一种DNA大片段文库的构建方法及其应用技术
The construction method of a DNA large fragment library and its application
The invention relates to the construction method of a DNA large fragment library and its application. The construction method of the DNA large fragment library is applied to the construction of DNA large fragment library. The FLP/FRT specific recombination system is applied to optimize the database establishment process, which improves the effective data rate of the large fragment library's sequenced results.
【技术实现步骤摘要】
一种DNA大片段文库的构建方法及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种DNA大片段文库的构建方法，由该方法构建的DNA大片段文库以及该DNA大片段文库在测序中的应用。
技术介绍
对基因组序列未知或没有近源物种基因组信息的某个物种，对其不同长度基因组DNA片段及其文库进行序列测定，然后用生物信息学方法进行拼接、组装和注释，从而获得该物种完整的基因组序列图谱，称为基因组从头测序，也叫denovo测序。在基因组学飞速发展的今天，denovo测序与比较基因组方法联合可以用来探索该物种的起源和进化，研究其生长发育、形状生产以及环境适应的分子机制，是快速了解一个物种的途径之一。一个物种基因组序列图谱的完成，也将带动这个物种下游一系列研究的开展，可以构建该物种的基因组数据库，为该物种的后基因组学研究搭建一个高效的平台；为后续的基因挖掘、功能验证提供DNA序列信息。高通量测序也叫二代测序，它可以对上千万条DNA片段同时进行测序，通量、时效和单碱基成本上较Sanger测序有着突破性的提高，这些优点使得目前denovo测序主要由二代测序来完成。二代测序的缺点是读长短，二代...
【技术保护点】
一种DNA大片段文库的构建方法，包括：步骤B：将DNA大片段的两端加接头，得到加接头DNA大片段；步骤C：将加接头DNA大片段进行环化，得到环化DNA大片段与未环化DNA大片段的混合物；步骤D：将混合物进行线性消化，得到环化DNA大片段；步骤E：将环化DNA大片段进行打断，得到测序用DNA片段；步骤F：将测序用DNA片段进行片段捕获，采用链霉亲和素化固相载体钓取带有生物素标记的测序用DNA片段；步骤G：将带有生物素标记的测序用DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物，从而构建DNA大片段文库。其中，所述接头为包含FLP重组酶靶位点的接头，所述环化采用FLP重组酶。
【技术特征摘要】
2016.08.31 CN 20161079146901.一种DNA大片段文库的构建方法，包括：步骤B：将DNA大片段的两端加接头，得到加接头DNA大片段；步骤C：将加接头DNA大片段进行环化，得到环化DNA大片段与未环化DNA大片段的混合物；步骤D：将混合物进行线性消化，得到环化DNA大片段；步骤E：将环化DNA大片段进行打断，得到测序用DNA片段；步骤F：将测序用DNA片段进行片段捕获，采用链霉亲和素化固相载体钓取带有生物素标记的测序用DNA片段；步骤G：将带有生物素标记的测序用DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物，从而构建DNA大片段文库。其中，所述接头为包含FLP重组酶靶位点的接头，所述环化采用FLP重组酶。2.根据权利要求1所述的DNA大片段文库的构建方法，其特征在于，所述步骤G为步骤H-步骤J，步骤H：将带有生物素标记的测序用DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；步骤I：将步骤G中得到的平末端DNA片段进行加接头，得到加接头DNA片段；和步骤J：将加接头DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物，从而构建DNA大片段文库。3.根据权利要求1所述的DNA大片段文库的构建方法，还包括在所述步骤B之前进行的步骤A-1：将希望进行测序...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁峻彬，李小林，张介中，韩典昂，玄兆伶，李大为，陈重建，
申请(专利权)人：安诺优达基因科技北京有限公司，浙江安诺优达生物科技有限公司，安诺优达义乌医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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