本发明专利技术涉及生物医学技术领域，是一种抗肠道病毒71型感染的新靶点及应用。本发明专利技术以人脑微血管内皮细胞(HBMEC)作为靶细胞，采用RNA干扰技术下调靶细胞宿主蛋白的表达，来寻找可有效抑制EV71感染人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的宿主因子，从而保护血脑屏障的功能，预防病毒穿过血脑屏障感染中枢神经系统。本发明专利技术通过实验发现胚胎FYN相关底物EFS(Embryonal FYN-associated substrate)分子在EV71感染HBMEC中发挥着重要的作用，下调EFS的表达，能明显抑制EV71的感染。本发明专利技术提供了EFS在制备预防或治疗肠道病毒71型感染药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及抗肠道病毒71型感染的新靶点及应用。
技术介绍
肠道病毒71型（enterovirus71，EV71)属于小核糖核酸病毒科肠道病毒属人肠 道A类病毒，是导致手足口病（Hand-foot-mouthdisease,HFMD)的主要病原体之一。目 前，手足口病在世界多个地区暴发并流行，尤其是亚太地区。在我国，自2008年几大省市 暴发手足口病疫情以来，该病的感染人数和死亡率一直居高不下，每年报告发病数超过100 万例，死亡数近1000例。手足口病主要发病人群为5岁以下婴幼儿，临床表现为发热，手、 足、臀部以及口腔粘膜等部位出现疱疹等症状；少数患儿可发展为重症患者，出现中枢神 经系统（centralnervoussystem，CNS)病变，包括无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脑脊髓炎以 及神经源性肺水肿等，严重威胁着婴幼儿的生命健康。手足口病特别是重症病 例多由肠道病毒71型（EV71)感染所致。然而，目前关于EV71引起手足口病的治疗尚无特 异高效的抗病毒药物，临床上仍以对症治疗为主，在预防方面也无有效疫苗问世。EV71感染具有嗜神经性，易造成严重的CNS疾病及其并发症，这也是导致手足口 病患者发展为重症甚至死亡的主要原因。其中，脑干是最易被EV71感染的部位，研究证实在EV71重症患者的脑干神经元等部位均能够 检测到EV71基因及抗原的存在，证明EV71能进入CNS。EV71经血液循环感染CNS需要穿越 血脑屏障，然而病毒如何穿过血脑屏障侵入CNS的机制还不清楚。血脑屏障（BloodBrain Barrier，BBB)是位于循环系统和中枢神经系统之间一道主要的屏障，它限制着不同物质在 两个部位之间的自由运输，对维持CNS的体内平衡以及保护CNS免受外界病原微生物的侵 袭中起着至关重要的作用。血脑屏障是由无窗孔的脑微 血管内皮细胞及其间的紧密连接、星形胶质细胞足突、细胞基膜和周细胞共同组成的一个 细胞复合体。在这个细胞复合体中，最主要的物质结构基础是脑微血管内皮细胞（Brain MicrovascularEndothelialCells，BMECs)及其紧密连接，其严整性的丢失被认为是病毒 感染致脑组织损伤的一个重要原因。因此，探明EV71感染BMECs的机制并以此寻找新的 抗病毒靶点，对于保护血脑屏障的功能，以及防治EV71所导致的中枢神经系统感染至关重 要。 在病毒感染宿主细胞的过程中，一系列广泛的宿主细胞信号通路会被激活。这 些信号通路可以为病毒所利用，从而实现病毒自身有效的入侵、复制、释放等生命过 程。随着研究的深入，这些被病毒利用的信号激酶分子已成为抗病毒治疗的重要靶 标。研究表明，EV71感染需利用多条信号通路及其调控系统，如在感染早期与受体作 用后，通过激活Rho家族分子来调节细胞骨架系统，促进病毒侵入（HussainKMl，Leong KL,NgMM,ChuJJ.Theessentialroleofclathrin-mediatedendocytosisinthe infectiousentryofhumanenterovirus71.JBiolChem. 2011 ；286(1):309-21.)； 激活P13K/Akt和MAPK/ERK信号通路，促进病毒进一步增殖并引发炎症反应；通过刺 激细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclindependentkinase5，Cdk5)途径来诱导细胞 凋亡等(TungWH,HsiehHL,YangCM.Enterovirus71inducesC0X_2expressionvia MAPKs,NF-kappaB,andAP-linSK-N-SHcells:RoleofPGE(2)inviralreplication. CellSignal. 2010, 22 (2) :234-46.)。然而，目前关于EV71感染BMECs所引发的信号通路 及所利用的信号调节分子仍不清楚。 蛋白酪氨酸激酶（proteintyrosinekinase，PTK)及其调节分子是重要的 细胞信号转导激酶，能够调节多种细胞生理功能，同时也被证实参与调节多种病毒对 宿主细胞的感染过程（PelkmansL，FavaE，GrabnerH，HannusM，etal.Genome-wide analysisofhumankinasesinclathrin-andcaveolae/raft-mediatedendocytosis. Nature. 2005, 436 (7047) : 78-86.)。如受体酪氨酸激酶衔接蛋白Grb2主要调节下游 信号ERK通路以及PI3K/Akt通路，参与调节了鼠白血病病毒MLV的感染过程（Chen Z,KolokoltsovAA,WangJ,etal.GRB2interactionwiththeecotropicmurine leukemiavirusreceptor,mCAT-l,controlsvirusentryandisstimulatedbyvirus binding.JVirol. 2012, 86 (3) : 1421-32.)。衔接相关蛋白复合物API(adaptor-related proteincomplex1)能够偶联酪氨酸激酶信号，调节内吞以及高尔基体转运功能。促细胞 分裂原磷酸化蛋白DAB(mitogen-responsivephosphoprotein)能够与受体酪氨酸激酶衔 接蛋白Grb2作用后调节Ras信号通路。CBL泛素连接酶能够与多种酪氨酸磷酸化分子作 用介导了蛋白的泛素化降解。Ezrin蛋白可通过酪氨酸激酶信号调节细胞微管系统，继而 调节了细胞黏附与迀徙等生理过程；Ezrin蛋白也被证实参与了丙型肝炎病毒感染肝细胞 的过程（BukongTN,KodysK,SzaboG.Humanezrin-moesin-radixinproteinsmodulate hepatitisCvirusinfection.Hepatology. 2013, 58(5):1569-79.)〇酪氨酸激酶FYN(FYNproto-oncogene,Srcfamilytyrosinekinase)属于 非受体型Src家族酪氨酸激酶分子（GeneAccession:NM_153048)，广泛表达于各种组织 细胞中，尤其是在脑组织中高表达。FYN参与调节多种细胞生理功能以及细胞癌变的过 程。研究发现FYN也参与了多种病毒的感染过程，如柯萨奇病毒在感染宿主细胞时需激 活FYN来完成有效入侵（CoyneCB，BergelsonJM.Virus-inducedAblandFYNkinase signalspermitcoxsackievirusentrythroughepithelialtightjunctions. Cell. 2006, 124(1) :119-31.) 〇胚胎FYN相关底物EFS(EmbryonalFYN-associatedsubstrate)为酪氨酸 激酶FYN的相关衔接蛋白（GeneAccession:NM_005864)它能够结合Src家族酪氨酸 激酶的SH3结构域从而介本文档来自技高网...
【技术保护点】
胚胎FYN相关底物EFS在制备预防或治疗肠道病毒71型感染药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱勇喆，戚中田，徐庆强，赵平，陈生林，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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