一种二萜化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新的二萜化合物及其制备方法，并提供了该化合物结构，该化合物为首次报道，是一种结构新颖的二萜类化合物，可以从猫爪草的干燥块根中提取、分离纯化得到。体外试验证明该化合物对前列腺癌细胞株PC3和DU145有抑制作用，且抑制作用具有浓度——时间依赖性关系，可以用来开发成治疗前列腺癌的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物
，具体涉及从猫爪草的干燥块根中分离得到的一种具有治疗前列腺癌作用的二萜化合物及其制备方法。
技术介绍
猫爪草RanunculiTernatiRadix为毛茛科植物小毛茛RanunculusternatusThunb.的干燥块根。本品呈纺锤形，多5～6个簇生，形似猫爪，长3～10mm，直径2～3mm，顶端有黄褐色残茎或茎痕。表面黄褐色或灰黄色，久存色泽变深，微有纵皱纹，并有点状须根痕和残留须根。质坚实，断面类白色或黄白色，空心或实心，粉性。气微，味微甘。猫爪草别名三散草(浙江)、猫爪儿草(河南)、猫爪子(河南)、鸭脚板(安徽)、金花草(广西)。猫爪草性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳祛痰等功效，临床用于治疗肺结核、淋巴结结核、咽喉炎、疟疾等症。民间用猫爪草治疗淋巴结核，不论结核大小或是否化脓均有较好的疗效。近年来因其有较好的抗肿瘤效果而成为研究热点。近年来针对猫爪草化学成分的研究较少，其主要含有黄酮类及苷类、生物碱、挥发油、有机酸等化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从猫爪草的干燥块根中分离得到的一种具有治疗前列腺癌作用的二萜化合物及其制备方法。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种二萜化合物，具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将猫爪草的干燥块根粉碎，用75～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15％乙醇洗脱8个柱体积，再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩得75％乙醇洗脱物浸膏；(c)步骤(b)中75％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(Ⅰ)。进一步地，步骤(a)中，用80％乙醇热回流提取，合并提取液。进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。本专利技术化合物在医药领域，可以作为抗前列腺癌药物，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有治疗有效量的本专利技术化合物(Ⅰ)，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。体外试验证明该化合物对前列腺癌细胞株PC3和DU145有抑制作用，且抑制作用具有浓度——时间依赖性关系，因此，本专利技术的上述化合物(Ⅰ)可以用来开发成治疗前列腺癌的药物。附图说明图1为化合物(Ⅰ)结构式；图2为化合物(Ⅰ)理论ECD值与实验ECD值比较；图3为不同浓度化合物(Ⅰ)作用72h后PC3和DU145存活率；图4为10.0mg/L化合物(Ⅰ)作用不同时间后PC3和DU145存活率。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。制备方法：(a)猫爪草的干燥块根(10kg)粉碎，用80％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15％乙醇洗脱8个柱体积，再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩得75％乙醇洗脱物浸膏(163g)；(c)步骤(b)中75％乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(10个柱体积)、45:1(9个柱体积)、20:1(8个柱体积)、10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分3(49g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(8个柱体积)、20:1(10个柱体积)和10:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2(21g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶ODS-C18分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(Ⅰ)(43mg)。结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z489.2808，结合核磁特征可得分子式为C26H42O7，不饱和度为6。核磁共振氢谱数据δH(ppm，DMSO-d6，600MHz)：H-1(1.16，m)，H-1(2.03，ddd，J＝13.7，8.7，1.8)，H-2(4.21，m)，H-3(1.91，m)，H-3(1.28，m)，H-4(2.20，ddd，J＝14.9，7.2，3.6)，H-6(1.48，m)，H-6(1.64，dt，J＝14.0，2.8)，H-7(1.31，m)，H-7(1.12，m)，H-8(1.45，m)，H-10(1.71，d，J＝13.7)，H-11(1.11，m)，H-11(1.34，m)，H-12(1.94，m)，H-14(6.33，dd，J＝17.6，10.9)，H-15(5.13，d，J＝17.6)，H-15(4.93，d，J＝10.8)，H-16(4.93，s)，H-16(4.82，s)，H-17(0.76，d，J＝6.8)，H-18(6.38，d，J＝7.2)，H-19(6.03，s)，H-20(0.84，s)，H-2’(2.15，td，J＝7.3，1.4)，H-3’(1.52，J＝7.3)，H-4’(0.84，t，J＝7.3)，H-2”(1.80，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，DMSO-d6，150Hz)：29.1(CH2，1-C)，66.4(CH，2-C)，29.4(CH2，3-C)，45.3...

【技术保护点】
一种二萜化合物，其特征在于：它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，

【技术特征摘要】
1.一种二萜化合物，其特征在于：它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
2.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于：包含以下操作步骤：(a)
将猫爪草的干燥块根粉碎，用75～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用
石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁
醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15％乙醇洗脱8个柱体积，
再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩得75％乙醇洗脱物浸膏；(c)
步骤(b)中75％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、20:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王赛波，
申请(专利权)人：温州统益生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33