The invention discloses a method for corn DNA extraction and gene identification, which comprises the following steps: 1) drilling sites in the grain side, the endosperm powder samples were collected in weighing paper; 2) to a predetermined amount of endosperm powder samples were transferred to the 96 Kong Banzhong, the corn seed after drilling on the corresponding position of storage; 3) by alkali extraction DNA, adding 40 L NaOH to 96 0.1mol/L orifice of each sample in Kong Zhong, PCR instrument temperature is 99 DEG C for 14 minutes, 10 minutes at room temperature for 5, natural cooling, 6000g centrifugal 2min, adding 0.1mol/L HCl solution 40 L mix 6000g, centrifugal 5min. Transfer the supernatant from 60 L to 96 new Kong Banzhong in 20, C stable storage or for the PCR reaction in the reaction system of PCR in the follow-up; 4) PCR reaction system with 1 x PCRbuffer amplification buffer, PCR 5) after the completion of the reaction with the sample buffer, 10% polyacrylamide gel electrophoresis; 6 select the appropriate identification) maize genotypes, maize seed coating for subsequent planting.
【技术实现步骤摘要】
一种玉米籽粒DNA提取及基因型鉴定的方法
本专利技术涉及玉米籽粒DNA检测
，尤其涉及通过简易的方法提取玉米籽粒DNA、通过PCR进行基因型鉴定的快速无损的一种玉米籽粒DNA提取及基因型鉴定的方法。
技术介绍
玉米是重要的粮饲兼用作物，随着2010年玉米基因组测序的完成，玉米功能基因组学研究呈现突飞猛进的局面，许多控制玉米重要农艺性状的基因或位点相继被克隆和鉴定，为玉米分子育种提供了优良的基因资源。目前国外内利用分子标记辅助玉米育种已成功应用于抗病基因的标记、定位、抗虫转基因以及部分农艺性状等方面的研究。但目前国内分子标记辅助选择玉米育种与田间传统育种相结合方面仍是苗后田间大量取单株叶片，然后从单株叶片中提取DNA进行基因型检测，这种操作不仅步骤复杂，耗时时间长，而且效率低。而传统玉米单粒种子基因组DNA提取方法是将未发芽的种子粉碎或者直接从种子胚中提取DNA，这样种子遭到了不可逆的破坏，无法再进行种植；国内也有研究通过对玉米单粒种子进行切取部分胚乳取样，进行DNA提取，但切取的胚乳相对耗时较长，且耗力，此外没有进行粉碎，DNA效率有待提高。因此本研究通过采...
【技术保护点】
一种玉米籽粒DNA提取及基因型鉴定的方法，其特征是，包括以下步骤：1)在玉米籽粒的侧上部位打孔，获取玉米胚乳粉状物样品，将散落的胚乳粉状物样品收集在称量纸上；2)胚乳粉状物样品收集，待获得一定量的胚乳粉状物样品后，称量纸合拢，分别将预定量的胚乳粉状物样品转移到96孔板中，将钻孔后的玉米种子放在相应位置存储；3)通过碱法提取DNA，具体步骤是，完成胚乳粉状物样品收集后，向96孔板的每个样品孔中加入40μL 0.1mol/LNaOH，在PCR仪温度为99℃处理14min，室温放置5‑10min，然后自然冷却，6000g离心2min，加入0.1mol/LHCl溶液40μL，混匀，...
【技术特征摘要】
1.一种玉米籽粒DNA提取及基因型鉴定的方法，其特征是，包括以下步骤：1)在玉米籽粒的侧上部位打孔，获取玉米胚乳粉状物样品，将散落的胚乳粉状物样品收集在称量纸上；2)胚乳粉状物样品收集，待获得一定量的胚乳粉状物样品后，称量纸合拢，分别将预定量的胚乳粉状物样品转移到96孔板中，将钻孔后的玉米种子放在相应位置存储；3)通过碱法提取DNA，具体步骤是，完成胚乳粉状物样品收集后，向96孔板的每个样品孔中加入40μL0.1mol/LNaOH，在PCR仪温度为99℃处理14min，室温放置5-10min，然后自然冷却，6000g离心2min，加入0.1mol/LHCl溶液40μL，混匀，6000g离心5min，转移上清液60μL至新的96孔板中，在-20℃稳定储存或直接在后续的PCR反应体系中用于PCR反应；4)所述PCR反应体系中采用1×PCRbuffer扩增缓冲液，扩增缓冲液的成分为：10mMTris-HCl，pH8.3；50mMKCl；2.0mMMgCl2，150μMdNTPs，150pM引物，1UTaqDNA聚合酶，1.5μL上述提取的DNA溶液总反应体系为10μL；5)PCR反应完成后，加入适量的...
【专利技术属性】
技术研发人员：程文，丁照华，赵苏娴，王志武，卢增斌，齐世军，陈凯，
申请(专利权)人：山东省农业科学院玉米研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37
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