【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及干细胞领域，如人类多能干细胞和干细胞衍生的细胞产物的领域。具体地，提供了从人类多能干细胞(hpsc)建立细胞库如未分化hpsc库和hpsc衍生的原料药和药物产品的方法。
技术介绍
1、使用hpsc治疗各种病状的前景似乎非常光明。随着人们不断努力使基于活细胞的治疗更接近市场，考虑大规模制备和生产设置变得越来越重要。对于某些适应症，每次治疗估计需要108个细胞。基于干细胞的产品的生产通常以hpsc的分化为起点。细胞系可以来源于早期人类胚胎或通过诱导体细胞的多能性而获得。然后培养所得细胞系以供扩增并建立细胞库，其中将细胞冷冻保存以供储存，直到它们经历进一步扩增和/或分化成特定细胞类型产物。
2、多年来，hpsc的冷冻保存已经取得了显著的改进。基本的冷冻保存原理源自其他哺乳动物细胞类型，其中的程序依赖于冷冻保存介质中的化学物质，如二糖蔗糖、麦芽糖、海藻糖以及其他含有和不含dmso的物质。
3、细胞死亡的主要原因不是低温下长期储存本身，而是细胞在玻璃化转变温度(tg)上发生的事件。除了诸如毒性、细胞收缩、渗透压不平衡等其他已知原因外，已知冷冻过程中的细胞内结晶和加温时的重结晶对细胞造成的损害最大。为了对抗这些对细胞、尤其是对hpsc有害的事件，已经开发了不同的冷冻保存方法(玻璃化、缓慢冷却、快速解冻等)和冷冻保存介质。
4、对于治疗性细胞的生产，细胞的长期稳定性和允许生成大型细胞库的方法对于成功至关重要。因此，本专利技术的目的是改进当前用于建立具有高细胞活力的细胞库的方法，同时符合对
技术实现思路
1、如上概述的目的通过本专利技术的方面来实现。另外，本专利技术还可以解决其他问题，这从示例性实施方案的公开内容中将会明显看出。
2、在本专利技术的第一方面，提供了建立细胞库的方法，其包括以下步骤：提供一批包含干细胞或干细胞衍生细胞和冷冻保存介质的细胞悬液，将该批细胞悬液维持在低于15℃的温度下，以及将该批细胞悬液中的一定量的细胞悬液转移到一个或多个储存容器中以建立细胞库，其中建立所述细胞库花费至少30分钟。本专利技术人已经认识到，通过用细胞填充许多储存容器如小瓶来建立大型细胞库需要延长的时间，在此期间细胞在冷冻保存介质中的活力显著降低。建立细胞库时同样如此，其中成批细胞悬液需要额外的准备时间。通过在建立细胞库的整个过程中将成批细胞悬液维持在低于15℃的温度下，每个小瓶的质量和细胞计数将得到提高。
3、在另一方面，提供了用于在制备细胞库期间冷却一批细胞悬液的冷却设备，其包括壳体，所述壳体包括外壁、适于接纳制冷剂的第一隔室和适于容纳装有该批细胞悬液的容器的第二隔室，其中所述第一隔室和第二隔室由导热元件分隔开，由此当将所述制冷剂装入所述第一隔室中并将装有该批细胞悬液的容器装入所述第二隔室中时，所述制冷剂能够冷却该批细胞悬液。本专利技术人设计了适合在建立细胞库时将一批细胞悬液维持在低于15℃的温度下的冷却设备，其中使用该冷却设备有利于遵守gccp和cgmp的严格要求。该冷却设备被设计成在操作过程中不生成任何颗粒，因此该设备可在a级洁净室区域分类(或者iso指定5)内进行操作，符合以下要求：eu gmp指南附件1：无菌药用产品的制造，和美国食品药品管理局(fda)行业指南：通过现行良好生产规范无菌加工生产的无菌药物产品。
4、因此，本专利技术的另一方面涉及所述冷却设备用于从一批细胞悬液制备细胞库的用途，其包括将该批细胞悬液的温度维持在低于15℃，优选0-12℃，更优选0-10℃，更优选0-8℃，更优选2-8℃，更优选2-6℃，更优选3-5℃，甚至更优选约4℃。
5、在最后一方面，提供了冷却一批细胞悬液的方法，其包括以下步骤：提供如上所述的冷却设备，将制冷剂装入所述冷却设备的第一隔室中，其中所述制冷剂的温度适合将该批细胞悬液的温度维持在低于15℃，将包含该批细胞悬液的瓶装入所述冷却设备的第二隔室中，以及将该批细胞悬液的温度维持在低于15℃。
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1.建立细胞库的方法，其包括以下步骤：
2.根据前述权利要求所述的方法，其中将一定量的所述批细胞悬液转移到至少10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000个储存容器。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在低于15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃或4℃，优选低于12℃，更优选低于8℃。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在0-15℃，优选0-12℃，更优选0-10℃，更优选0-8℃，更优选2-8℃，更优选2-6℃，更优选3-5℃，甚至更优选约4℃。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在所述细胞悬液的冰点以上。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在高于0℃、1℃、2℃或3℃。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中建立所述细胞库花费至少一小时、至少两小时或至少三小时。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括以下附加
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，转移到每个储存容器中的细胞悬液的量为0.25至1000ml。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述批细胞悬液的体积为至少25ml、50ml、100ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml、700ml、800ml、900ml或1L。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干细胞是多能干细胞(PSC)并且/或者其中所述干细胞衍生细胞是β样细胞、心肌细胞或RPE细胞。
12.用于在制备细胞库期间冷却一批细胞悬液的冷却设备(100)，其包括：壳体(101)，该壳体(101)包括外壁(102)、适于接纳制冷剂的第一隔室(104，105)和适于容纳装有该批细胞悬液的容器的第二隔室(103)，其中所述第一隔室(104，105)和第二隔室(103)由导热元件(106，107)分隔开，由此当将所述制冷剂装入所述第一隔室(104，105)中并将装有该批细胞悬液的容器装入所述第二隔室(103)中时，所述制冷剂能够冷却该批细胞悬液。
13.冷却一批细胞悬液的方法，其包括以下步骤：
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述批细胞悬液的温度维持在0-15℃，优选0-12℃，优选0-10℃，优选0-8℃，更优选2-8℃，更优选2-6℃，更优选3-5℃，甚至更优选约4℃。
15.根据权利要求12所述的冷却设备用于从一批细胞悬液制备细胞库的用途，其包括将该批细胞悬液的温度维持在低于15℃，优选0-12℃，优选0-10℃，更优选0-8℃，更优选2-8℃，更优选2-6℃，更优选3-5℃，甚至更优选约4℃。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.建立细胞库的方法，其包括以下步骤：
2.根据前述权利要求所述的方法，其中将一定量的所述批细胞悬液转移到至少10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000个储存容器。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在低于15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃或4℃，优选低于12℃，更优选低于8℃。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在0-15℃，优选0-12℃，更优选0-10℃，更优选0-8℃，更优选2-8℃，更优选2-6℃，更优选3-5℃，甚至更优选约4℃。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在所述细胞悬液的冰点以上。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述温度维持在高于0℃、1℃、2℃或3℃。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中建立所述细胞库花费至少一小时、至少两小时或至少三小时。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括以下附加步骤：
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，转移到每个储存容器中的细胞悬液的量为0.25至1000ml。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述批细胞悬液的体积为至少25ml、50ml、100ml、2...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·普拉迪普，J·詹森，M·W·克里斯琴森，A·玛格祖布，
申请(专利权)人：诺和诺德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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