本发明专利技术涉及一种泥螺寡肽在抗前列腺癌中的应用，尤其涉及该泥螺寡肽在抗前列腺癌DH-145肿瘤细胞药物中的应用。该泥螺寡肽的氨基酸序列为Gln-Pro-Pro-Gly-Leu，以泥螺为原料，通过胰蛋白酶酶解泥螺组织，结合凝胶层析和高效液相色谱分离纯化获得。本发明专利技术中的泥螺寡糖可对前列腺癌DH-145肿瘤细胞显著抑制，其中对DH-145细胞的增殖抑制率可达33.5～88.4％，对前列腺癌DH-145细胞的早期凋亡和晚期凋亡的影响率分别为20～22.27％和28～30.66％，可见具有显著地抗肿瘤活性。泥螺寡肽具有良好的开发前景，对泥螺寡糖的抗前列腺癌DH-145肿瘤细胞的研究可为抗前列腺癌药物的开发研究提供理论支持。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及泥螺酶解寡肽的应用，具体涉及一种泥螺寡肽在抗前列腺癌药物中的 应用。
技术介绍
泥螺（Bullactaexarata)，俗称"吐铁"、"黄泥螺"、"梅螺"等，属软体动物门、腹足 纲、后鳃亚纲、头楣目、阿地螺科、泥螺属，为太平洋西岸海水及咸淡水特产的种类，由贝壳 和软体两部分组成，含有丰富的蛋白质、钙、磷、铁和维生素等成分，寡肽物质丰富，在我国 广泛分布于东海和黄海两侧的长江，是一种常见的水产品。 恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病，发病率越来越高，目前已有的 化疗药物虽对大多数肿瘤有一定的疗效，但选择性差、毒副反应大、耐药性等问题依然非常 明显。因此，寻找高效、低毒、特异强的抗肿瘤药物仍势在必行。寡肽因其分子量小、无免疫 原性、活性高、副作用小，尤其是对多药抗性的肿瘤细胞系也有很好的抑制活性。海洋生物 寡肽是目前海洋生物活性物质研究的一个重要领域，一些生物活性寡肽常以非活性状态存 在于蛋白质中，这些蛋白质经过蛋白酶的水解作用，使得隐藏于其中的活性肽释放出来，有 可能发挥出比蛋白质更多的生物活性。例如：如邓伟等发现藻蓝蛋白酶解寡肽对人宫颈癌 HeLa细胞株的体外生长有明显的抑制作用；杨永芳等酶解紫贻贝所得的紫贻贝寡肽对前 列腺癌PC-3细胞和DU-145细胞有特异性的增殖抑制作用，并且对DU-145细胞的抑制作用 强于对PC-3细胞的增殖抑制作用；姚如永等研究泥蚶寡肽在0. 25-1. 0g·L1范围内，寡肽 能明显的抑制肺癌细胞A549和Ketr-3细胞的增殖，同时还能抑制细胞蛋白质的合成，并呈 明显的剂量依赖性。 前列腺癌为男性高发的恶性肿瘤，其死亡率高居癌症死亡率的第二位，仅次于肺 癌。近年来，随着人们生活方式的改变、人口的老龄化以及诊断水平的不断提升，我过前列 腺癌的发病率明显呈上升趋势。前列腺癌DU-145细胞是从前列腺癌脑转移肿瘤中分离出 来的，分化程度低，为雄激素依赖的前列腺癌细胞，具有强大的转移潜能，缺乏内源性的雄 激素受体的表达。DU-145细胞完全贴壁的时间通常为24h内，具有较强的侵袭和促血管新 生能力。研究泥螺酶解寡肽多前列腺癌DU-145细胞的抑制作用，对前列腺癌药物的理论研 究具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是在酶解泥螺组织获取泥螺寡肽的基础上，提供一种 泥螺寡肽在抗前列腺癌药物中的应用，尤其是抗前列腺癌DU-145肿瘤细胞。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种泥螺寡肽在抗前列腺癌 DU-145细胞药物中的应用，其特征在于：所述泥螺寡肽的氨基酸序列如SEQIDNO. 1所述， 其中药物的具体实现形态可为片剂、胶囊剂、颗粒剂或丸剂等。 上述泥螺寡肽通过以下步骤制得：新鲜泥螺洗净去壳，取泥螺组织捣碎匀浆，用盐 酸溶液和氢氧化钠溶液将匀浆液的pH值调节为8~9,料液比为1 : (3. 8~4)加入0. 4~ 0. 5 %匀浆液体积的胰蛋白酶，40~50°C保温水解7~9h，水解完成后95~KKTC、10~ 15min进行灭酶，4°C下水解液于9500~10000r/min离心15~20min，取上清液，经3kd超 滤膜超滤获得分子量小于3kd的第一组分，将该第一组分经凝胶层析洗脱获得第二组分， 最后将该第二组分反相高效液相色谱分离获得所述泥螺寡肽。 作为优选，所述凝胶层析条件如下：所述第一组分的浓度为48~50mg/mL、上样 3~4mL、速度为2. 5~3. 5ml/min，流动相为超纯水，280nm紫外检测。 作为优选，所述反相高效液相条件如下：ZorbaxSB_C18(4. 6X250,5um);柱温为 20°C;流动相为1 %TFA和乙腈；梯度洗脱：从开始到30min结束，乙腈浓度从0变化到40%， 洗脱速度为1. 〇mL/min;进样体积为50ul紫外检测波长分别为214nm、280nm。 进一步，6~14mg/ml所述泥螺寡肽作用于DU-145细胞24~36h后，对前列腺癌 DU-145细胞的增殖抑制率为33. 5~88. 4%，且增殖抑制率与泥螺寡肽的浓度呈正相关。 再进一步，6~14mg/ml所述泥螺寡肽作用于DU-145细胞24h后，对前列腺癌 H1299细胞的早期凋亡和晚期凋亡的影响率分别为20~22. 27%和28~30. 66%，且增殖 抑制率与泥螺寡肽的浓度呈正相关 与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术利用泥螺为原料，通过酶解提取泥螺 寡肽，泥螺为一种低值贝类，在我国广泛分布，来源广，成本低，并且本专利技术中泥螺寡肽的提 取方法温和易控，工艺简单，操作方便。本专利技术中的泥螺寡糖可对前列腺癌DU-145肿瘤细 胞显著抑制，其中对DU-145细胞的增殖抑制率可达33. 5~88. 4%，对前列腺癌DU-145细 胞的早期凋亡和晚期凋亡的影响率分别为20~22. 27%和28~30. 66%，可见具有显著地 抗肿瘤活性。泥螺寡肽具有良好的开发前景，对泥螺寡糖的抗前列腺癌DU-145肿瘤细胞的 研究可为抗前列腺癌药物的开发研究提供理论支持。【附图说明】 图1为实施例1中第一组分的凝胶层析图谱； 图2为实施例1中第二组分的高效液相色谱图； 图3为实施例4中泥螺寡肽对前列腺癌DU-145肿瘤细胞的增殖抑制作用与作用 时间和作用浓度关系折线图； 图4为图3的柱状图； 图5为实施例4中不同浓度的泥螺寡肽作用于与DU-145细胞后的HE染色图，A: 对照组，B:6mg/ml，C: 10mg/ml，D: 14mg/ml; 图6为实施例4中不同浓度的泥螺寡肽作用于与DU-145细胞后的Α0/ΕΒ双染荧 光图，A:对照组，B:6mg/ml，C: 10mg/ml，D: 14mg/ml; 图7为实施例4中不同浓度的泥螺寡肽作用于与DU-145细胞后的Annexin V-FITC/PI染色结果图，A-1:对照组，A_2:6mg/ml，A_3:10mg/ml，A_4:14mg/ml。【具体实施方式】 以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。 实施例1 :泥螺寡肽的制备 (1. 1)原料处理：取新鲜泥螺，将泥螺去壳、浙干后匀浆备用。 (1. 2)泥螺酶解工艺 用高速组织捣碎机将泥螺组织捣碎匀浆，精密称取匀浆液，用0.lmol/L的盐酸 溶液和〇.lmol/L的NaOH溶液调pH值，加入胰蛋白酶酶解数小时，酶解条件为酶解温度 45°C，pH为8. 7,料液比1:4,酶解时间8h，加酶量0. 48%。100°C下灭酶15min，4°C下离心 15min(10000r/min)，取上清液浓缩备用。 (1. 3)泥螺多肽的分离纯化 首先选用超滤法对泥螺多肽酶解液进行分离，超滤膜分别选用10kd，5kd，3kd，分 别截留到分子量l〇-5kd、5-3kd和小于3kd三个组分，冷冻干燥后分别配成20mg/mL的浓 度，用MTT法测定各个组分对前列腺癌DU-145的抑制率。选出活性最高的第一组分（分子 量小于3kd)，选用SephadexG-25凝胶层析，装柱后用去离子水平衡，浓度为50mg/mL、上样 4mL、速度为3ml/min，流动相为超纯水，280nm紫外检测，凝胶层析曲线如图1所示，收集最 高洗脱峰冷冻干燥成粉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种泥螺寡肽在抗前列腺癌DU‑145细胞药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闻正顺，马剑茵，曹玉昊，林焕乐，胡俊峰，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。