通过miRNA let‑7b控制IGF2BP3基因表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过miRNA let‑7b控制IGF2BP3基因表达的方法，包括步骤：1)载体构建：使用如SEQ ID№1和2所述的扩增引物从鸡基因组中PCR扩增片段，通过酶切位点NotI与ApaI将扩增的片段连入真核表达载体pcDNA3.1，构建let‑7b过表达载体pcDNA‑EGFP‑pre‑let‑7b；2)成肌细胞的分离培养；3)转染。本发明专利技术提供的IGF2BP3基因表达的控制方法，通过将let‑7b过表达载体转染成肌细胞后，降低了IGF2BP3的蛋白质表达量，有效使得成肌细胞增殖数量呈现逐渐下降的趋势发展。

【技术实现步骤摘要】
通过miRNAlet-7b控制IGF2BP3基因表达的方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及通过miRNAlet-7b控制IGF2BP3基因表达的方法。
技术介绍
骨骼肌的生长发育过程涉及多信号途径、多基因表达及网络式调控，其过程很复杂。包括骨骼肌的细胞增殖、分化和凋亡等过程，受到多种细胞因子的调控。在不同的发育阶段，相关基因互相影响，借助于复杂的网络调控通路方式，共同维持肌肉的生长与分化。目前对骨骼肌发育的研究主要集中在蛋白编码基因，其中包含MADS同源盒蛋白、锌指蛋白和Wnt家族成员、基于碱性螺旋-环-螺旋(basichelix-loop-helix，bHLH)蛋白质家族的Myf5、MyoD、Mrf4和Myogenin等生肌调节因子(MyogenicRegulatoryFactors，MRFs)或肌源性分化因子(MyogenicDifferentiationFactors，MDFs)等基因，这些基因的表达对肌细胞的构成、分化和肌组织形态的构建起着特殊的作用。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约为22nt(18～25nt)的非编码单链小分子RNA，在动物体内普本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过miRNA let‑7b控制IGF2BP3基因表达的方法，包括以下步骤：1)载体构建：使用如SEQ ID №1和2所述的扩增引物从鸡基因组中PCR扩增片段，通过酶切位点NotI与ApaI将扩增的片段连入真核表达载体pcDNA3.1，构建let‑7b过表达载体pcDNA‑EGFP‑pre‑let‑7b；2)成肌细胞的分离培养：2‑1)取胚龄11E的鸡胚，用75％乙醇擦拭蛋壳消毒，镊子敲开气室，取出鸡胚；2‑2)用手术刀分离鸡胚腿部肌肉，放进含20％FBS的DMEM培养液中；2‑3)鸡胚腿部肌肉剔除血管、脂肪、结缔组织，用pH为7.4含有双抗的PBS清洗3次，随后用剪刀剪成肉糜状；2‑4)将肉...

【技术特征摘要】
1.通过miRNAlet-7b控制IGF2BP3基因表达的方法，包括以下步骤：1)载体构建：使用如SEQID№1和2所述的扩增引物从鸡基因组中PCR扩增片段，通过酶切位点NotI与ApaI将扩增的片段连入真核表达载体pcDNA3.1，构建let-7b过表达载体pcDNA-EGFP-pre-let-7b；2)成肌细胞的分离培养：2-1)取胚龄11E的鸡胚，用75％乙醇擦拭蛋壳消毒，镊子敲开气室，取出鸡胚；2-2)用手术刀分离鸡胚腿部肌肉，放进含20％FBS的DMEM培养液中；2-3)鸡胚腿部肌肉剔除血管、脂肪、结缔组织，用pH为7.4含有双抗的PBS清洗3次，随后用剪刀剪成肉糜状；2-4)将肉糜状的肌肉组织转移到50mL离心管中，涡旋1min，静置等待肌肉组织沉至管底，加入0.1％的胶原酶Ⅰ37℃消化30min，再加入0.25％胰酶37℃消化1h，随后加入含20％FBS的DMEM培养基终止消化，上清液用200目过滤筛过滤后转移，向过滤后的清液添加新的DMEM培养液重悬肌肉组织，涡旋振荡1min，重复3～5次；2-5)对过滤收集到的滤液进行1000r/min离心5min，弃上清；2-6)加入含15％FBS的DMEM培养液重悬得到的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林树茂，岳孝亭，张绮琼，郭金彪，陈狄冰，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44