水溶性寡肽的萃取方法及测定方法技术

本发明专利技术公开了一种水溶性寡肽的萃取方法，包括：制备含水溶性寡肽的给出相溶液；将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向所述中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封所述中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置；将所述离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从所述给出相溶液萃取到接收相溶液。本发明专利技术还公开了一种水溶性寡肽血浆样品的测定方法。通过上述实施方式，水溶性寡肽富集倍数高，有利于提高水溶性寡肽的分析效率。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种水溶性寡肽的萃取方法，包括：制备含水溶性寡肽的给出相溶液；将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向所述中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封所述中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置；将所述离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从所述给出相溶液萃取到接收相溶液。本专利技术还公开了一种水溶性寡肽血浆样品的测定方法。通过上述实施方式，水溶性寡肽富集倍数高，有利于提高水溶性寡肽的分析效率。【专利说明】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
水溶性肽生物样品因其含量低、杂质多和不易被有机溶剂萃取等特点，其快速萃取、富集和准确定量分析是目前水溶性肽生物样品检测的难点。目前水溶性肽生物样品多采用化学方法或有机溶剂方法去除蛋白后旋转蒸发或氮吹等去除有机溶剂的提取方式。存在费时费力、去除杂质效果不好、基质效应高，水溶性肽浓度低等缺点。肽类分析物的分析方法主要包括免疫法、高效液相色谱法(HPLC)电泳法(CE)和液相色谱-质谱法(HPLC-MS)等，其中HPLC是肽类分析物含量测定应用最广泛的技术，反相高效液相色谱法(RP-HPLC)用于寡肽分析具有成本低、操作简单、较高的分辨率，能够应用于大量样品分析等优点。但是，当生物基质中肽的浓度很低，结构与内源性物质非常接近或相似时，HPLC灵敏度低、特异性不强的缺点会凸显，因此需要一个高效、灵敏的前处理过程。然而，常规液相萃取方法并不适用从生物样品中萃取水溶性肽。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题提供一种，该萃取方法使水溶性寡肽富集倍数高，有利于提高水溶性寡肽的分析效率。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种水溶性寡肽的萃取方法，包括如下步骤:制备含水溶性寡肽的给出相溶液;将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向所述中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封所述中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置;将所述离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从所述给出相溶液萃取到接收相溶液。进一步地，在制备含水溶性寡肽的给出相溶液的步骤之中，包括:取适量含水溶性寡肽的溶液并进行蛋白沉淀;对所述溶液进行离心分离后取上清液；向所述上清液中加入缓冲液调节PH值至适量值以作为所述给出相溶液。进一步地，所述水溶性寡肽是降血压肽，所述溶液是血浆；在进行沉淀的步骤之中，具体为:对所述血浆进行醇沉淀，其中，向所述血浆中加入甲醇并调配至血浆:甲醇的比例为1: 3?1: 5以进行醇沉淀；在对所述血浆进行醇沉淀的步骤之后，包括:将所述血浆摇匀，并冷却至4±0.5°C。进一步地，在对所述血楽进行离心分离后取上清液的步骤之中:在转速12000rpm、时长5min、温度4°C的条件下进行离心分离。进一步地，在向所述上清液中加入缓冲液调节pH值至适量值的步骤之中:用添加氢氧化钠的磷酸盐缓冲液调节所述上清液的PH值至9-13。进一步地，在将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封的步骤之中，具体为:将所述中空纤维膜在室温下浸入含有阳离子载体的有机溶液中间相5-8min后取出；在将所述中空纤维膜转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间中，采用涡旋振荡仪振荡10-90min。进一步地，所述阳离子载体为al iguat336，其浓度范围为1%_20%;所述有机溶剂选用正辛醇、甲苯、二甲苯和邻苯二甲酸二丁酯中的一种。进一步地，所述接收相溶液为添加盐酸的pH值为1-5、浓度为lm0l/L-4m0l/L的NaCl溶液。为完整解决上述技术问题，本专利技术还提供一种水溶性寡肽的测定方法，包括如下步骤:制备含水溶性寡肽的给出相溶液;将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向所述中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封所述中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置;将所述离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从所述给出相溶液萃取到接收相溶液;吸取一定量的接收相溶液并注入装有衬管的液相瓶中；将所述接收相溶液稀释5-10倍后进行高效液相色谱检测。进一步地，所述高效液相色谱检测的色谱条件为流动相为各含有0.1%TFA的乙腈和水，所述乙腈与所述水的比例为18:82，流速ImL.min—1，检测波长202nm，柱温35 °C，1yL进样。本专利技术实施方式的，该萃取方法使水溶性寡肽富集倍数高，有利于提高水溶性寡肽的分析效率。【附图说明】图1是本专利技术水溶性寡肽的萃取方法实施方式的流程图。图2是图1所示水溶性寡肽的萃取方法中制备含水溶性寡肽的给出相溶液的流程图。图3是本专利技术水溶性寡肽的测定方法实施方式的流程图。【具体实施方式】下面结合附图和实施方式对本专利技术进行详细说明。参阅图1，本专利技术提供一种水溶性寡肽的萃取方法。该方法包括如下步骤: 步骤SI，制备含水溶性寡肽的给出相溶液。步骤S2，将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置。采用中空纤维膜能够增加萃取液滴的稳定性，避免有机溶剂的损失，而且大分子物质、杂质不能进入有机溶剂。其中，阳离子载体中间相附着于中空纤维膜的膜壁内，接收相溶液注入于中空纤维膜的内腔内。步骤S3，将离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从给出相溶液萃取到接收相溶液。举例而言，可选涡旋振荡仪振荡10-90min。如图2所示，在步骤SI之中，包括如下子步骤: 步骤Sll，取适量含水溶性寡肽的溶液，并对其进行蛋白沉淀以抑制寡肽的进一步酶解。在一【具体实施方式】中，该水溶性寡肽通常可以是降血压肽，该溶液可以是血浆。进而，该蛋白沉淀步骤具体可以为:对血浆进行醇沉淀。具体而言，向血浆中加入甲醇，血浆:甲醇比例为1: 3?1: 5，然后进行醇沉淀以去除血浆中的蛋白。在醇沉淀之后，可以将血浆摇匀，并冷却至4 ± 0.5°C。冷却时可以将血浆置入冰箱等冷却设备进行，在预设为4±0.5°C的冰箱等设备中，通常冷却降温5-lOminSP可。步骤SI 2，对溶液进行离心分离后取上清液。以溶液为含降血压肽的血浆为例进行说明，该离心分离的条件可以设置为:转速12000rpm、时间5min、温度4°C。步骤S13，向上清液中加入缓冲液调节pH值至适量值以作为给出相溶液。其中，可以用添加氢氧化钠的磷酸盐缓冲液调节上清液的PH值至9-13。在一【具体实施方式】中，具体在步骤S2中，需要先准备附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜，具体准备步骤为:将中空纤维膜在室温下浸入含有阳离子载体有机溶液的中间相5-8min后取出。该阳离子载体可以选用aliguat336，其浓度范围可选为1%_20%。进一步地，有机溶剂的选择要求对水溶性寡肽有足够大的溶解度，以得到较高的萃取效率，在水中有较小的溶解度尽量减少在萃取过程中的损失，举例而言，有机溶剂可选用正辛醇、甲苯、二甲苯和邻苯二甲酸二丁酯中的任意一种。上述实施方式中，接收相溶液可选用添加盐酸的pH值为1-5、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水溶性寡肽的萃取方法，其特征在于，包括如下步骤：制备含水溶性寡肽的给出相溶液；将附着有阳离子载体中间相的中空纤维膜的一端热封，向所述中空纤维膜内缓慢注射接收相溶液，并热封所述中空纤维膜的另一端，制备成离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置；将所述离子载体辅助的溶剂棒微萃取装置转移至装有所述给出相溶液的容器中并振荡一段时间，进而把水溶性寡肽从所述给出相溶液萃取到接收相溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔淑芬，王金林，翁盼伟，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44