重组猪瘟E2蛋白及其亚单位疫苗的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了重组猪瘟E2蛋白及其亚单位疫苗的制备方法和应用，所述重组猪瘟E2蛋白的制备方法包括下列步骤：1)将猪瘟E2蛋白编码基因克隆到真核表达载体中得到含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞株中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；以及4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪瘟E2蛋白。本发明专利技术提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达1g/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。

Preparation and application of recombinant swine fever E2 protein and its subunit vaccine

The invention discloses a recombinant subunit vaccine of classical swine fever virus E2 protein and its preparation method and application method for preparing the recombinant E2 protein of CSFV comprises the following steps: 1) the CSFV E2 protein encoding gene was cloned into the eukaryotic expression plasmid containing E2 group was CSFV protein encoding gene of recombinant plasmid vector; 2) CHO cells were then transfected into containing CSFV E2 protein encoding gene; 3) through training, screening and domestication of 2) in CHO cells. The high expression cell line; and 4) 3) in the fermentation culture cells, purified to recombinant E2 protein of classical swine fever. The method provided by this invention can harvest target protein from cell culture supernatant, and its yield is as high as 1g/L. It not only shortens protein purification time and simplifies vaccine production steps, but also greatly reduces vaccine production cost.

【技术实现步骤摘要】
重组猪瘟E2蛋白及其亚单位疫苗的制备方法和应用
本专利技术涉及一种悬浮稳定高效表达猪瘟E2蛋白的CHO细胞株及构建、筛选该细胞株的方法和猪瘟E2蛋白亚单位疫苗的制备方法及应用，属于动物疫苗与兽用生物制品

技术介绍
猪瘟在欧洲称为古典猪瘟(ClassicalSwineFever,CSF)是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus,CSFV)引起的一种急性、热性、致死性疾病。猪瘟具有高度接触传染性、发病急、高热稽留和小血管壁变性引起广泛出血、梗塞和坏死等病变特征。家养和野生猪是其唯一的天然宿主。世界动物卫生组织(OIE)将其定为A类传染病，我国《动物防疫法》将其列为一类传染病。猪瘟是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属成员，为单链线状RNA病毒。病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有脆弱的纤突结构。CSFV基因组长约12.5kb，仅含有1个大的开放性阅读框(ORF)，此ORF编码约3898个氨基酸残基，分子量约438kDa的多聚蛋白。此多聚蛋白在翻译的同时和在翻译后经病毒与宿主细胞蛋白酶加工成12种成熟蛋白，依次为N本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组猪瘟E2蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括下列步骤：1)将密码子优化后的猪瘟E2蛋白编码基因克隆到真核表达载体中得到含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪瘟E2蛋白。

【技术特征摘要】
2016.08.01 CN 201610625392X1.一种重组猪瘟E2蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括下列步骤：1)将密码子优化后的猪瘟E2蛋白编码基因克隆到真核表达载体中得到含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪瘟E2蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪瘟E2蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述密码子优化后的猪瘟E2蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述真核表达载体为pEE6.4、pEE12.4、pGL4.13、pcDNA3.1。4.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱泓，吴有强，车影，吴素芳，查银河，
申请(专利权)人：浙江海隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33