一种基于线性化CRISPR‑CAS9慢病毒载体基因敲除试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR‑CAS9慢病毒载体的基因敲除试剂盒，该试剂盒包括线性化的CRISPR‑CAS9慢病毒载体和对应的T4连接酶及感受态细胞，其特征在于所述的线性化的CRISPR‑CAS9慢病毒载体由核酸内切酶处理的环状载体构成，所述的T4连接酶是优化的T4连接酶，所述的感受态细胞是具有抑制重组特性的Stbl3感受态。该试剂盒能直接进行CRISPR‑CAS9慢病毒载体的构建，其比国内外商品化试剂盒操作方便、且构建重组得速度快，可有效提高目前基于CRISPR‑CAS9慢病毒载体的构建效率，降低基因敲除的费用。

【技术实现步骤摘要】
一种基于线性化CRISPR-CAS9慢病毒载体基因敲除试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种研究用配制品，特别是用于基于CRISPR-CAS9慢病毒载体的基因敲除试剂盒。
技术介绍
基因修饰是目前生物领域的重要问题，近年来，基因组编辑技术的快速发展为生物学研究带来了新纪元。与传统的基因克隆技术不同，基因组编辑技术可直接在基因组上进行DNA序列的敲除、插人、定点突变以及组合编辑等，实现基因功能与调控元件的系统研究，在工业生物工程等方面具有广阔的应用前景。早期，基因组编辑技术主要利用同源重组介导的打靶技术，但由于效率较低，极大地限制了其应用。为解决这一难题，一系列人工核酸内切酶介导的基因组编辑技术被开发，可通过在基因组特定位置上形成DNA双链断裂，借助于细胞自身的修复系统如非同源末端连接或同源重组，从而实现在不同生物与细胞类型中有效的定点基因组编辑。目前，主要有4种不同的人工核酸内切酶已应用于基因组编辑：巨核酶技术、锌指核酸内切酶(ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)。与RNA靶向DNA内切酶Cas9、ZFN与TALEN均可通过蛋白一DNA相互作用识别基因组上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于CRISPR‑CAS9的基因重组试剂盒，该试剂盒包括CRISPR‑CAS9载体、T4连接酶及感受态细胞，其特征在于所述的CRISPR‑CAS9载体为线性CRISPR‑CAS9载体，优选为慢病毒载体、质粒载体或腺病毒载体。

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-CAS9的基因重组试剂盒，该试剂盒包括CRISPR-CAS9载体、T4连接酶及感受态细胞，其特征在于所述的CRISPR-CAS9载体为线性CRISPR-CAS9载体，优选为慢病毒载体、质粒载体或腺病毒载体。2.根据权利要求1所述的基因重组试剂盒，所述的线性CRISPR-CAS9载体通过以BsmBI酶酶切CRISPR-CAS9慢病毒环状载体获得，并通过琼脂糖凝胶进行回收；其中所述酶切的反应液中每50μl中CRISPR-CAS9慢病毒环状载体为2μg，BsmBI酶50U。3.根据权利要求1所述的基因重组试剂盒，所述的感受态细胞为Stbl3感受态细胞，优选为经过氯化钙处理的Stbl3感受态细胞。4.根据权利要求1所述的基因重组试剂盒，其中还包含T4连接酶缓冲液，T4连接酶的剂量为每10ng线性化CRISPR-CAS9载体配20UT4...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚新刚，郭颂欣，何世俊，刘叔文，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44