能够抑制至少一种抗生素的杂合蛋白分子和包含所述杂合蛋白分子的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及杂合蛋白分子，其包含能够抑制至少一种抗生素之活性的至少两种蛋白质，所述蛋白质各自具有不同的生物化学特性并且彼此结合。所述杂合蛋白分子抑制至少一种抗生素的活性以降低抗生素的肠副作用，例如由抗生素引起的严重腹泻和继发于肠胃外抗生素治疗的医院内感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】能够抑制至少一种抗生素的杂合蛋白分子和包含所述杂合蛋白分子的药物组合物
本专利技术涉及防止抗生素继发于其对胃肠菌群的作用和抗性细菌菌株的选择的不良效应。
技术介绍
肝可将很多肠胃外施用的抗生素以活性的、未经修饰的活性形式或作为活性代谢物排泄到胆汁中。这些抗生素可在回肠内被重吸收，并且由此通过门静脉返回到肝以最终被排出。该循环被称为肠肝循环。当以未经修饰的活性形式或作为活性代谢物排泄到消化道中时，这些抗生素可对形成肠和结肠的正常微生物菌群的细菌群施加选择压力。这样的微生物选择具有两个主要后果：由抗生素诱发的急性腹泻的发生以及抗性细菌菌株的选择和播散。在用肠胃外广谱抗生素时常常观察到发生由抗生素引起的急性腹泻。频率和严重程度由多种因素决定，包括治疗的持续时间、所使用抗生素的活性谱和剂量(Aires，Kohler等，1999)。因此，在以下中观察到由抗生素诱发的急性腹泻：接受阿莫西林抗生素治疗的所有患者中的约5％至10％、阿莫西林-克拉维酸联合的10％至25％以及第三代头孢菌素、氟喹诺酮、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素和四环素类的2％至5％(Gilbert，1994；Bartlett，1996，Hogenauer，Hammer等，1998；Wistrom，Norrby等，2001)。尽管由抗生素引起的急性腹泻中的大多数病例是良性的，但是在所有病例中有10％至20％可伴随有严重的结肠炎。在大部分病例中，该结肠炎继发于对大部分抗生素具有抗性的艰难梭菌(Clostridiumdifficile)(一种形成芽孢的革兰氏阳性厌氧菌)的选择(Gerding，1989；Anand，Bashey等，1994)。该细菌的致病性与毒素A和毒素B二者的产生有关。这些毒素诱发强烈的炎性反应且在固有层(laminapropria)内募集中性粒细胞，并且在最严重的形式中，诱发假膜性结肠炎，之所以如此命名是由于结肠直肠黏膜的外观(Kelly，Pothoulakis等，1994)。假膜性结肠炎的死亡率较高，尤其是在幼儿和年长者中。在2010年，在美国这些结肠炎导致超过7200例的死亡(Sherry，Murphy等，2012)。另一些病原体也可导致由抗生素诱发的不同严重程度的急性腹泻，例如产酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)、A型产气荚膜梭菌(ClostridiumperfringenstypeA)、金黄色葡萄球菌(Straphylococcusaureus)和白念珠菌(Candidaalbicans)(Sparks，Carman等，2001；Gorkiewicz，2009)。抗生素对肠微生物菌群施加的选择压力还导致抗性细菌在环境中扩散。医院内由这些微生物引起的感染(还称为医院内感染)中的大多数在重症监护室和外科手术室中是特别常见且严重的。特别地，其涉及导管感染、尿路感染、肺病和术后感染。其主要由革兰氏阴性肠杆菌、凝固酶阳性或阴性葡萄球菌、肠球菌和白念珠菌引起(Richards，Edwards等，2000)。医院内感染是死亡的一个重要原因并且是主要的健康问题。继发于广泛使用抗生素治疗的抗性细菌出现使这些医院内感染的治疗变得复杂并且代表一项相当大的社会成本。在欧洲，医院内感染直接导致每年约25,000例的死亡并且导致每年在医疗保健和生产力损失方面的额外成本估计超过15亿欧元(ECDC/EMEAJointWorkingGroup，2009)。在美国，每年约170万例的医院内感染直接或间接导致近99,000例死亡(Klevens，Edwards等，2007)。抗生素(特别是四环素类)在兽医学中广泛用于治疗家畜和宠物。另外，在美国允许使用这些抗生素来促进家畜的生长和增重。当然，这一密集使用参与了抗性细菌在环境中的播散(InstituteofMedicine，1988；CommitteeonDrugUseinFoodAnimals，1999；GeorgetownUniversityCenterforFoodandNutritionPolicy，1999)。β-内酰胺类β-内酰胺类抑制参与形成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁的基本组分肽聚糖的转肽酶和转糖基酶(Walsh，2000)。β-内酰胺类具有β-内酰胺环以及修饰其药物动力学特性和其抗微生物谱的效力的可变侧链(例如，第1、2、3和4代头孢菌素)(Turner，2005)。该类别包括青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和单环β-内酰胺类。β-内酰胺类抗生素是最常开处方的抗微生物剂。β-内酰胺类抗生素在临床上广泛用于不同类型的感染(例如，耳感染、呼吸道感染和肠胃感染)。数种施用途径均可使用，但是对于通常在医院内治疗的严重脓毒症而言优选肠胃外途径。对于严重感染，通常将β-内酰胺类抗生素与其他种类的抗生素联合，例如在非典型肺炎的情况下阿莫西林/克拉维酸与大环内酯类联合。β-内酰胺类抗生素的广泛使用促进细菌抗性的出现。主要机理是获得β-内酰胺酶，其是能够水解β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺核心的酶。到目前为止，存在数百种或甚至数千种不同的β-内酰胺酶，其根据序列同源性(底物和抑制剂)可分为数个家族。通常根据这些酶的优先底物对其进行分类(青霉素酶、头孢菌素酶、亚胺培南酶(imipénèmase)等)。此外，β-内酰胺酶已经进化变得对抑制剂具有抗性或拓宽其对最新的β-内酰胺类的作用谱(Turner，2005；Drawz和Bonomo，2010)。这些抑制剂(克拉维酸、舒巴坦等)通常与β-内酰胺类同时施用，并且与细菌β-内酰胺酶不可逆地结合。Ambler的分类举例说明了这些β-内酰胺酶的巨大多样性。β-内酰胺酶根据其核苷酸序列分为四个家族(A、B、C和D)(Ambler，1980)。A组、C组和D组具有催化性丝氨酸而B组包括锌依赖性金属β-内酰胺酶。A类β-内酰胺酶包括数个亚家族，包括TEM型酶(Bush和Jacoby，1997)，其是对青霉素和氨基青霉素类(例如氨苄西林、阿莫西林、巴氨西林)具有抗性的祖先酶。TEM-36是一种IR-TEM，即抗克拉维酸的β-内酰胺酶(Zhou，Bordon等，1994；Henquell，Chanal等，1995；Chaibi，Sirot等，1999)；在LaheyClinic网站(http：//www.lahey.org/Studies/temtable.asp)上的TEM-36或IRT-7标识符。克拉维酸在临床上与阿莫西林联合使用以拓宽对已经获得典型β-内酰胺酶(TEM-1)的病菌的抗生谱。在选择压力下，TEM通过突变数个目前已充分表征的氨基酸而逐渐变得对抑制剂具有抗性(Chaibi，Sirot等，1999)。在A类β-内酰胺酶中，我们还发现了头孢噻肟酶(cefotaximase)，其是由TEM进化而来将其谱拓宽至第三代头孢菌素的酶(Salverda，DeVisser等，2010)。例如，CTX-M16酶(该蛋白质的Genbank标识符：AAK32961)相较于不同的青霉素类优先水解头孢噻肟(Bonnet，Dutour等，2001)。由基因blaZ编码的PC1酶(该蛋白质的UniProtKB/Swiss-Prot标识符：P00807)是具有催化性丝氨酸的A本文档来自技高网...

【技术保护点】
杂合蛋白分子，其包含抑制至少一种抗生素的活性的结合在一起的两种酶，所述酶中的一种为β‑内酰胺酶并且所述酶中的另一种为选自以下的酶：β‑内酰胺酶、抑制氨基糖苷类的酶、抑制氟喹诺酮类的酶、抑制大环内酯类的酶、抑制四环素类的酶或抑制林可酰胺类的酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.16 FR 14599351.杂合蛋白分子，其包含抑制至少一种抗生素的活性的结合在一起的两种酶，所述酶中的一种为β-内酰胺酶并且所述酶中的另一种为选自以下的酶：β-内酰胺酶、抑制氨基糖苷类的酶、抑制氟喹诺酮类的酶、抑制大环内酯类的酶、抑制四环素类的酶或抑制林可酰胺类的酶。2.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述杂合蛋白分子包含连接在一起的两种β-内酰胺酶。3.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述抑制氨基糖苷类的酶为磷酸转移酶、核苷酸基转移酶或乙酰转移酶。4.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述抑制氟喹诺酮类的酶为氨基糖苷N-乙酰转移酶。5.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述抑制大环内酯类的酶为红霉素酯酶或红霉素磷酸转移酶。6.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述抑制四环素类的酶为NADPH依赖性四环素氧化还原酶。7.根据权利要求1所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述抑制林可酰胺类的酶为林可霉素核苷酸基转移酶。8.根据前述权利要求中任一项所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述酶中至少一种的序列与SEQID1具有至少40％的序列同源性。9.根据前述权利要求中任一项所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述酶中至少一种的序列与SEQID2具有至少40％的序列同源性。10.根据前述权利要求中任一项所述的杂合蛋白分子，其特征在于所述酶中至...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·迪普雷，马蒂厄·许，菲利普·雅伊，
申请(专利权)人：阿祖克斯公司，
类型：发明
国别省市：法国,FR