一种治疗前列腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗前列腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入100‑500mg/L的L‑谷氨酰胺、15‑150mg/L的维生素C、10‑20mU/L的胰岛素和5‑255μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4‑6min，离心力为150‑250g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为35‑39℃，含有4‑8％的CO

【技术实现步骤摘要】
一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法。
技术介绍
嵌合抗原受体是模拟T细胞受体功能的人工受体，由抗原识别结构域(配体或单链抗体)和T细胞的一系列信号结构域依次连接而成。利用嵌合抗原受体修饰T细胞能够将配体或抗体的特异识别作用与T细胞的效应功能联合起来，进行肿瘤靶向免疫治疗。此疗法是对人体自身T细胞加以改造后用于治疗，相对于放和化疗，其毒副作用较弱。由于嵌合抗原受体修的T细胞通过其抗原识别结构域识别肿瘤细胞表面抗原，然后启动杀伤作用，因此其治疗具有靶向性。由于该种T细胞通过其嵌合抗原受体直接识别肿瘤细胞表面抗原，然后通过其信号结构域直接将识别信号传速至胞内，激活T细胞的杀伤活性，因此可以绕开常规细胞免疫的主要组织相容复合体(MHC)限制性，从而有效克服肿瘤细胞MHC表达量低造成的免疫逃逸，并可以靶向非蛋白质肿瘤抗原。前列腺癌(ProstateCancer，PCa)是常见男性泌尿系统恶性肿瘤，其死亡率已超过肺癌，成为严重威胁男性健康第二大恶性肿瘤。虽然早期PCa易治疗，生产率高，但是三期、四期PCa死亡率高，且易出现骨转移。PCa目前的治疗方式主要有手术，放疗和化疗。PCa切除术手术创伤大、术后尿失禁和勃起功能障碍的发生率极高，且手术死亡率亦高；而放疗和化疗带来的副作用大，会严重影响患者的生活质量，为此我们提出了一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法。本专利技术提出的一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入100-500mg/L的L-谷氨酰胺、15-150mg/L的维生素C、10-20mU/L的胰岛素和5-255μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4-6min，离心力为150-250g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为35-39℃，含有4-8％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1-3的比例混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可制得治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂。优选地，所述S1中，向培养皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、75mg/L的维生素C、15mU/L的胰岛素和150μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基。优选地，所述S1中，培养基的PH值7-7.4。优选地，所述S3中，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心5min，离心力为200g，离心后待细胞沉淀后洗涤2次。优选地，所述S4中，扩增培养的天数为7-15天。优选地，所述S3中，离心速率为2000r/min。本专利技术先配置专用的培养基，再采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中，将生理盐水加入离心管中，将离心管内的溶液离心，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱扩增培养，将慢病毒对T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞，再将人血白蛋白、胰蛋白酶混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可，本专利技术制作简便，通过CAR-T细胞制剂治疗前列腺癌，治疗效果显著，人血白蛋白可以维持CAR-T细胞的活性。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例一本专利技术提出的一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入100mg/L的L-谷氨酰胺、15mg/L的维生素C、10mU/L的胰岛素和5μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4min，离心力为150g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为35℃，含有4％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1的比例混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可制得治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂。实施例二本专利技术提出的一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入200mg/L的L-谷氨酰胺、40mg/L的维生素C、12mU/L的胰岛素和50μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4.5min，离心力为175g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为36℃，含有5％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1.5的比例混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可制得治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂。实施例三本专利技术提出的一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、70mg/L的维生素C、17mU/L的胰岛素和100μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心5min，离心力为200g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为37℃，含有6％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶以1：2的比例混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可制得治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂。实施例四本专利技术提出的一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、120mg/L的维生素C、19mU/L的胰岛素和200μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心5.5min，离心力为225g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为38℃，含有7％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗前列腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入100‑500mg/L的L‑谷氨酰胺、15‑150mg/L的维生素C、10‑20mU/L的胰岛素和5‑255μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4‑6min，离心力为150‑250g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为35‑39℃，含有4‑8％的CO

【技术特征摘要】
1.一种治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，向培养皿中并依次加入100-500mg/L的L-谷氨酰胺、15-150mg/L的维生素C、10-20mU/L的胰岛素和5-255μg/L的血管内皮生长因子，通过氢氧化钠调节PH值，并加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；S2，采集患者自身的血液，从中分离出T细胞，并将T细胞放入离心管中；S3，将生理盐水加入S2中的离心管中，将离心管内的溶液离心4-6min，离心力为150-250g；S4，将离心后的T细胞转移至培养基上，并将培养基放入培养箱，培养箱内的温度为35-39℃，含有4-8％的CO2，扩增培养；S5，将慢病毒对S4的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S6，将人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1-3的比例混合在一起，再加入CAR-T细胞，混匀，即可制得治疗前列腺癌的CAR-T细胞制剂。2.根据权利要求1所述的一种治疗前列腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，胡广，顾潮江，柳浥时，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42