buffer4，室本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，向经过预处理的生物样本中加入CPS‑Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS‑Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS‑Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS‑Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来；其中，所述CPS‑Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5～8%TritonX‑100，10～50mmol/LTris‑HCl，pH 5.5～6.0；所述CPS‑Buffer 2为95～100%乙醇溶液；所述CPS‑Buffer 3为70%～80%乙醇；所述CPS‑Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10～20 mmol/LTris‑HCl，1～5 mmol/LEDTA。

【技术特征摘要】
1.一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer4将核酸从吸附柱上洗脱下来；其中，所述CPS-Buffer1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5～8%TritonX-100，10～50mmol/LTris-HCl，pH5.5～6.0；所述CPS-Buffer2为95～100%乙醇溶液；所述CPS-Buffer3为70%～80%乙醇；所述CPS-Buffer4由以下终浓度各组分组成：10～20mmol/LTris-HCl，1～5mmol/LEDTA。2.根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，所述生物样本与CPS-Buffer1的体积比为1：1，或质量体积比为2～4mg：5µL。3.根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，所述常规生物样本为血液、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液或粪便。4.根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µLCPS-Buffer1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；S3.往S2孵化液中加入1000µLCPS-Buffer2，混匀后的混合液；S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；S5.向S4吸附柱中加入700µLCPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；S6.向S5的吸附柱中加入100µLCPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。5.权利要求1～4任一项所述方法在制备通用于常规...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹素梅，陈晓霞，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心，
类型：发明
国别省市：广东,44