本发明专利技术涉及MIC‑1融合蛋白。更具体地，涉及包含融合蛋白的化合物，该融合蛋白包含经由肽连接体连接的在该融合蛋白的C端处的MIC‑1蛋白或其类似物和在该融合蛋白的N端处的人A1AT(A1AT)的功能变体。本发明专利技术的化合物具有MIC‑1活性。本发明专利技术还涉及包含这类化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物以及该化合物的医药用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)融合蛋白及其用途
本专利技术涉及α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)融合蛋白及其制药用途。序列表的援引并入名称为“序列表(SEQUENCELISTING)”的序列表创建于2015年12月21日，并且通过引用并入本文。背景巨噬细胞抑制性细胞因子-1(MIC-1)，也称为GDF-15和胎盘骨形态发生蛋白(PLAB)，是TGF-β超家族(参与细胞生长和分化的肽激素家族)的远缘成员。MIC-1以分子量为24.5kDa的富含半胱氨酸的同型二聚体形式循环。最初报告MIC-1在巨噬细胞中被包括IL-1b、TNF-α、IL-2和TGF-b在内的刺激物上调。还显示MIC-1可减少脂多糖诱导的TNF-α产生，并且基于这些资料提出MIC-1是一种抗炎性细胞因子。最近，一项研究在探索为何人类晚期癌症患者体重减轻并且他们显示体重减轻与MIC-1的循环水平相关。这些资料表明MIC-1调节体重。该假说在异种移植前列腺肿瘤细胞的小鼠中进行了检验，其中数据表明，升高的MIC-1水平与体重减轻和食物摄入减少相关，施用抗MIC-1抗体能够逆转这种效应。由于给小鼠施用重组MIC-1能够调节下丘脑神经肽Y和阿黑皮素原，因此提出MIC-1通过中枢机制调节食物摄入。此外，超表达MIC-1的转基因小鼠在用正常低脂肪饮食和高脂肪饮食喂养时均获得较低的体重和体脂肪。而且，与用类似的饮食喂养的野生型动物相比，分别用低脂肪和高脂肪饮食喂养的超表达MIC-1的转基因小鼠具有改善的葡萄糖耐量。天然MIC-1具有短半衰期，意味着用天然MIC-1进行的治疗需要每日给药以维持功效。US2012/0094356涉及人α-1-抗胰蛋白酶或其变体在与具有药学意义的蛋白质和肽融合中的用途。WO2005099746涉及通过施用MIC-1调节剂来调节食欲和/或体重的方法。概述本专利技术涉及开发包含通过居间肽连接体与MIC-1融合的N端融合配偶体的生物活性重组融合蛋白。所公开的融合蛋白集成了一系列有利特征，如改善的生产可行性、蛋白质稳定性、血浆半衰期和保持的融合蛋白生物学活性。在一方面，本专利技术提供包含融合蛋白的化合物，该融合蛋白包含经由肽连接体连接的在该融合蛋白的C端处的MIC-1蛋白或其类似物和在该融合蛋白的N端处的人α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)的功能变体。该肽连接体具有10至100个氨基酸的长度。在一方面，该肽连接体包含氨基酸序列[X-Ym]n，其中X为Asp或Glu；Y为Ala；m为2至4，且n至少为5。在一方面，本专利技术提供编码包含融合蛋白的化合物的多核苷酸分子，该融合蛋白包含经由肽连接体连接的在该融合蛋白的C端处的MIC-1蛋白或其类似物和在该融合蛋白的N端处的人A1AT的功能变体。在一方面，本专利技术提供包含本专利技术化合物或其药学上可接受的盐、酰胺或酯以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一方面，本专利技术提供用作药物的本专利技术化合物。在一方面，本专利技术提供用于例如通过减少食物摄入、减轻体重、抑制食欲和诱导饱腹感来治疗饮食失调如肥胖症的本专利技术化合物。在一方面，本专利技术提供用于治疗肥胖症的本专利技术化合物。在一方面，本专利技术化合物为MIC-1激动剂。在一方面，本专利技术化合物抑制食物摄入。在一方面，本专利技术化合物减轻体重。在一方面，本专利技术化合物具有比天然MIC-1的半衰期更长的半衰期。附图简述图1.A1AT-MIC-1二聚体融合蛋白的图示。A、B和C分别表示A1AT域、连接体区和MIC-1的相对位置。-SS-表示将两个A1AT-MIC-1单体连接在一起以形成功能性二聚体融合蛋白的链间二硫桥。详述本专利技术涉及包含MIC-1融合蛋白的化合物。在一方面，本专利技术涉及MIC-1融合蛋白。在一方面，本专利技术提供包含融合蛋白的化合物，该融合蛋白包含经由肽连接体连接的在该融合蛋白的C端处的MIC-1或其类似物和在该融合蛋白的N端处的人A1AT或其功能变体。该肽连接体具有10至100个氨基酸的长度。在一方面，该肽连接体包含氨基酸序列[X-Ym]n，其中X为Asp或Glu；Y为Ala；m为2至4，且n至少为5。本专利技术的融合蛋白策略将可溶、稳定的血浆蛋白质——人α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)——与天然MIC-1组合起来。人A1AT具有固有的特性，如高溶解度和稳定性，这使其有利于用作融合配偶体来改善表达产率且赋予MIC-1稳定性。作为融合配偶体的人A1AT还可通过显著的大小增加来延长MIC-1的血浆半衰期。本专利技术提供了包含血浆半衰期延长的MIC-1融合蛋白的化合物。在下文中，希腊字母可用其符号或相应的书面名称表示，例如：α＝alpha；β＝beta；ε＝epsilon；γ＝gamma；ω＝omega；等等。此外，希腊字母μ也可用“u”表示，例如在μl＝ul或μM＝uM中。MIC-1蛋白和类似物如本文所用的术语“MIC-1”意指巨噬细胞抑制性细胞因子-1(MIC-1)，也称为GDF-15和胎盘骨形态发生蛋白(PLAB)。全长野生型人MIC-1蛋白的序列可以从UNIPROT数据库以登录号Q99988获得。由308个氨基酸组成的前体蛋白包括信号肽(氨基酸1-29)、前肽(氨基酸30-196)和成熟蛋白(氨基酸197-308)。由112个氨基酸组成的成熟MIC-1蛋白以SEQIDNO：1的形式包括在本文中。成熟MIC-1含有九个半胱氨酸残基，这导致形成4个链内二硫键和一个链间二硫键，从而产生共价连接的24.5kDa同型二聚体。已经描述了对应于成熟蛋白(SEQIDNO：1)中的His6Asp的天然存在的突变。因此，野生型人MIC-1的具体实例为SEQIDNO：1的成熟MIC-1蛋白，具有氨基酸修饰His6Asp的SEQIDNO：1，以及以上提及的前肽和/或信号肽之后的任何这些序列。如本文所用的术语“MIC-1蛋白”是指SEQIDNO：1的人MIC-1蛋白或其类似物。具有SEQIDNO：1序列的蛋白质也可称为“天然”MIC-1或“野生型”MIC-1。如本文所用的术语“MIC-1类似物”或“MIC-1蛋白的类似物”是指这样的蛋白质或化合物，它是成熟MIC-1蛋白(SEQIDNO：1)的变体。在一方面，MIC-1类似物为成熟MIC-1蛋白(SEQIDNO：1)的功能变体。在本专利技术的一方面，MIC-1类似物表现出与天然MIC-1(SEQIDNO：1)有至少85％、90％或95％的序列同一性。在本专利技术的另一方面，相对于人天然MIC-1(SEQIDNO：1)，MIC-1类似物包含少于17个氨基酸修饰(置换、缺失、添加(包括插入)及其任何组合)。作为测定两种类似物之间序列同一性的方法的一个例子，比对His6AspMIC-1和天然MIC-1这两种肽。His6AspMIC-1类似物相对于天然MIC-1的序列同一性通过将减去比对的不同残基数目而得到的相同残基数目再除以天然MIC-1中的残基总数而得出。因此，在所述例子中，序列同一性为(112-1)/112。在本申请中通篇使用的术语“氨基酸修饰”以如下含义使用：与天然MIC-1(SEQIDNO：1)相比，对氨基酸的修饰。该修饰可以是氨基酸的缺失、氨基酸的添加、将一个氨基酸置换为另一氨基酸或共价连接至该肽的氨基酸的取代基的结果。置换。在一方面，氨基酸可通过保守本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含式(I)融合蛋白的化合物：A‑B‑C (I)，其中A为人A1AT或其功能变体；B为肽连接体，其中该肽连接体的长度为10至100个氨基酸，且C为MIC‑1蛋白或其类似物，并且其中A1AT或其功能变体的C端融合至所述肽连接体的N端，且所述肽连接体的C端融合至所述MIC‑1蛋白或其类似物的N端。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.22 EP 14199683.51.包含式(I)融合蛋白的化合物：A-B-C(I)，其中A为人A1AT或其功能变体；B为肽连接体，其中该肽连接体的长度为10至100个氨基酸，且C为MIC-1蛋白或其类似物，并且其中A1AT或其功能变体的C端融合至所述肽连接体的N端，且所述肽连接体的C端融合至所述MIC-1蛋白或其类似物的N端。2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述肽连接体包含氨基酸序列[X-Ym]n，其中X为Asp或Glu；Y为Ala；m为2至4；且n至少为5。3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中X为Glu。4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m为2至3并且n为5-12。5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n为7-12。6.根据权利要求2-5中任一项所述的化合物，其在所述肽连接体中包含1-4个Pro残基。7.根据权利要求6所述的化合物，其在覆盖所述连接体长度约20％-30％的...
【专利技术属性】
技术研发人员：AC肖，
申请(专利权)人：诺和诺德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK
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