在生产宿主中同时整合抗体/蛋白的性能和表达的筛选和演化的方法技术

本发明专利技术提供了在真核宿主中整合治疗性蛋白和抗体的产生和/或筛选、演化和表达的方法，以实现在单一系统中生产。在同一真核宿主系统中产生、优化并生产治疗性蛋白，包括抗体。本发明专利技术公开的综合性整合的抗体优化系统(CIAO！

Methods for screening and evolving antibody / protein properties and expression in a production host

The present invention provides methods for integrating the production and / or screening, evolution, and expression of therapeutic proteins and antibodies in eukaryotic hosts to achieve production in a single system. Produce, optimize, and produce therapeutic proteins in the same eukaryotic host system, including antibodies. The present invention discloses an integrated integrated antibody optimization system (CIAO)!

【技术实现步骤摘要】
在生产宿主中同时整合抗体/蛋白的性能和表达的筛选和演化的方法本申请要求于2009年7月17日提交的美国临时申请第61/271,168号的优先权；本申请是于申请日为2010年07月16日的中国专利申请第201080038839.4号的分案申请。本申请是以一家美国国有公司BioAtla，LLC的名义请求指定除了美国以外的所有国家，及以一位美国公民JayMiltonShort的名义请求仅指定美国，于2010年7月16日提交的PCT国际专利申请，并要求于2009年7月17日提交的美国临时申请第61/271,168号的优先权，其全部内容通过参考并入于此。
在一个具体方面，本专利技术涉及蛋白和通过蛋白演化优化蛋白。使用相同的遗传系统，在同一宿主中发现、演化和生产治疗性蛋白药物。
技术介绍
已设计、开发和实施了能产生候选治疗性蛋白分子的多种抗体和其它蛋白系统。最近，已开发出多种演化系统以改善蛋白的功能。另外，已开发出用于高产量生产治疗用抗体和其它蛋白的哺乳动物表达系统。迄今为止，还没有研究组开发出一种系统，使得能在同一高效哺乳动物表达系统中生成、演化抗体或蛋白，并生产/制备蛋白。使用细菌噬菌体展示本文档来自技高网...

【技术保护点】
在真核细胞生产宿主中演化和生产人类蛋白的方法，所述方法包括：a.在所述真核细胞生产宿主中生成人类蛋白库；b.从所述库中筛选出具有至少一种预定属性、特性或活性的库；c.从该库中筛选出具有至少一种预定属性、特性或活性的模板人类蛋白；d.在所述真核细胞生产宿主中演化所述模板人类蛋白，以产生一组突变人类蛋白；e.从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的人类蛋白，并筛选出改变的表达型；f.从该组突变人类蛋白中筛选出(1)具有优化的至少一种预定的属性、特性或活性以及(2)与所述模板人类蛋白相比，表达改变的增强型突变人类蛋白；以及g.在与生成步骤(a)中相同的真核细胞生产宿主中生产所述...

【技术特征摘要】
2009.07.17 US 61/271,1681.在真核细胞生产宿主中演化和生产人类蛋白的方法，所述方法包括：a.在所述真核细胞生产宿主中生成人类蛋白库；b.从所述库中筛选出具有至少一种预定属性、特性或活性的库；c.从该库中筛选出具有至少一种预定属性、特性或活性的模板人类蛋白；d.在所述真核细胞生产宿主中演化所述模板人类蛋白，以产生一组突变人类蛋白；e.从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的人类蛋白，并筛选出改变的表达型；f.从该组突变人类蛋白中筛选出(1)具有优化的至少一种预定的属性、特性或活性以及(2)与所述模板人类蛋白相比，表达改变的增强型突变人类蛋白；以及g.在与生成步骤(a)中相同的真核细胞生产宿主中生产所述人类蛋白，包括表达所述增强型突变人类蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达改变是指表达提高。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述演化步骤包括下组之一：综合性定位演化(CPE)；综合性定位插入演化(CPI)；综合性定位缺失演化(CPD)；综合性定位演化(CPE)，然后是组合蛋白合成(CPS)；综合性定位缺失演化(CPD)及后续的组合蛋白合成(CPS)；或综合性定位缺失演化(CPD)及后续的组合蛋白合成(CPS)。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述的人类蛋白是抗体。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述的抗体为全长抗体。6.根据权利要求5所述的方法，其中筛选步骤(e)中所述的至少一种预定的属性、特性或活性包括，与所述模板抗体相比，(1)筛选出沉默突变以及(2)筛选出错义突变中的一种或多种。7.根据权利要求5所述的方法，其中与所述模板人类抗体相比，在增强型突变人类抗体中，选自Fc和Fv、框架区、以及一种或多种互补决定区(CDR)中的一种或多种是经修饰的。8.根据权利要求1所述的方法，其中筛选步骤(e)包括从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的人类蛋白，并同时筛选改变的表达型。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类蛋白选自酶细胞因子、受体、DNA结合蛋白、螯合剂或激素。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述演化步骤包括，采用细胞表面展示技术在真核细胞生产宿主中演化所述模板人类蛋白，以生产一组突变人类蛋白。11.根据权利要求5所述的方法，其中所述演化步骤包括，采用细胞表面展示技术在真核细胞生产宿主中演化所述模板人类蛋白，以生产一组突变人类蛋白。12.在真核细胞生产宿主中演化出表达提高的人类蛋白并生产人类蛋白的方法，所述方法包括：a.筛选出用于演化的模板人类蛋白；b.在生产宿主中演化所述模板人类蛋白，包括生成编码所述模板人类蛋白的突变密码子，以在所述真核细胞生产宿主中产生一组突变人类蛋白；c.从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定属性、特性或活性的人类蛋白，并筛选出与所述模板人类蛋白相比，表达增强的人类蛋白；d.从该组突变人类蛋白中筛选出(1)保留或优化了至少一种预定的属性、特性或活性，且(2)与所述模板人类蛋白相比表达增强的增强型突变人类蛋白；以及e.生产所述增强型突变人类蛋白，包括，在与演化步骤中相同的真核细胞生产宿主中表达所述增强型突变人类蛋白。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述增强型突变人类蛋白的突变密码子产生至少一种沉默突变和/或错义突变。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述增强型突变人类蛋白的突变密码子产生至少一种沉默突变。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述模板人类蛋白是经过批准的处方治疗性蛋白药物，且所述增强型突变人类蛋白是生物仿制药。16.根据权利要求12所述的方法，其中所述筛选步骤(d)包括从该组突变人类蛋白中筛选出(1)具有优化的至少一种预定的属性、特性或活性，且(2)与所述模板人类蛋白相比，表达增强的增强型突变人类蛋白。17.鉴定和生产目标人类蛋白的方法，所述方法包括：a.采用蛋白细胞表面展示技术在真核细胞生产宿主中演化模板人类蛋白，以生成人类蛋白库；b.从所述库中筛选具有至少一种预定的属性、特性或活性的库；c.从该库中鉴定具有至少一种预定的属性、特性或活性的目标人类蛋白；以及d.在与演化步骤中相同的真核细胞生产宿主中表达所述目标人类蛋白。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述目标人类蛋白是抗体。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述抗体是全长抗体。20.在为真核细胞生产宿主的生产宿主中演化人类蛋白的方法，所述方法包括：a.在所述真核细胞生产宿主中演化模板人类蛋白，以产生一组突变人类蛋白；b.从该组突变的子代蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的蛋白；c.从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的增强型突变人类蛋白；d.生产所述增强型突变人类蛋白，包括在与演化步骤(a)中使用的相同的真核细胞生产宿主中表达所述增强型突变人类蛋白。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述筛选步骤(c)进一步包括：从该组突变人类蛋白中筛选出(1)与所述模板人类蛋白相比，具有优化的至少一种预定的属性、特性或活性，且(2)与所述模板人类蛋白相比，表达改变的增强型突变人类蛋白。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述表达改变是指表达增强。23.在为真核细胞生产宿主的细胞生产宿主中演化并生产人类蛋白的方法，所述方法包括：a.在所述真核细胞生产宿主中演化模板人类蛋白，以产生一组突变人类蛋白；b.从该组突变人类蛋白中筛选出具有至少一种预定的属性、特性或活性的人类蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰·米尔顿·谢特，
申请(专利权)人：生物蛋白有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US