利用阴离子交换粒子分离细胞外核酸的方法技术

本发明专利技术涉及利用阴离子交换粒子从生物样品分离细胞外核酸的方法和试剂盒。据发现，在结合混合物中纳入聚氧化烯脂肪醇醚补偿了可归因于阴离子交换表面的差异的性能变化，所述差异可以在例如不同批次/批的所述阴离子交换粒子之间和/或在所述粒子储存期间出现。此外，在所述结合混合物中包含聚氧化烯脂肪醇醚导致所得到的洗脱物纯度较高，揭示了下游反应例如PCR反应中显著减少的抑制。

Separation of extracellular nucleic acid by anion exchange particles

The present invention relates to the method and kit for separating nucleic acid from a biological sample using anion exchange particles from a biological sample. It is found that, in combination with the mixture into a polyoxyalkylene fatty ether can be attributed to changes in the compensation performance of anion exchange surface difference, the difference can be in different batches such as the anion exchange / batch appears between the particles and / or in the particle during storage. In addition, the polyoxyenes fatty alcohol ether contained in the said mixture resulted in higher purity of the obtained eluent, revealing a significant reduction in downstream reactions, such as in the PCR reaction.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用阴离子交换粒子分离细胞外核酸的方法本专利技术涉及利用阴离子交换粒子从生物样品分离细胞外核酸的方法和试剂盒。
技术介绍
细胞外核酸已在许多生物类型样品例如血液、血浆、血清和其他体液中被鉴定到并引起了极大兴趣。在许多医疗状况、恶性肿瘤和感染性过程中，尤其是对于筛查、诊断、预后、监督疾病进展、鉴定潜在治疗靶标、和监测治疗响应来说，分析细胞外核酸是令人感兴趣的。另外，对母体血液中存在的胎儿细胞外核酸进行分析以用于诊断或医疗目的，例如用于测定或分析性别认同、遗传病例如染色体异常和/或用于监测妊娠相关的并发症。因此，细胞外核酸在无创诊断和预后中特别有用并且它们可在许多应用领域例如无创产前遗传检测、肿瘤学、移植医学或许多其他疾病中使用，例如作为诊断或预后标志物。然而，细胞外核酸也存在于健康的人类中。细胞外核酸的常见应用和分析方法例如被描述在以下文献中：WO97/035589，WO97/34015，Swarup等，FEBSLetters581(2007)795-799，FleischhackerAnn.N.Y.Acad.Sci.1075：40-49(2006)，Fleischhacker和Schmid本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从生物样品分离细胞外核酸的方法，其包括(a)从所述生物样品制备结合混合物，所述结合混合物包含i)细胞外核酸；ii)提供阴离子交换表面的粒子；iii)至少一种是聚氧化烯脂肪醇醚的非离子型去污剂；iv)任选的至少一种盐，其中所述结合混合物具有使细胞外核酸与所述粒子结合的pH，(b)将带有结合的细胞外核酸的粒子与剩余的结合混合物分离；(c)任选洗涤所述结合的细胞外核酸；(d)任选洗脱结合的细胞外核酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.10 EP 15171466.41.一种从生物样品分离细胞外核酸的方法，其包括(a)从所述生物样品制备结合混合物，所述结合混合物包含i)细胞外核酸；ii)提供阴离子交换表面的粒子；iii)至少一种是聚氧化烯脂肪醇醚的非离子型去污剂；iv)任选的至少一种盐，其中所述结合混合物具有使细胞外核酸与所述粒子结合的pH，(b)将带有结合的细胞外核酸的粒子与剩余的结合混合物分离；(c)任选洗涤所述结合的细胞外核酸；(d)任选洗脱结合的细胞外核酸。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述结合混合物通过将所述样品与包含所述至少一种聚氧化烯脂肪醇醚并任选包含盐和/或缓冲剂的组合物接触来制备。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中制备所述结合混合物包括将所述样品与蛋白水解酶接触。4.根据权利要求1至3中的一项或多项所述的方法，其中通过以下步骤来制备所述结合混合物-通过将所述粒子与包含所述至少一种聚氧化烯脂肪醇醚并任选包含盐和/或缓冲剂的裂解和/或结合组合物接触来形成悬液；-将所述悬液与包含细胞外核酸的样品接触；-任选地，在将所述样品与所述悬液接触之前、同时或之后添加蛋白水解酶。5.根据权利要求1至4中的一项或多项所述的方法，其中温育所述结合混合物并在所述结合混合物中裂解所述样品。6.根据权利要求1至5中的一项或多项所述的方法，其中所述结合混合物具有选自≤7、≤6.5、≤6.25和≤6的pH。7.根据权利要求1至6中的一项或多项所述的方法，其中所述结合混合物包含盐。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述盐具有一个或多个以下特征：a.所述盐是碱金属盐或铵盐；b.所述盐是碱金属卤化物，优选选自氯化钠、氯化钾和氯化锂，更优选所述盐是氯化钠；和/或c.所述盐以选自50mM至1.5M、75mM至1M、100mM至750mM、125mM至500mM和150mM至350mM的浓度包含在所述结合混合物中。9.根据权利要求1至8中的一项或多项所述的方法，其中所述聚氧化烯脂肪醇醚具有一个或多个以下特征：a.它是聚氧乙烯脂肪醇醚；b.脂肪醇组分的链长选自8至22个碳原子、10至20个碳原子、12至19个碳原子、14至18个碳原子、和16至18个碳原子，并且其中所述脂肪醇组分优选是饱和的；c.它包含具有14至22个碳原子、优选16至20个碳原子的脂肪醇组分和具有2至150个(CH2CH2O)单元的聚氧乙烯组分；d.它选自聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯硬脂基醚和聚氧乙烯油基醚，并优选是聚氧乙烯鲸蜡基醚；e.它具有0.15mM或更低、0.125mM或更低、0.12mM或更低、0.115mM或更低、优选0.1mM或更低、0.095mM或更低、0.90mM或更低或者0.085mM或更低的临界胶束浓度(CMC)；和/或f.所述结合混合物包含浓度选自0.05％至15％、0.75％至12％、0.1％至10％、0.125至8％、0.15％至7.5％、0.175％至6.5％和0.2％至6％的所述聚氧化烯脂肪醇醚。10.根据权利要求1至9中的一项或多项所述的方法，其中所述阴离子交换粒子不包含在柱中或会防止所述粒子在所述结合混合物中移动的其他装置中，并且其中从所述结合混合物收集所述粒子以回收所述结合的细胞外核酸。11.根据权利要求1至10中的一项或多项所述的方法，其中所述粒子具有一个或多个以下特征：a.所述粒子是磁性的；b.所述粒子具有在选自100nm至10μm、150nm至7.5μm、200nm至5μm、300nm至4μm、500nm至3.5μm、550nm至2μm和600nm至1.5μm的范围内的平均直径；和/或c.所述阴离子交换表面包含提供阴离子交换基团的阴离子交换部分，其中所述阴离子交换部分选自单胺、二胺、多胺、含氮芳族或脂族杂环基团、环胺、...

【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山大·沃尔夫，桑德拉·哈默施密特，托尔斯滕·沃斯，
申请(专利权)人：凯杰有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE