【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种腺相关病毒变体及其应用。
技术介绍
1、腺相关病毒(adeno-associated viruses，aav)是一类小型、无包膜的病毒，病毒内部包装的基因组为一条长度约4.70kb的线状单链dna基因组(ssdna)。aav直径为25nm，拥有二十面体稳定结构的衣壳，衣壳主要负责结合宿主细胞受体，单链dna包含两个功能基因。aav衣壳由三种衣壳蛋白vp1、vp2和vp3组成，三种蛋白的比例为1:1:10，共60个衣壳蛋白组成一个完整的aav衣壳，vp1和vp2蛋白共享vp3序列。
2、作为一种基因导入系统，aav病毒载体具有安全性好，免疫原性低，能感染分裂细胞和非分裂细胞，能介导基因的长期稳定表达等优点。腺相关病毒的衣壳识别细胞受体，直接跟宿主接触，很大程度上决定了aav的侵染效率和靶向性。提高aav侵染效率从而降低治疗成本仍然是目前亟需解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种腺相关病毒变体及其应用。
2、第一方面，本专利技术要求保护一种腺相关病毒衣壳蛋白变体。
3、本专利技术要求保护的腺相关病毒衣壳蛋白变体含有seq id no.1所示多肽。
4、本专利技术aav衣壳蛋白质变体可以通过将所述多肽插入至任何aav(诸如aav类型1(aav1)、aav类型2(aav2)、aav类型3(aav3)、aav类型4(aav4)、aav类型5(aav5)、aav类型6(aav6)、aav类型7(
5、进一步地，所述腺相关病毒为9型腺相关病毒或dj型腺相关病毒。
6、进一步地，所述腺相关病毒衣壳蛋白变体为向所述腺相关病毒衣壳蛋白的氨基酸序列中插入seq id no.1所示多肽后得到。
7、更进一步地，所述插入为将seq id no.1所示多肽插入所述腺相关病毒的衣壳蛋白vp1、vp2和vp3三者中的全部或任意两种或任意一种。
8、更加具体地，所述插入可为将seq id no.1所示多肽插入所述腺相关病毒的衣壳蛋白vp1、vp2和vp3三者的共享区域。
9、所述插入可为将seq id no.1所示多肽插入所述腺相关病毒的衣壳蛋白vp1的如下三个位置中的任一个：第450-460位氨基酸之间；第585-590位氨基酸之间；第668和669位氨基酸之间；即vp2的313-323位、443-453位、531-532氨基酸之间；vp3的248-258位、378-388位、466-467位氨基酸之间。
10、在本专利技术的一些案例中，所述插入为将seq id no.1所示多肽插入9型腺相关病毒的衣壳蛋白vp1(氨基酸序列如seq id no.5所示)的第588和589位氨基酸之间，对应9型腺相关病毒的衣壳蛋白vp2(氨基酸序列如seq id no.6所示)的第451和452位氨基酸之间，同时对应9型腺相关病毒的衣壳蛋白vp3(氨基酸序列如seq id no.7所示)的第386和387位氨基酸之间。基于此，本领域技术人员可以容易地鉴定aav9之外的aav血清型和分化体的衣壳蛋白质的氨基酸对应于在aav9 vp1氨基酸编号588的氨基酸。例如，aav9 vp1的氨基酸编号588对应aav1的氨基酸编号588、aav2的氨基酸编号587和aav8的氨基酸编号590。
11、在本专利技术的一些案例中，所述插入为将seq id no.1所示多肽插入dj型腺相关病毒的衣壳蛋白vp1(seq id no.10)的第588和589位氨基酸之间。
12、即，对于被制成含有所述肽的aav衣壳蛋白质，可以使用aav vp1、vp2和vp3。可以仅vp1、vp2和vp3中任意一种被制成含有所述多肽，或可以vp1、vp2和vp3的全部被制成含有所述多肽。此外，两种衣壳蛋白质，诸如vp1和vp2、vp2和vp3或vp1和vp3可以被制成含有所述多肽。通过aav基因组中的cap基因区域编码vp1至vp3。在本专利技术的一个实施方案中，由vp1至vp3共享的区域被制成含有所述肽，因此可以将突变导入至全部vp1至vp3中。在本专利技术的另一个实施方案中，编码vp1、vp2或vp3的基因从aav的cap基因分别制备，并且将突变导入至所述基因。
13、此外，可以向所述多肽的n端和/或c端添加间隔序列(spacer sequence)后插入或替换入aav衣壳蛋白。间隔序列优选地由1至5个氨基酸残基组成。组成间隔序列的氨基酸残基是特别限制的。例如，间隔序列可以包括选自丙氨酸和丝氨酸的氨基酸。
14、第二方面，本专利技术要求保护一种核酸分子。
15、本专利技术要求保护的核酸分子为编码前文第一方面中所述腺相关病毒衣壳蛋白变体的核酸分子。
16、在本专利技术的具体实施方式中，在所述腺相关病毒衣壳蛋白变体中，编码vp1蛋白的核酸分子如seq id no.4所示，编码vp2蛋白的核酸分子如seq id no.4的第412-2235位所示，编码vp3蛋白的核酸分子如seq id no.4的第607-2235位所示。
17、其中，seq id no.4为在aav9的cap基因(seq id no.3)的第1764和1765位碱基之间插入seq id no.2所示dna片段后得到的。seq id no.2为seq id no.1所示多肽的编码基因。
18、本专利技术的核酸可以操作地连接至合适的启动子序列、聚腺甘酸化信号、转录终止序列、上游调节域、复制起始位点、内部核糖体进入位点(ires)和/或增强子。启动子序列的实例包括诱导型启动子序列和组成型启动子序列。所述启动子序列、聚腺甘酸化信号、转录终止序列、上游调节域、复制起始位点、内部核糖体进入位点(ires)和/或增强子可以是衣壳蛋白质来源的aav的内源性或外源性序列、天然序列或合成的序列。
19、本专利技术的核酸分子可用于在体外、先体外后体内或在体内递送至细胞，并且赋予细胞表达aav衣壳蛋白质变体的能力。随后，被递送本专利技术核酸的细胞可用于生产aav颗粒。所述细胞可为动物细胞(优选哺乳动物细胞)中。
20、第三方面，本专利技术要求保护含有前文第二方面中所述核酸分子的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。
21、在本专利技术中，所述载体可为质粒dna、噬菌体dna、转座子、粘粒dna、附加体dna或病毒载体。
22、本专利技术还提供了转基因细胞系，涉及宿主细胞，例如分离的宿主细胞，其含有本专利技术的核酸分子。分离的细胞是，例如，在体外维持本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒衣壳蛋白变体含有SEQ IDNo.1所示多肽。
2.根据权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒衣壳蛋白变体为向腺相关病毒衣壳蛋白的氨基酸序列中插入SEQ ID No.1所示多肽后得到。
3.根据权利要求2所述的腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒为AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV-DJ、禽AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV或羊AAV；
4.编码权利要求1-3中任一所述腺相关病毒衣壳蛋白变体的核酸分子。
5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于：在所述腺相关病毒衣壳蛋白变体中，编码VP1蛋白的核酸分子如SEQ ID No.4所示，编码VP2蛋白的核酸分子如SEQ ID No.4的第412-2235位所示，编码VP3蛋白的核酸分子如SEQ ID No.4的第607-2235位所示；或
6.含有权利要求4或5所述核酸分子的表达盒或重组载体或
7.一种腺相关病毒变体，含有权利要求1-3中任一所述腺相关病毒衣壳蛋白变体。
8.权利要求7所述腺相关病毒变体在作为基因导入载体中的应用。
9.如下任一应用：
10.如下任一生物材料：
...【技术特征摘要】
1.腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒衣壳蛋白变体含有seq idno.1所示多肽。
2.根据权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒衣壳蛋白变体为向腺相关病毒衣壳蛋白的氨基酸序列中插入seq id no.1所示多肽后得到。
3.根据权利要求2所述的腺相关病毒衣壳蛋白变体，其特征在于：所述腺相关病毒为aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav-dj、禽aav、牛aav、犬aav、马aav或羊aav；
4.编码权利要求1-3中任一所述腺相关病毒衣壳蛋白变体的核酸分子。...
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