一种靶向表达DSG3表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种靶向表达DSG3表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用，属于基因工程技术领域。为以下至少一种：(1)靶向表达DSG3表面抗原细胞的嵌合抗原受体；(2)靶向表达DSG3表面抗原细胞，同时分泌IL

【技术实现步骤摘要】
一种靶向表达DSG3表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种靶向表达DSG3表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。

技术介绍

[0002]DSG3(desmoglein 3桥粒芯糖蛋白)，该基因编码的蛋白是桥粒芯蛋白家族和钙粘蛋白细胞粘附分子超家族的成员。编码的蛋白在85％
‑
90％肺鳞癌中表达，且在肺鳞癌，头颈鳞状细胞癌，宫颈鳞癌和腺癌，胰腺癌，膀胱尿路上皮癌，乳腺浸润癌，结肠癌，食管癌，前列腺癌，直肠腺癌，皮肤黑色素瘤，睾丸癌，胸腺癌，胃癌，子宫内膜癌，子宫肉瘤等多种癌症中表达(图1)。该蛋白已被鉴定为自身免疫性水疱病寻常型天疱疮的自身抗原。且是胰腺癌(不利)和尿路上皮癌(不利)的预后标志物(Schmidt E，et al.2019；Zillikens D，et al.2018；Lim YL，et al.2022)。DSG3是实体肿瘤和一些实体肿瘤的恶性细胞常常表达的细胞表面抗原，因此，在治疗这类疾病时，最好能够使用可靶向DSG3的药物或疫苗(Lotti R，et al.2022)。
[0003]IL
‑
15SA融合蛋白可以延长IL15在血清中的半衰期并增加IL15β受体对免疫细胞的亲和力，募集CD8
+
T细胞、CD4
+
T细胞、自然杀伤细胞和肥大细胞，能够特异性结合IL
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15并与周围效应NK细胞和T细胞上的IL
‑
15Rβ
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γ链形成免疫突触结构，激活NK/T细胞的JAK/STAT等通路发挥作用(Cheever MA，et al.2008；Mortier E，et al.2006)。促进CD3
+
T细胞(主要是CD8
+
T细胞)和NK1.1
+
NK细胞增殖；增强体内细胞因子对IgG或T细胞参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的影响(Waldmann TA，et al.2020；Akdis M，et al.2011)；IL
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15还可以促进寿命更长、亲和力更高的CD8
+
T细胞的诱导，可以非常有效地杀死肿瘤细胞，最终增强免疫疗法的抗肿瘤作用(Xu H，et al.2021；Qiyue Hu，et al.2018；Martin A，et al.2008)。
[0004]IL1RL2/IL
‑
36R受体结合并通过其发出信号的细胞因子，进而激活靶细胞中的NF
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kappa
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B和MAPK信号通路。IL
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36信号系统的一部分，被认为存在于上皮屏障中并参与局部炎症反应；类似于与其共享辅助受体IL1RAP的IL
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1系统。通过作用于角质形成细胞、树突状细胞和间接作用于T细胞来驱动组织浸润、细胞成熟和细胞增殖，从而参与皮肤炎症反应(Bachmann M，et al.2012)。在培养的角质形成细胞中诱导巨噬细胞、T细胞和中性粒细胞趋化因子的表达，例如CCL3、CCL4、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CL20、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CXCL8、CCL20和CXCL1；还刺激其自身的表达以及原型皮肤促炎参数TNF
‑
α、S100A7/牛皮癣和诱导型NOS的表达(Gresnigt M.S，et al.2013)。可能在特定中性粒细胞气道炎症期间的促炎反应中发挥作用：激活原发性肺成纤维细胞中的丝裂原活化蛋白激酶和NF
‑
kappa B，并刺激肺成纤维细胞中IL
‑
8和CXCL3和Th17趋化因子CCL20的表达。可能参与对真菌病原体(如烟曲霉)的先天免疫反应(Debets R，et al.2001；Foster A.M，et al.2014)。将IL
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36
‑
γ基因工程入CAR，可以显著的改善增殖和持久性。表达IL
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36γ的CAR
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T细胞能够
增强肿瘤小鼠脾巨噬细胞和树突状细胞上MHC II类和CD86的表达，提示IL
‑
36在抗原提呈细胞的成熟中发挥作用。在小鼠模型，显示出超强的抗肿瘤活性(Li X，etal.2020)。
[0005]CXCL11(C
‑
X
‑
C motif chemokine ligand 11，C
‑
X
‑
C基序趋化因子11又名干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I
‑
TAC))，是CXC趋化因子家族中的小分子量细胞因子(Huoman J，et al.2021)。它在外周血白细胞、胰腺和肝脏中高度表达，在胸腺、脾和肺中中等程度表达，在小肠、胎盘和前列腺组织中低度表达(Moreno B，et al.2022)。CXCL11通过与细胞表面趋化因子受体CXCR3相互作用来作用于靶细胞。CXCL11可以趋化活化的T细胞(Rot A，et al.2010；Li L，et al.2022)。
[0006]CCR8(C
‑
C motif chemokine receptor 8)是趋化因子受体亚家族的成员之一，属于G蛋白偶联受体。人CCL1是CCR8的主要配体，其它配体有CCL8、CCL16和CCL18。CCR8在肿瘤浸润的调节性T细胞(Treg)上特异性表达，在Th2细胞和肿瘤细胞也均有表达；然而在外周血Treg或正常组织上基本不表达。CCR8的主要作用是参与Tregs和Th2细胞向炎症和肿瘤部位的募集。大量研究发现，高表达的CCR8与多种癌症相关，包括结直肠癌、乳腺癌、胃癌、转移性脑癌、转移性肝癌，尤其是在乳腺癌分离的Tregs细胞上(Karin，，et al.2018；Das，Suvendu，et al..2013)。
[0007]CCL1结合CD4
+
T细胞上的CCR8，导致CD4
+
T细胞转化为Tregs，再募集Tregs；CCL1结合Tregs上的CCR8，Tregs向炎症或肿瘤部位募集。CCR8
‑
CCL1轴不仅将CCR8
+
Tregs招募到TME中。CCR8
‑
CCL1还可诱导对Tregs抑制至关重要的F0XP3和CD39，以及IL
‑
10的上调，这将增强Treg的免疫抑制活性。研究发现，与正常组织中的Tregs相比，CCR8在人类乳腺癌的肿瘤浸润性Tregs中显著上调，表明CCR8是TME中Tregs上的一个有希望的治疗靶点，而不会引起系统性自身免疫(Whiteside，Sarah K.，et al.2021；Roose，Heleen，et al.2021；Korbecki，Jan，et al.2020)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
NO：10所示；所述CXCR6结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：32所示。9.一种表达权利要求1
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8任一项所述的靶向表达DSG3表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体的重组表达载体或宿主细胞，其特征在于，包括嵌合抗原受体，招募嵌合抗原受体，浸润嵌合抗原受体，融合嵌合抗原受体中至少一种的表达框，所述嵌合抗原受体，招募嵌合抗原受体，浸润嵌合抗原受体，融合嵌合抗原受体的表达框由可在T细胞中表达的启动子和位于所述启动子下游的编码所述嵌合抗原受体，招募嵌合抗原受体，浸润嵌合抗原受体，融合嵌合抗原受体的核酸组成。10.根据权利要求9所述的重组表达载体或宿主细胞，其特征在于，所述启动子为RSV启动子，CMV启动子，SV40启动子、EF
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，孙钒，崔烨挺，吕梦清，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：