精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的MRNA疗法制造技术

本发明专利技术除了其它方面以外提供了治疗精氨基琥珀酸合成酶缺乏症(ASD)的方法，所述方法包括以有效剂量和施用间隔给需要治疗的受试者施用包含编码精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的组合物，使得ASD的至少一种症状或特征在强度、严重程度或频率上降低或延缓发作。在一些实施例中，所述mRNA包封在脂质体内，所述脂质体包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质以及一种或多种PEG改性脂质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本专利申请要求2013年10月22日提交的美国临时申请No.61/894,294的优先权，其公开内容据此以引用方式并入。
技术介绍
精氨基琥珀酸合成酶缺乏症(ASD)是一种常染色体隐性代谢遗传性障碍，其特征在于精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的基因中发生突变，从而影响其结合到瓜氨酸、天冬氨酸盐和其它分子的能力。ASS蛋白中的缺陷破坏尿素循环并阻止肝脏将多余的氮适当地处理成尿素。尿素循环中累积的氨和其它副产物(诸如瓜氨酸)是毒性的，并且当出现在生命的早期时，可导致诸如精神不振(嗜睡)、食欲不振、呕吐、痉挛和意识丧失的症状。目前，对于这种疾病没有治愈方法，并且护理标准是通过饮食管理，将含大量蛋白质的食物降至最小程度，以及精氨酸和乙酸苯酯的膳食补充剂。
技术实现思路
本专利技术除了其它方面以外提供了基于mRNA疗法治疗精氨基琥珀酸合成酶缺乏症(ASD)的改进的方法和组合物。本专利技术涵盖以下观察结果：施用包封在脂质体内的编码人ASS1蛋白的mRNA导致高效持久的体内蛋白生成以及临床相关的疾病标志物血浆氨水平成功降低。在一个方面，本专利技术提供了治疗ASD的方法，包括以有效剂量和施用间隔给需要治疗的受试者施用包含编码精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的组合物，使得ASD的至少一种症状或特征在强度、严重程度或频率上降低或延缓发作。在一些实施例中，mRNA包封在脂质体内。在另一方面，本专利技术提供了用于治疗ASD的组合物，其包含以有效剂量包封在脂质体内的编码ASS1的mRNA。在一些实施例中，合适的脂质体包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质以及一种或多种PEG改性脂质。在一些实施例中，一种或多种阳离子脂质选自C12-200、MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、cKK-E12、ICE(基于咪唑的)、HGT5000、HGT5001、DODAC、DDAB、DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、HGT4003以及它们的组合。在一些实施例中，一种或多种阳离子脂质包括式I-c1-a的化合物：或其药学上可接受的盐，其中：每个R2独立地为氢或C1-3烷基；每个q独立地为2至6；每个R'独立地为氢或C1-3烷基；并且每个RL独立地为C8-12烷基。在一些实施例中，一种或多种阳离子脂质包括cKK-E12：在一些实施例中，适用于本专利技术的一种或多种非阳离子脂质选自DSPC(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DPPC(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DOPE(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPC(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)、DPPE(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DMPE(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPG(,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-(1'-rac-甘油))以及它们的组合。在一些实施例中，一种或多种基于胆固醇的脂质选自胆固醇、PEG化胆固醇和DC-Chol(N,N-二甲基-N-乙基酰胺基胆固醇)、1,4-二(3-N-油烯基氨基-丙基)哌嗪。在一些实施例中，脂质体还包含一种或多种PEG改性脂质。在一些实施例中，一种或多种PEG改性脂质包含长度为至多5kDa的聚乙二醇链，该聚乙二醇链共价附接到具有C6-C20长度烷基链的脂质。在一些实施例中，PEG改性脂质是衍生化神经酰胺，诸如N-辛酰基-鞘氨醇-1-[琥珀酰基(甲氧基聚乙二醇)-2000]。在一些实施例中，PEG改性或PEG化脂质为PEG化胆固醇或二肉豆蔻酰基甘油(DMG)-PEG-2K。在一些实施例中，合适的脂质体包含选自以下的组合：cKK-E12、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；C12-200、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；HGT4003、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；或ICE、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)占脂质体的约30-60摩尔％(例如，约30-55摩尔％、约30-50摩尔％、约30-45摩尔％、约30-40摩尔％、约35-50摩尔％、约35-45摩尔％或约35-40摩尔％)。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)占脂质体的约30摩尔％、约35摩尔％、约40摩尔％、约45摩尔％、约50摩尔％、约55摩尔％或约60摩尔％)。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非阳离子脂质(例如，DOPE)比基于胆固醇的脂质(例如，胆固醇)比PEG化脂质(例如，DMG-PEG2K)的比率可分别在约30-60:25-35:20-30:1-15之间。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非阳离子脂质(例如，DOPE)比基于胆固醇的脂质(例如，胆固醇)比PEG化脂质(例如，DMG-PEG2K)的比率分别为大约40:30:20:10。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非阳离子脂质(例如，DOPE)比基于胆固醇的脂质(例如，胆固醇)比PEG化脂质(例如，DMG-PEG2K)的比率分别为大约40:30:25:5。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非阳离子脂质(例如，DOPE)比基于胆固醇的脂质(例如，胆固醇)比PEG化脂质(例如，DMG-PEG2K)的比率分别为大约40:32:25:3。在一些实施例中，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非阳离子脂质(例如，DOPE)比基于胆固醇的脂质(例如，胆固醇)比PEG化脂质(例如，DMG-PEG2K)的比率分别为大约50:25:20:5。在一些实施例中，通过脂质体颗粒的最大直径的长度确定脂质体的尺寸。在一些实施例中，合适的脂质体的尺寸小于约500nm、400nm、300nm、250nm、200nm、150nm、100nm、75nm或50nm。在一些实施例中，合适的脂质体的尺寸小于约100nm、90nm、80nm、70nm或60nm。在一些实施例中，以约0.1–5.0mg/kg体重范围内的剂量施用mRNA，例如约0.1–4.5、0.1–4.0、0.1–3.5、0.1–3.0、0.1–2.5、0.1–2.0、0.1–1.5、0.1–1.0、0.1-0.5、0.1-0.3、0.3–5.0、0.3-4.5、0.3–4.0、0.3–3.5、0.3–3.0、0.3–2.5、0.3–2.0、0.3–1.5、0.3–1.0、0.3-0.5、0.5–5.0、0.5-4.5、0.5–4.0、0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗精氨基琥珀酸合成酶缺乏症(ASD)的方法，所述方法包括以有效剂量和施用间隔给需要治疗的受试者施用包含编码精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的组合物，使得ASD的至少一种症状或特征在强度、严重程度或频率上降低或延缓发作。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.22 US 61/894,2941.一种治疗精氨基琥珀酸合成酶缺乏症(ASD)的方法，所述方法包括以有效剂量和施用间隔给需要治疗的受试者施用包含编码精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的组合物，使得ASD的至少一种症状或特征在强度、严重程度或频率上降低或延缓发作。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述mRNA包封在脂质体内。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述脂质体包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质以及一种或多种PEG改性脂质。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质包括选自C12-200、MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、cKK-E12、ICE(基于咪唑的)、HGT5000、HGT5001、DODAC、DDAB、DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、HGT4003以及它们的组合的阳离子脂质。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质包括cKK-E12：6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种非阳离子脂质选自DSPC(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DPPC(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DOPE(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPC(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)、DPPE(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DMPE(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPG(,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-(1'-rac-甘油))。7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其中所述一种或多种基于胆固醇的脂质为胆固醇和/或PEG化胆固醇。8.根据权利要求3-7中任一项所述的方法，其中所述一种或多种PEG改性脂质包含长度为至多5kDa的聚乙二醇链，所述聚乙二醇链共价附接到具有C6-C20长度烷基链的脂质。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述阳离子脂质占所述脂质体的约30-50重量％。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述阳离子脂质占所述脂质体的约40重量％。11.根据权利要求3-10中任一项所述的方法，其中阳离子脂质:非阳离子脂质:胆固醇:PEG化脂质的摩尔比为大约40:30:20:10。12.根据权利要求3-10中任一项所述的方法，其中阳离子脂质:非阳离子脂质:胆固醇:PEG化脂质的重量比为大约40:30:25:5。13.根据权利要求3-10中任一项所述的方法，其中阳离子脂质:非阳离子脂质:胆固醇:PEG化脂质的重量比为大约40:32:25:3。14.根据权利要求2-13中任一项所述的方法，其中所述脂质体包含选自以下的组合：cKK-E12、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；C12-200、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；HGT4003、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；或ICE、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K。15.根据权利要求2-14中任一项所述的方法，其中所述脂质体的尺寸小于约100nm。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约0.1–5.0mg/kg体重范围内的有效剂量施用所述mRNA。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约0.1–3.0mg/kg体重范围内的有效剂量施用所述mRNA。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约0.1–1.0mg/kg体重范围内的有效剂量施用所述mRNA。19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中经静脉内施用所述组合物。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物每周施用一次。21.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述组合物每周施用两次。22.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述组合物每月施用两次。23.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述组合物每月施用一次。24.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述组合物每14天施用一次。25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ASS1蛋白在肝脏中表达。26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致ASS1蛋白的表达水平处于或高于约100ng/mg所述肝脏中的总蛋白。27.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致血清ASS1蛋白水平升高。28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致所述受试者的瓜氨酸水平相比于治疗前的基线瓜氨酸水平降低。29.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致所述受试者的氨水平相比于治疗前的基线氨水平降低。30.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致所述血浆中的氨水平降低至约50μmol/L或更低。31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述组合物导致所述血浆中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈特莱因，F·德罗莎，L·史密斯，
申请(专利权)人：夏尔人类遗传性治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US