四环二萜化合物及制备和应用制造技术

本发明专利技术属于药物化学、药理学与制剂领域，具体涉及四环二萜化合物、制备、药理作用机制研究、应用、制剂，涉及四环二萜化合物治疗抗凝血、脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物化学、药理学与制剂领域，具体涉及四环二萜化合物、制备、药理作用机制研究、应用、制剂，涉及四环二萜化合物治疗抗凝血、脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤的用途。
技术介绍
目前，全世界心血管疾病已成为导致人类死亡的主要原因之一，而血栓的形成在心血管疾病的发病机制中起到至关重要的作用。凝血途径主要涉及静脉和动脉血栓的形成，其产生可以认为包括3个阶段：引发、扩展和终止，通过凝血因子形成的凝血系统在血栓形成过程中具有重要的作用。抗凝血剂是一类防止血液凝固的药物，可用于防止静脉血栓形成、心肌梗塞和缺血性中风等。根据作用机制和来源不同，抗凝血剂主要有以下几类：香豆素类，是一类维生素K拮抗剂，典型药物为华法林；肝素及其衍生物，包括肝素，低分子肝素，磺达肝癸钠等；直接Xa因子抑制剂，如利伐沙班，阿哌沙班，依度沙班(2015年刚上市)；直接凝血酶抑制剂，如：达比加群酷，阿加曲班，比伐卢定，水蛭素等。传统抗凝药物如肝素类、维生素K括抗剂(VKAs)类，由于自身存在的诸多缺陷，限制了其临床上的广泛使用。FXa是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，它位于外在和内在凝血途径的交界处。在与其辅助因子Va(FVa)和磷脂表面的钙离子结合后，FXa将凝血酶原转化成凝血酶，凝血酶是在凝血级联反应中最后产生的酶。凝血酶进一步激活血小板，并同时将纤维蛋白原转化为纤维蛋白，从而最终导致血栓的形成。FXa是凝血通路中的关键凝血因子，抑制其活性可降低凝血酶的生成从而抑制血栓的形成。由于不影响现有凝血酶的活性，选择性FXa抑制剂引起出血的风险比较小，并且与传统抗凝药物相比具有疗效和安全性好，治疗疾病谱广，量效关系稳定，口服方便，不会产生药物间相互作用，且无需临床监测等优点。因此，FXa是一个非常重要的且明确的新型抗凝血剂的作用靶标。贝叶烷型四环二萜化合物异甜菊醇在抗肿瘤、调血脂、降血糖、抗炎等方面具有广泛生物活性，并且其制备原料甜菊苷较为廉价容易制得，安全毒性低，以其为先导化合物，对其进行结构改造与修饰，对发现能够应用于市场的活性化合物具有重大的意义。本专利技术主要对异甜菊醇19位羧基和16位羰基进行结构修饰，通过酯化、肟化、醚化、Heck等一系列反应进行结构修饰，并结合体外靶点筛选和动物实验筛选得到了几个活性较好的化合物。结构修饰首先对19位羟基进行乙酯化，16位羰基的肟化，再对肟羟基进行结构修饰，通过醚化反应和Heck反应连接上不同的结构片段，得到结构通式化合物及系列化合物。技术方案本专利技术涉及四环二萜化合物，结构通式为：R1为：-H，中的任意一种或多种；R2为：-COOEt；n为：0-2。R2为：-COOEt；n为：0-2；本专利技术涉及四环二萜化合物，结构为：本专利技术涉及四环二萜化合物，编号为化合物cp-2系列，结构如下：：本专利技术涉及四环二萜化合物，编号为化合物cp-3系列，结构如下：：本专利技术涉及四环二萜化合物用于制备凝血因子抑制剂。本专利技术涉及四环二萜化合物用于制备抗凝血、抗血栓、中任意一种或多种的组合物。本专利技术涉及四环二萜化合物用于制备治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤中任意一种或多种疾病的药物组合物。本专利技术涉及四环二萜化合物制备抑制脑缺血的药物组合物。本专利技术涉及四环二萜化合物制备抑制脑缺血引起的神经功能损伤、脑梗死中任意一种或多种疾病的药物组合物。本专利技术涉及四环二萜化合物制备降低脑水含量、缓解脑水肿现象中任意一种或多种疾病的药物组合物。本专利技术涉及四环二萜化合物的制剂，每制剂单位含有0.01-500mg的活性化合物。本专利技术涉及四环二萜化合物的制剂，每制剂单位含有0.1-200mg的活性化合物。本专利技术涉及四环二萜化合物的制剂，每制剂单位含有1-100mg的活性化合物。本专利技术涉及四环二萜化合物的制剂，制剂类型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、缓释胶囊剂、冻干粉针剂、注射剂等。本专利技术的化合物针对抗凝血、抗血栓，具有较好的市场应用前景。本专利技术的化合物针对治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤，具有较好的市场应用前景。本专利技术的药效试验药效试验一：化合物对凝血因子FXa抑制作用的体外研究1.试验目的根据新西药临床前研究指导原则的要求，研究新合成的系列化合物对凝血因子Xa(FXa)的体外抑制作用及其IC50。试验材料2.1试验药物新合成的系列化合物以及阳性药均由北京大学医学部提供。2.2试验试剂HumanFXa，Kordia公司(由济南欣联鑫生物技术有限公司代购)；S-2765显色底物，BoatmanBiotech公司(由济南欣联鑫生物技术有限公司代购)；牛血清白蛋白(BSA)，国药集团；DMSO，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris)，Sigma公司。2.3试验仪器FORMA700型超低温冰箱，Thermo公司；YC-300L型药品储存柜，中科美菱低温科技有限责任公司；Direct-Qwithpump型超纯水仪，Millopore公司；M200型全波长酶标仪，Tecan公司。3.试验方法3.1化合物浓度选择阳性药：0.1nM，1nM，10nM，100nM，1000nM。化合物：根据初筛结果将待测化合物浓度设置为1nM，10nM，100nM，1000nM，10000nM或10nM，100nM，1000nM，10000nM，100000nM。3.2实验步骤3.2.1配制BSABuffer(牛血清白蛋白缓冲液)取0.005mol(0.605g)Tris，0.01mol(0.58g)NaCl，0.10gBSA，加100ml三蒸水，摇匀，得到终浓度为0.05MTris-0.1MNaCl-0.1％BSA缓冲液(pH＝7.4)，备用。3.2.2化合物溶液的配制取10μl化合物，加入100nlDMSO，震荡，使溶解并混匀，得到105mol/l的化合物母液。按递倍稀释法定量稀释至规定浓度。3.2.3FXa抑制活性的测定于96孔板中，每孔加入10μl上述已配好的不同浓度的药液(空白组中加0.1％DMS010μl)，和25μl的0.003IU/mL的humanFXa，以40μl的BSA缓冲液(pH7.4)混合均匀。37℃下孵育15min。之后加入40μl显色底物S-2765，震荡10s后，于室温下孵育1h。酶标仪下测定各孔在405nm的吸光度。3.3数据统计FXa抑制活性＝1-[(OD/min)sample/(OD/min)control]。IC50值通过SPSS19.0软件计算分析得出。4.试验结果表1.InvitroactivityofcompoundsvsFactorXa如表1所示，阳性对照化合物Rivaroxaban与Edoxaban的IC50分别为0.7±0.08nM以及3.4±0.43nM。IC50＜1μM的化合物有cp-2-11(55.4±4.7nM)、cp-2-16(29.8±3.2nM)、cp-2-20(451.7±52.7nM)、cp-3-13(421.6±39.7nM)药效试验二、化合物对各凝血因子抑制作用以及aPTT、PT影响的体外研究1.试验目的根据新西药临床前研究指导原则的要求，研究新合成的系列化合物对凝血因子Xla(FXIa)、凝血因子VIIa(FVIIa)、凝血因子XIIa(FXIIa)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种四环二萜化合物，结构通式为：R1为：‑H，中的任意一种或多种；R2为：‑COOEt；n为：0‑2。

【技术特征摘要】
1.一种四环二萜化合物，结构通式为：R1为：-H，中的任意一种或多种；R2为：-COOEt；n为：0-2。2.根据权利要求1的一种四环二萜化合物，结构为如下结构式的任意一种：3.根据权利要求1-2的一种四环二萜化合物，其特征在于：四环二萜化合物用于制备凝血因子抑制剂。4.根据权利要求1-2的一种四环二萜化合物，其特征在于：用于制备抗凝血、抗血栓、治疗脑缺血、脑中风、...

【专利技术属性】
技术研发人员：付宏征，陈鹏，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11