一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法技术

本发明专利技术涉及一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法，该方法包括如下步骤：将待合成的序列拆分成多段小片段，然后用首尾合成引物合成拆分的多段小片段；采用5’端含有20个随机碱基的扩增用上下游引物对合成的小片段进行扩增；将扩增后的所有小片段混合，然后采用二代测序技术进行测序，将测序结果进行对比分析，找到与预期完全一致的序列，从而确定该序列两端的随机序列为所需序列，然后根据所需序列设计调取引物；采用调取引物对扩增后的小片段进行第一轮调取扩增，然后首尾合成引物进行第二轮调取扩增，然后将第二轮调取扩增后的片段进行组装即得序列产物。本发明专利技术在不损失时间成本的情况下，合成步骤简化、通量提高、成本降低。

An industrialized gene synthesis method based on two generation sequencing technology

The invention relates to a synthesis method of the two generation industrialization gene sequencing technology based on the method comprises the following steps: to be split into multiple segments of the synthetic sequence fragments, and then use multiple small fragments and primers were amplified with the synthetic split; 5 'end with 20 random primers with the base of the synthesis of small fragment; amplified fragment will be all mixed, then the two generation sequencing technology were sequenced. The sequencing results were analyzed to find the sequence was consistent with the expected, in order to determine the sequence of random sequences at both ends of the desired sequence, and then according to the required design primers by primer transfer transfer; the amplified fragments were amplified from the first round of small, then both primers for the second round of the second round was retrieved, amplified fragment transfer The assembly is the product of the sequence. In the case of no loss of time and cost, the invention simplifies the synthesis step, improves the flux, and reduces the cost.

【技术实现步骤摘要】
一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法
本专利技术涉及一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法。
技术介绍
现有的工业化基因合成技术与平台中必不可少的测序验证步骤都是基于一代测序的平台，即AB公司的3730测序仪平台，其原理是基于Sanger测序法基础之上，由于一代测序平台是对每一个单克隆进行验证测序，所以确定性极高。但是该测序平台的通量较低，即每次测96个样本，总体运行时间大于24小时，成本较高，即每个测序样本的市场价是15-18人民币，并且需要对送测序的每一个克隆进行质粒抽提后测序或者直接用菌液进行扩增测序，步骤繁琐，因此二代测序技术被开发使用。现有的工业化基因合成方法大致有7个模块化步骤，分别为PCR扩增、连接转化、挑取单克隆摇菌、菌液PCR鉴定、质粒抽提、Sanger测序、PCR扩增正确克隆，最终得到的是与预期一致的约700-1500bp的PCR产物片段。该方法步骤繁多、通量低，整体流程的运行时间超过72小时，成本高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种步骤简单、通量高，成本低的基于二代测序技术的工业化基因合成方法。为解决以上技术问题，本专本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：步骤（1）、将待合成的序列拆分成多段小片段，然后用首尾合成引物合成拆分的多段小片段；步骤（2）、采用5’端含有20个随机碱基的扩增用上下游引物对步骤（1）合成的小片段进行扩增，以便为小片段加上随机标签序列；步骤（3）、将步骤（2）扩增后的所有小片段混合，然后采用二代测序技术进行测序，将测序结果进行对比分析，找到与预期完全一致的序列，从而确定该序列两端的随机序列为所需序列，然后根据所需序列设计调取引物；步骤（4）、采用步骤（3）设计的调取引物对步骤（2）扩增后的小片段进行第一轮调取扩增，然后用步骤（1）中的首尾合成引物进行...

【技术特征摘要】
1.一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：步骤（1）、将待合成的序列拆分成多段小片段，然后用首尾合成引物合成拆分的多段小片段；步骤（2）、采用5’端含有20个随机碱基的扩增用上下游引物对步骤（1）合成的小片段进行扩增，以便为小片段加上随机标签序列；步骤（3）、将步骤（2）扩增后的所有小片段混合，然后采用二代测序技术进行测序，将测序结果进行对比分析，找到与预期完全一致的序列，从而确定该序列两端的随机序列为所需序列，然后根据所需序列设计调取引物；步骤（4）、采用步骤（3）设计的调取引物对步骤（2）扩增后的小片段进行第一轮调取扩增，然后用步骤（1）中的首尾合成引物进行第二轮调取扩增，然后将第二轮调取扩增后的片段进行组装即得序列产物。2.根据权利要求1所述的基于二代测序技术的工业化基因合成方法，其特征在于：步骤（1）中待合成的序列超过100Kb。3.根据权利要求1所述的基于二代测序技术的工业化基因合成方法，其特征在于：步骤（1）中每段小片段不超过...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟云鹏，刁文一，李彦敏，杨平，
申请(专利权)人：苏州泓迅生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32