人MIR421及其在制备诊断及治疗前列腺癌的诊断制剂中的用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种新的前列腺癌分子标记物microRNA 421 (MIR421)在制备诊断及治疗前列腺癌诊断制剂及诊断试剂盒中的用途，包括前列腺癌高危人群的筛选，前列腺癌的诊断，前列腺癌药物靶标的设计，前列腺癌治疗状况的监测及前列腺癌预后检测等。使用该分子标记物及含有该分子标记物的诊断试剂盒诊断前列腺癌，操作简单、取材方便、安全无创伤，且具有较高的特异性和灵敏度及易于大量筛查的特点。

Human MIR421 and its use in the preparation of diagnostic agents for the diagnosis and treatment of prostate cancer

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a new molecular marker for prostate cancer microRNA 421 (MIR421) use in preparation of the diagnosis and treatment of prostate cancer diagnosis and preparation of diagnostic reagent kit, including prostate cancer screening of high-risk prostate cancer, diagnosis, design of prostate cancer drug targets. In the treatment of prostate cancer prognosis and prostate cancer detection. The molecular markers of prostate cancer diagnosis and diagnostic kit containing the molecular markers of use, simple operation, convenient, safe and non-invasive, and has high specificity and sensitivity and is easy for mass screening.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种新的前列腺癌分子标记物MIR421及其在制备诊断及治疗前列腺癌的诊断制剂中的用途，包括通过该生物分子标记物在前列腺癌高危人群的筛选、前列腺癌的诊断、前列腺癌药物靶标的设计、前列腺癌治疗状况的监测、前列腺癌指导用药的监测及前列腺癌预后检测等领域的应用。
技术介绍
根据《ASCO年度报告：2015临床肿瘤学进展》中相关内容报道，液体活检技术被列为肿瘤治疗领域下一个十年趋势之一。研究显示，血液中的一些分子标志物已经被应用于一些疾病的诊断，如谷丙转氨酶用于肝炎的诊断，白细胞数目用于判断炎症。血液循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)是一种无细胞状态的胞外游离DNA，存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中，体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统，其主要是由短的单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成，以DNA蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。研究公开了ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变，因此，ctDNA是一种特征性的新的肿瘤生物标记物，并且还可以被定性、定量和追踪，将成为临床肿瘤的早期诊断、预后判定及跟踪随访等提供一系列方便、快捷、特异、无创或微创和分子生物学检测手段，尤其对于一些不具有典型临床症状、检查无特异性和诊断困难的肿瘤可避免复杂的、具有创伤性的活检。结合新一代测序技术(NGS)将变成“液体活检”，并替代侵入组织性活检。MIR421属于microRNA，是一类由內源基因编码的微小RNA，不编码蛋白，大小为20～24个核苷酸，广泛存在于植物、动物和各种病毒中，在RNA沉默和转录后翻译调控中发挥举足轻重的作用。研究显示，每个miRNA可以有多个靶基因，每个基因也可能受多个miRNA调控。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。MicroRNA因其高度的保守性、时空特异性、稳定性及组织特异性等特点使其优于蛋白质、DNA片段等其他生物标志物而在疾病发病机制研究、早期诊断、个体化治疗和预后等方面发挥日益重要的作用。前列腺癌是是常见的男性生殖系统恶性肿瘤之一。据统计，世界范围内，前列腺癌发病率在男性所有恶性肿瘤中位居第二，在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌，成为第一位危害男性健康的肿瘤。亚洲前列腺癌的发病率远远低于欧美国家，但近年来呈现上升趋势，且增长比欧美发达国家更加迅速。前列腺癌患者主要是老年男性，一般在50岁以后发病，95%发生于60岁以上的老年男性，发生率持续地随着年龄增长而增加。前列腺癌早期多无任何症状，即使有所不适，也不足以引起病人的重视，当肿瘤增大压迫尿道时，又往往与前列腺增生相混淆。在我国约80%的病人首先发现远处转移病灶才发现前列腺癌。此时，病变已达晚期，预后不良。目前，前列腺癌的临床诊断方式主要有直肠指检、血清前列腺特异性抗原（PSA）检测、直肠超声波检测、活组织病理检查等；其中，直肠指检是最简单、最经济实用的方法，主要通过医生的食指触摸前列腺，用以发现很多无症状的前列腺癌患者，有可能获得早期诊断及根治的机会，但以上的方法都存在局限性；例如直肠指检的局限性主要在下述4个方面：（1）患者前列腺肿块不大时，易漏诊；（2）部分患者前列腺癌肿大不明显，但已属于晚期，不易根治；（3）患者直肠有疾患时不能使用此检测；（4）医生经验不足时可能有漏诊或者误诊的可能。正常情况下血液中的PSA不高（不高于4ng／ml），当处于前列腺癌及其他前列腺疾病患病状态时，PSA升高成为目前筛查前列腺癌最敏感的瘤标，但其也存在一定局限性：（1）需要取血检测，对患者有一定的损伤；（2）PSA增高也常见与非前列腺癌疾病，如前列腺炎症、前列腺肥大等，因此不易确诊；（3）PSA增高确诊前列腺癌时，往往患者已经属于中后期，达不到早期诊断的目的。前列腺超声波检测操作简单直观、无损伤，通过显示肿块的大小、数目、位置、密度、边缘、形体、有无钙化及钙化的形态、大小、数目、分布以及周围的晕环、皮肤改变等提供定位及定性征象并判断病变的性质；其局限性是：（1）对致密性的小癌灶容易漏诊；（2）有时候不能提供明确的定性诊断；（3）因其不能显示肿瘤的内部结构及周围组织所以诊断符合率很低；（4）对一些缺乏典型征象的实性良恶性肿块有较高的误诊率。活组织病理检查因其创伤性、复杂性不能作为初筛的手段，但它是前列腺癌确诊的金标准，一般与其他方法技术连用。近年来的研究表明，miRNA与前列腺癌密切相关，它们可能参与肿瘤的发生、发展和转移，所以对肿瘤的发病机制、早期诊断、个体化治疗、转移的检测和预后等可能有相应的作用。基于现状，本申请的专利技术人拟提供人MIR421在制备诊断及治疗前列腺癌的诊断制剂中的新的用途。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，针对现有技术存在的缺陷，提供人MIR421及其在制备诊断及治疗前列腺癌的诊断制剂中的新的用途。本申请经试验研究发现，MIR421在前列腺癌组织中的含量比前列腺正常组织中的含量低，提示MIR421与前列腺癌的肿瘤发生、发展存在着密切的相关性。本专利技术基于上述研究基础，提供了一种与前列腺癌相关的新的前列腺癌分子标志物MIR421、诊断试剂盒、前列腺癌药物靶标的设计及该生物标志物在前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测中的应用。本专利技术所采用的技术方案如下：MIR421作为前列腺癌标志物，是一种miRNA，其核苷酸序列是5‘－AUCAACAGACAUUAAUUGGGCGC－3’（SEQIDNO.1）。所述的前列腺癌生物标志物MIR421可用于制备筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测前列腺癌高危人群的试剂盒中，通过检测被试者组织样本、血液和尿液中的MIR421的含量，并与正常水平MIR421含量相比较以进行前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测。更具体的，本专利技术提供了所述的前列腺癌生物标志物MIR421在制备筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测前列腺癌高危人群的诊断试剂盒中的应用。所述的诊断前列腺癌的诊断试剂盒包括：（1）组织样本、血液和尿液中总RNA提取试剂，（2）反转录试剂，（3）定量PCR试剂，所述检测试剂盒所用对照为RNU6，其引物序列如下：RNU6上游引物序列：5＇-CGCTTCGGCAGCACATATACTAA-3＇（SEQIDNO.2）RNU6下游引物序列：5＇-TATGGAACGCTTCACGAATTTGC-3＇（SEQIDNO.3）所述检测试剂盒所用MIR421检测引物序列为：MIR421反转录引物序列：5＇-GTCTCCTCTGGTGGAGGGTCCGAGGTATTCCCACCAGAGGAGACGCGCCC-3＇（SEQIDNO.4）MIR421上游引物序列：5＇-GTGGAGGGTCCGAGGT-3＇（SEQIDNO.5）MIR421下游引物序列：5＇-ATCAACAGACATTAATTGGG-3＇（SEQIDNO.6）本专利技术中，进行了组织样本中MIR421水平诊断前列腺癌的实验，通过检测被试者组织样本、血液和尿液中的MIR421的含量，并与正常对照组织样本中MIR421的高含量相比较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种前列腺癌生物标志物MIR421，其特征在于：所述的MIR421是一种miRNA，MIR421的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1：5‘－AUCAACAGACAUUAAUUGGGCGC－3’。

【技术特征摘要】
1.一种前列腺癌生物标志物MIR421，其特征在于：所述的MIR421是一种miRNA，MIR421的核苷酸序列为：SEQIDNO.1：5‘－AUCAACAGACAUUAAUUGGGCGC－3’。2.权利要求1所述的前列腺癌生物标志物MIR421在制备前列腺癌高危人群筛选、诊断、药物靶标设计、治疗状况监测、预后监测的试剂盒中及药物治疗靶标中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：通过所述的试剂盒检测被试者血清、尿液和组织样本中MIR421的含量，并与正常水平MIR421含量相比较，进行前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测和...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑶，鲍升林，景奉香，杨树，浦洪雷，吴海，
申请(专利权)人：复旦大学，上海济远生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31